劉子禎 姜蕊 許冬瑾

摘 要 目的：建立不同產(chǎn)地五味子制醋五味子配方顆粒的特征圖譜，并測(cè)定其中5種成分的含量。方法：采用高效液相色譜法（HPLC）。色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18，流動(dòng)相為乙腈-水（梯度洗脫），柱溫為30 ℃，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm，進(jìn)樣量為10 ?L。以五味子醇甲為參照，繪制19批醋五味子配方顆粒的HPLC特征圖譜;采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)并確定共有峰;采用相同方法測(cè)定五味子醇甲、五味子醇乙、當(dāng)歸?；昝仔罤、五味子甲素、五味子乙素的含量。結(jié)果：19批醋五味子配方顆粒共有8個(gè)共有峰，相似度均在0.996以上;共指認(rèn)五味子醇甲、為五味子醇乙、當(dāng)歸?；昝仔罤、五味子甲素、五味子乙素等5個(gè)共有峰。五味子醇甲、五味子醇乙、當(dāng)歸?；昝仔罤、五味子甲素、五味子乙素檢測(cè)進(jìn)樣量的線性范圍分別為0.030～0.380、0.016～0.195、0.009～0.115、0.006～0.078、0.011～0.138 μg（r>0.999）;精密度、穩(wěn)定性（24 h）、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均小于2%;平均加樣回收率分別為99.84%、99.54%、99.28%、100.03%、100.27%（RSD小于1.4%，n=9）。19批樣品中上述5種成分的平均含量分別為0.15%～0.36%、0.02%～0.16%、0.02%～0.06%、0.02%～0.08%、0.08%～0.17%，其中河北產(chǎn)樣品S18、S19中的5種成分總含量較高，S16、S17樣品總含量較低，RSD為42%，其余樣品（S1～S15）總含量的RSD為12%，低于河北產(chǎn)，以吉林產(chǎn)樣品含量較高。結(jié)論：所建特征圖譜及含量測(cè)定方法的專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于評(píng)價(jià)醋五味子配方顆粒的質(zhì)量;遼寧、吉林、黑龍江等3省產(chǎn)五味子制醋五味子配方顆粒的總含量波動(dòng)較河北省低，以吉林省產(chǎn)質(zhì)量最佳。

關(guān)鍵詞 醋五味子;配方顆粒;高效液相色譜法;特征圖譜;含量測(cè)定

ABSTRACT ? OBJECTIVE： To establish characteristic pattern of vinegar-processed product of Schisandra chinensis formula granules from different habitats， and to determine the contents of 5 components. METHODS： HPLC method was adopted. The determination was performed on Agilent ZORBAX SB-C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-water （gradient elution） at the flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was set at 30 ℃， and detection wavelength was set at 220 nm. The sample size was 10 ?L. Using schisandrin ?as reference， HPLC characteristic pattern of 19 batches of vinegar-processed ? ? ? ?S. chinensis formula granules was drawn. The similarity evaluation was performed with Similarity Evaluation System of TCM Chromatographic Fingerprints （2012 edition）， and common peaks were confirmed. The contents of schisandrin， schisandrol， angeloylgomisin H， schizandrin and deoxyschizandrin were determined by same method. RESULTS： There were 8 common peaks in 19 batches of vinegar-processed S. chinensis formula granules， and the similarities were all above 0.996; five of them were identified as schisandrin， schisandrol， angeloylgomisin H， schizandrin and deoxyschizandrin， respectively. The linear range of schisandrin， schisandrol， angeloylgomisin H， schizandrin and deoxyschizandrin were 0.030-0.380， 0.016-0.195， 0.009-0.115， 0.006-0.078 and 0.011-0.138 μg （r>0.999）， respectively. RSDs of precision， stability （24 h） and reproducibility tests were all lower than 2%. Average recoveries were 99.84%， 99.54%， 99.28%， 100.03%， 100.27%（RSD<1.4%，n=9）. Average contents of five components in 19 batches of samples were in the range of 0.15%-0.36%， 0.02%-0.16%， 0.02%-0.06%， 0.02%-0.08% and 0.08%-0.17%， respectively; among them， total contents of five components in sample S18 and S19 from Hebei province were relatively high， while those were relatively low in sample S16 and S17 （RSD=42%）; RSD of total content in other samples （S1-S15） was 12%， and was lower than that of Hebei province; total content of five components were higher in sample from Jilin province. CONCLUSIONS： Established characteristic pattern and method for the content determination are specific and reproducible， and can be used for the quality evaluation of vinegar-processed S. chinensis formula granules. The total content fluctuation of vinegar-processed product of S. chinensis formula granules from Liaoning， Jilin and Heilongjiang provinces is lower than that in Hebei province， and the quality of vinegar-processed ? ?S. chinensis formula granules from Jilin province is the best.

