胡紅剛, 張芬 (江西省醫(yī)療器械檢測中心,江西 南昌 330047)

0 引言

聚酯（PET），全稱聚對苯二甲酸乙二醇酯（polyethylene terephthalate），俗稱滌綸樹脂。它是對苯二甲酸與乙二醇的縮聚物，與PBT一起統(tǒng)稱為熱塑性聚酯，或飽和聚酯。由于PET具有良好的透明性、光澤度及阻氣性的特點(diǎn)，被廣泛用于食品、藥品、醫(yī)療器械等產(chǎn)品的包裝。PET的合成制備方法分為DMT法（酯交換法）和PTA法（直接酸法），目前，工業(yè)生產(chǎn)主要采用PTA法。PTA法就是用對苯二甲酸（PTA）與乙二醇在一定壓力下直接酯化生成BHET，然后在催化劑作用下真空縮聚生成PET。合成過程中由于工藝條件的影響，PET成品中可能存在游離對苯二甲酸（PTA）。而對苯二甲酸（PTA）屬低毒類物質(zhì)，對皮膚和粘膜有一定的刺激作用。對過敏癥者，接觸本品可引起皮疹和支氣管炎。因此，對于聚酯包裝材料中對苯二甲酸（PTA）的量應(yīng)嚴(yán)格控制[1]。

1 儀器與試劑

儀器設(shè)備：UV-2550紫外可見分光光度計(jì)（Shimadzu Corporation），島 津LC-2010AHT液 相 色 譜 儀（Shimadzu Corporation），ClASS- VP化學(xué)工作站，DAD檢測器，四元梯度泵，Sartorius BP211D精密電子天平（德國Sartorius Corporation）。

試劑試藥：對苯二甲酸對照品（Acros Organics Corporation，批號：A0230131，純度：99%以上），超純水（去離子水經(jīng)0.45 μm濾膜濾過），甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

聚酯藥用滴眼劑瓶：江西金泰醫(yī)藥包裝材料有限責(zé)任公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Venusil MP C18色譜柱（4.6 mm×250 mm），甲醇-水（用冰乙酸調(diào)節(jié)pH為3.0）（60：40），流速：0.8 mL/min，檢測波長：240 nm，柱溫：25 ℃。在該色譜條件下，對苯二甲酸色譜峰與空白溶劑色譜峰分離較好，且按對苯二甲酸的色譜峰計(jì)算，理論塔板數(shù)不低于3 000[2]。

2.2 對照品及供試品溶液的制備

2.2.1 對照品儲備液

精密稱取對苯二甲酸對照品9.89 mg，