KEYWORDS ? Vinegar-processed Schisandra chinensis; Formula granules; HPLC; Characteristic pattern; Content determination

醋五味子是2020年版《中國(guó)藥典》（一部）的收載品種，為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.干燥成熟果實(shí)的醋制品[1]。醋五味子味酸、甘，性溫，歸肺、心、腎經(jīng)，具有收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心之功效，常用于治療內(nèi)熱消渴、心悸失眠等癥[1-2]?，F(xiàn)代研究表明，五味子主要含有木脂素、多糖、揮發(fā)油等化學(xué)成分，其中木脂素類成分是五味子發(fā)揮多種功效的有效成分，具有鎮(zhèn)靜催眠、降血脂、抗腫瘤、抗人類免疫缺陷病毒等作用[3-4]。有研究還發(fā)現(xiàn)，五味子中木脂素類成分以五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素為主，這4種成分與當(dāng)歸?；昝仔罤均具有降低肝炎患者血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶的作用，同時(shí)可顯著抑制15-脂氧合酶、環(huán)氧合酶1和環(huán)氧合酶2的活性，具有一定的抗炎作用[4-6]。其中，五味子醇甲為2020年版《中國(guó)藥典》（一部）收錄的五味子及其醋制品的唯一含量測(cè)定指標(biāo)成分[1]。

中藥配方顆粒是由中藥飲片經(jīng)提取、濃縮制成的、供中醫(yī)臨床配方用的顆粒劑[7]，由于其失去了傳統(tǒng)飲片的外觀性狀，用肉眼難以鑒別，其質(zhì)量也不易評(píng)價(jià)[8-10]。目前，關(guān)于醋五味子配方顆粒的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究主要以其有機(jī)酸類（如原兒茶酸、綠原酸）及木脂素類（如五味子甲素、五味子乙素）成分為評(píng)價(jià)指標(biāo)，且多集中于某單類成分中1種或2種化合物的含量測(cè)定分析[11-12]。然而，由于中藥成分復(fù)雜，單一指標(biāo)成分的含量測(cè)定難以評(píng)價(jià)配方顆粒的整體質(zhì)量，而多種指標(biāo)成分的含量測(cè)定則更為全面[4]。中藥特征圖譜是一種從整體上控制中藥質(zhì)量的方法，能夠反映中藥化學(xué)成分信息的全貌，既能鑒別成分類型，又能評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性[9-11]。因此，建立中藥配方顆粒的特征圖譜，能夠體現(xiàn)其化學(xué)特征信息，對(duì)其質(zhì)量控制具有重要意義，且目前也尚未有醋五味子配方顆粒特征圖譜的相關(guān)研究。基于此，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）建立了醋五味子配方顆粒的特征圖譜;同時(shí)，采用相同方法檢測(cè)了其中五味子醇甲、五味子醇乙、當(dāng)歸?；昝仔罤、五味子甲素、五味子乙素的含量，旨在為醋五味子配方顆粒的質(zhì)量評(píng)價(jià)及其應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有Waters 2695型Alliance HPLC儀及配套的G1311B型四元泵、G1367E型自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A型二極管陣列檢測(cè)器、G1330B型柱溫箱、Empower 2色譜工作站（美國(guó)Waters公司），島津20AT型HPLC儀及配套的2個(gè)LC-20AT型溶液傳輸泵、DGU-20A3 型真空脫氣機(jī)、SPD-M20A型二極管陣列檢測(cè)器、SIL-20A型自動(dòng)進(jìn)樣器、CTO-20A型柱溫度箱、CBM-20A型系統(tǒng)控制器、LC Solution Version 1.2中文工作站（日本Shimadzu公司），Agilent 1260 型HPLC儀及配套的G1311B型四元泵、G1367E型自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A型二極管陣列檢測(cè)器、G1330B型柱溫箱、Open LAB C.01.02色譜工作站（美國(guó)Agilent公司），Arium? Pro DI型超純水系統(tǒng)、BP 211D型十萬(wàn)分之一天平（德國(guó)Sartorius公司），F(xiàn)W80型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（天津泰斯特儀器有限公司），KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）等。

1.2 主在藥品與試劑

五味子醇甲對(duì)照品（批號(hào)110857-201815，純度99.7%）、五味子甲素對(duì)照品（批號(hào)110764-201915，純度99.5%）、五味子乙素對(duì)照品（批號(hào)110765-201813，純度99.1%）、五味子對(duì)照藥材（批號(hào)120922-201610）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;五味子醇乙對(duì)照品（批號(hào)ST05480120，純度≥98.0%）、當(dāng)歸酰基戈米辛H對(duì)照品（批號(hào)ST17510105，純度≥98.0%）均購(gòu)自上海詩(shī)丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司;糊精（批號(hào)20201206C）購(gòu)自曲阜市天利藥用輔料有限公司;乙腈、甲醇均購(gòu)自賽默飛世爾科技有限公司，均為色譜純;水為純化水。

19批五味子藥材，經(jīng)康美藥業(yè)股份有限公司質(zhì)量管理中心劉茂貴主任藥師鑒定為木蘭科植物五味子S. chinensis（Turcz.）Baill.的干燥成熟果實(shí)。上述藥材按2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則0213“醋蒸法”制得醋五味子飲片后[13]，再在康美藥業(yè)股份有限公司配方顆粒生產(chǎn)車間內(nèi)進(jìn)行提取、濃縮、干燥，制成19批醋五味子配方顆粒（編號(hào)S1～S19）。醋五味子配方顆粒及藥材來(lái)源信息見(jiàn)表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 特征圖譜的建立

2.1.1 色譜條件 以Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱，以乙腈（A）-水（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫（0～25 min，45%A→55%A;25～30 min，55%A→65%A;30～45 min，65%A→100%A），柱溫為30 ℃，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm，進(jìn)樣量為10 ?L。

2.1.2 對(duì)照溶液的制備 （1）取五味子對(duì)照藥材粉碎，取粉末（過(guò)三號(hào)篩）約10 g，精密稱定，置于錐形瓶中，加水50 mL，回流提取30 min，濾過(guò)，濾液蒸干。殘?jiān)蛹状?0 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率250 W，頻率20 kHz，下同）處理 30 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為對(duì)照藥材溶液。（2）另取五味子醇甲、五味子醇乙、當(dāng)歸?；昝仔罤、五味子甲素、五味子乙素對(duì)照品各適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度均為25 μg/mL的混合對(duì)照品溶液，于4 ℃下冷藏，備用。

2.1.3 供試品溶液的制備 取醋五味子配方顆粒，研細(xì)，取粉末0.5 g，置于錐形瓶中，加甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.1.4 陰性對(duì)照溶液的制備 取輔料糊精0.25 g，按“2.1.3”項(xiàng)下方法處理，取續(xù)濾液，作為陰性對(duì)照溶液。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 取“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)S1）適量，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，以五味子醇甲為參照，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，8個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均不高于0.2%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD均不高于1.2%（n=6），表明方法精密度良好。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取醋五味子配方顆粒（編號(hào)S1）適量，每份約0.5 g，共6份，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以五味子醇甲為參照，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，8個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均不高于0.3%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD均不高于1.5%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)S1）適量，分別于25 ℃下放置0、2、4、8、12、16、20、24 h時(shí)按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以五味子醇甲為參照，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，8個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均不高于0.6%（n=8），相對(duì)峰面積的RSD均不高于2.0%（n=8），表明供試品溶液于25 ℃下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.8 特征圖譜的建立 分別取19批醋五味子配方顆粒（編號(hào)S1～S19），約0.5 g，精密稱定，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》，以S1樣品圖譜為參照，采用中位數(shù)法，設(shè)置時(shí)間窗為0.4，生成醋五味子配方顆粒的對(duì)照?qǐng)D譜R（圖1）和19批醋五味子配方顆粒的疊加特征圖譜（圖2）。由圖1、圖2可知，19批醋五味子配方顆粒共有8個(gè)共有峰。

2.1.9 相似度評(píng)價(jià) 將19批醋五味子配方顆粒和五味子對(duì)照藥材[取“2.1.2（1）”項(xiàng)下對(duì)照藥材溶液，按同一色譜條件測(cè)得]的色譜圖導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度分析軟件（2012版）》，采用全譜峰匹配，以對(duì)照?qǐng)D譜R為參照，計(jì)算各樣品圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜的相似度。結(jié)果，各樣品圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜R的相似度均在0.996以上，表明生產(chǎn)工藝穩(wěn)定。五味子對(duì)照藥材與對(duì)照?qǐng)D譜R的相似度為0.999，表明對(duì)照?qǐng)D譜R能夠較全面地反映五味子對(duì)照藥材的化學(xué)特征信息。19批醋五味子配方顆粒和五味子對(duì)照藥材的相似度評(píng)價(jià)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.1.10 共有峰指認(rèn) 19批醋五味子配方顆粒共有8個(gè)共有峰，通過(guò)與混合對(duì)照品[圖3，取“2.1.2（2）”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按同一色譜條件測(cè)得]對(duì)比，共指認(rèn)出5個(gè)共有峰，分別為峰1（五味子醇甲）、峰4（五味子醇乙）、峰5（當(dāng)歸?；昝仔罤）、峰6（五味子甲素）、峰8（五味子乙素）。其中，峰1的響應(yīng)最強(qiáng)，且該峰所對(duì)應(yīng)的成分五味子醇甲為2020年版《中國(guó)藥典》（一部）醋五味子含量測(cè)定項(xiàng)的指標(biāo)成分[1]，故以峰1為參照，計(jì)算其他共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，結(jié)果見(jiàn)表3、表4。

由表3、表4可知，各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間均在其均值的±5%內(nèi)，且波動(dòng)較?。≧SD小于1%）。因此，各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的均值可作為醋五味子配方顆粒特征圖譜的規(guī)定值，且規(guī)定其波動(dòng)在±5%內(nèi)[14]。共有峰的相對(duì)峰面積波動(dòng)較大（RSD超過(guò)15%），尤其是峰6（五味子甲素）、峰7、峰8（五味子乙素），表明在假設(shè)所有樣品中峰1峰面積相同的條件下，峰6、峰7、峰8所對(duì)應(yīng)的成分含量值的離散程度均較大。

2.2 五味子醇甲等5種成分的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 同“2.1.1”項(xiàng)下。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 （1）取五味子醇甲、五味子醇乙、當(dāng)歸?；昝仔罤、五味子甲素、五味子乙素對(duì)照品各適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為15.2、7.8、4.6、3.1、5.5 μg/mL的混合對(duì)照品溶液，于4 ℃下冷藏，備用。（2）另取上述5種對(duì)照品18.48、6.32、3.26、3.14、9.33 mg，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為1 848、632、326、314、933 μg/mL的單一對(duì)照品溶液，于4 ℃下冷藏，備用。

2.2.3 對(duì)照藥材、供試品和陰性對(duì)照溶液的制備 分別同“2.1.2（1）”“2.1.3”“2.1.4”項(xiàng)下。

2.2.4 專屬性考察 取上述對(duì)照藥材溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液和“2.2.2（2）”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液各適量，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，五味子對(duì)照藥材、供試品、混合對(duì)照品色譜圖的基線均平穩(wěn)，色譜峰分離度、對(duì)稱性良好，供試品中各色譜峰與對(duì)照品各對(duì)應(yīng)色譜峰的保留時(shí)間基本相同，且陰性對(duì)照無(wú)干擾。五味子對(duì)照藥材等4種溶液的高效液相色譜見(jiàn)圖4。

2.2.5 線性關(guān)系考察 取“2.2.2（1）”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣2、4、8、15、20、25 ?L，記錄峰面積。以各待測(cè)成分進(jìn)樣量（X，?g）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表5。

2.2.6 檢測(cè)限與定量限考察 取“2.2.2（2）”項(xiàng)下單一對(duì)照品溶液，用甲醇稀釋，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，以信噪比3 ∶ 1、10 ∶ 1分別計(jì)算檢測(cè)限和定量限。結(jié)果，五味子醇甲、五味子醇乙、當(dāng)歸酰基戈米辛H、五味子甲素、五味子乙素的檢測(cè)限分別為0.001 0、0.000 9、0.000 8、0.000 8、0.000 8 ?g，定量限分別為0.002 8、0.002 9、0.002 0、0.001 7、0.002 3 ?g。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 取“2.2.2（1）”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，五味子醇甲、五味子醇乙、當(dāng)歸酰基戈米辛H、五味子甲素、五味子乙素峰面積的RSD分別為0.03%、0.17%、0.06%、0.10%、0.09%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取醋五味子配方顆粒（編號(hào)S1），每份約0.5 g，共6 份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算樣品中各待測(cè)成分的含量。結(jié)果，五味子醇甲、五味子醇乙、當(dāng)歸?；昝仔罤、五味子甲素、五味子乙素含量的RSD分別為0.84%、1.01%、1.97%、1.32%、1.28%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)S1），分別于25 ℃下放置0、2、4、8、12、16、20、24 h時(shí)按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，五味子醇甲、五味子醇乙、當(dāng)歸?；昝仔罤、五味子甲素、五味子乙素峰面積的RSD分別為0.24%、0.16%、1.26%、0.63%、0.30%（n=8），表明供試品溶液于25 ℃下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.10 加樣回收率試驗(yàn) 取醋五味子配方顆粒（編號(hào)S1），研細(xì)（過(guò)三號(hào)篩），取粉末，每份約0.5 g，共9份，分別精密加入“2.2.2（2）”項(xiàng)下各單一對(duì)照品溶液適量（加入量約為S1樣品中待測(cè)成分已知量的0.8、1、1.2倍），自然揮干，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表6。

2.2.11 耐用性試驗(yàn) 精密取醋五味子配方顆粒（編號(hào)S1），研細(xì)（過(guò)三號(hào)篩），取粉末約0.5 g，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件以不同HPLC儀（Waters 2695型、島津20AT型、Agilent 1260 型HPLC儀）、不同品牌色譜柱（Waters Symmetry C18、Kromasil 100-5 C18、Agilent ZORBAX SB-C18;規(guī)格均為250 mm×4.6 mm，5 μm）、不同流速（0.8、1.0、1.2 mL/min）進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，各待測(cè)成分峰面積的RSD均小于10%（n=6），符合2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則9101的有關(guān)規(guī)定[13]。

2.2.12 樣品含量測(cè)定 取19批醋五味子配方顆粒適量，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算樣品中各待測(cè)成分的含量。各樣品平行測(cè)定3次，取平均值，結(jié)果見(jiàn)表7。

3 討論

3.1 樣品制備與色譜條件篩選

本課題組前期對(duì)不同溶劑（水、70%乙醇、稀乙醇、甲醇、50%甲醇）的提取效果進(jìn)行了考察。結(jié)果，以甲醇超聲提取30 min時(shí)所得色譜峰較多，故選擇甲醇為提取溶劑。同時(shí)，本課題組又對(duì)不同流動(dòng)相（甲醇-水、乙腈-水）體系的分離效果進(jìn)行了比較。結(jié)果，與甲醇-水相比，以乙腈-水為流動(dòng)相分離所得色譜峰的保留時(shí)間更短、系統(tǒng)壓力更小，故選擇乙腈-水為流動(dòng)相。此外，本課題組進(jìn)行了200～400 nm全波長(zhǎng)掃描，發(fā)現(xiàn)當(dāng)檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm時(shí)，色譜峰數(shù)量最多，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。

3.2 特征圖譜及相似度結(jié)果分析

本研究建立的醋五味子配方顆粒特征圖譜，專屬性強(qiáng)、穩(wěn)定性高，適用于不同產(chǎn)地原料所制醋五味子配方顆粒的分析。本研究從19批醋五味子配方顆粒的HPLC特征圖譜中確定了8個(gè)共有峰，通過(guò)與混合對(duì)照品進(jìn)行對(duì)比，共指認(rèn)出其中5個(gè)共有峰，分別為五味子醇甲、五味子醇乙、當(dāng)歸?；昝仔罤、五味子甲素、五味子乙素。此外，本研究中的個(gè)別共有峰的相對(duì)峰面積波動(dòng)較大，如五味子甲素和五味子乙素，這可能與種植采收過(guò)程有關(guān)[15]，但仍有待后續(xù)進(jìn)一步研究。19批醋五味子配方顆粒特征圖譜、五味子對(duì)照藥材圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜的相似度均超過(guò)0.996，表明對(duì)照?qǐng)D譜能夠較全面地反映對(duì)照藥材的化學(xué)特征信息，且遼寧、吉林、黑龍江、河北產(chǎn)五味子藥材的化學(xué)成分信息相似。

3.3 含量測(cè)定結(jié)果分析

含量測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，S18、S19樣品中5種成分總含量整體較高，而S16、S17樣品總含量整體較低，這4批樣品的藥材均來(lái)自河北省唐山市，且4批樣品中5種成分總含量的RSD約為42%，提示河北產(chǎn)五味子藥材的質(zhì)量不穩(wěn)定，可能與采收期、加工方式有關(guān)[16]。其余樣品（編號(hào)S1～S15）藥材產(chǎn)地來(lái)自遼寧、吉林、黑龍江省，5種成分總含量的RSD約為12%，明顯低于河北省，表明遼寧、吉林、黑龍江產(chǎn)五味子藥材中5種成分總含量相對(duì)穩(wěn)定，可能與這3省均是我國(guó)五味子的主產(chǎn)地、道地產(chǎn)區(qū)有關(guān)[17]。上述成分總含量由高到低依次為吉林延邊產(chǎn)樣品（編號(hào)S7～S9）≈吉林通化產(chǎn)樣品（編號(hào)S4～S6）>黑龍江牡丹江產(chǎn)樣品（編號(hào)S10～S12）、遼寧本溪產(chǎn)樣品（編號(hào)S1～S3）>黑龍江黑河產(chǎn)樣品（編號(hào)S13～S15）;且吉林延邊產(chǎn)樣品（編號(hào)S7～S9）、吉林通化產(chǎn)樣品（編號(hào)S4～S6）中5種成分總含量的均值較高，黑龍江黑河產(chǎn)樣品（編號(hào)S13～S15）中5種成分總含量的均值較低。此外，19批醋五味子配方顆粒的制備工藝、設(shè)備均相同，但所含的5種成分含量波動(dòng)較大，在特征圖譜峰面積也有所體現(xiàn)，這可能與原料藥材的種植、采收、加工有關(guān)，有待后續(xù)進(jìn)一步研究。

綜上所述，所建特征圖譜及含量測(cè)定方法的專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于評(píng)價(jià)醋五味子配方顆粒的質(zhì)量;遼寧、吉林、黑龍江等3省產(chǎn)醋五味子配方顆粒的總含量波動(dòng)較河北省低，以吉林省產(chǎn)質(zhì)量最佳。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S]. 2020年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2020：68.

[ 2 ] 衛(wèi)生部藥政管理局.全國(guó)中藥炮制規(guī)范[S]. 1988年版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1988：127.

[ 3 ] 馬艷春，馮天甜，韓宇博，等.五味子的化學(xué)成分和藥理研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2020，48（11）：67-71.

[ 4 ] 陳舒妤，石婧婧，鄒立思，等. UFLC-Q-Trap-MS/MS同時(shí)測(cè)定五味子中木脂素及有機(jī)酸類成分[J].中國(guó)中藥雜志，2018，43（10）：2104-2111.

[ 5 ] ZHOU Y，MEN L H，SUN Y X，et al. Pharmacodynamic effects and molecular mechanisms of lignans from Schisandra chinensis Turcz.（Baill.），a current review[J].Eur J Pharmacol，2021，892：173796.

[ 6 ] SZOPA A，DZIURKA M，WARZECHA A，et al. Targeted lignan profiling and anti-inflammatory properties of Schisandra rubriflora and Schisandra chinensis extracts[J].Molecules，2018，23（12）：3103.

[ 7 ] 李學(xué)林，王柯涵，康歡，等.基于HPLC指紋圖譜的黃柏配方顆粒湯劑與標(biāo)準(zhǔn)湯劑、傳統(tǒng)湯劑對(duì)比研究[J].中草藥，2020，51（1）：91-100.

[ 8 ] 劉禎，喻錦揚(yáng)，周杰.中藥配方顆粒上市后風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)體系現(xiàn)狀調(diào)查與分析[J].中國(guó)藥物警戒，2019，16（8）：473- 477.

[ 9 ] 李漢成，鄧仙梅，彭孝鵬.中藥配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)化研究現(xiàn)狀分析[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2017，24（7）：11-14.

[10] CHEN Y，JIANG E C，YAN J Z，et al. Validation of an ? analytical method using UPLC-MS/MS to quantify four bioactive components in rat plasma and its application to pharmacokinetic study of traditional and dispensing gra- nules decoction of Ziziphi Spinosae Semen[J]. Biomed Chromatogr，2020，34（4）：e4797.

[11] 周燕園. HPLC測(cè)定醋五味子配方顆粒中的原兒茶酸和綠原酸[J].華西藥學(xué)雜志，2014，29（6）：688-690.

[12] 葉綠萍，黃志儉，劉小意，等.北五味子配方顆粒中五味子甲素及乙素的含量測(cè)定[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2011，32（8）：67-69.

[13] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：四部[S]. 2020年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2020：31，480.

[14] 國(guó)家藥典委員會(huì).有關(guān)中藥配方顆粒藥品標(biāo)準(zhǔn)制定的通知[EB/OL]. [2021-02-24]. https：//www.chp.org.cn/gjydw/tz/15815.jhtml.

[15] 李鉑，唐志書，許洪波，等.不同成熟期北五味子質(zhì)量初步評(píng)價(jià)[J].中成藥，2020，42（11）：3084-3087.

[16] 安開(kāi)龍.五味子主要化學(xué)成分積累動(dòng)態(tài)及其加工方法研究[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2014.

[17] 殷軍.東北道地藥材：五味子[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2012：2-4.

（收稿日期：2021-01-21 修回日期：2021-05-13）

（編輯：陳 宏）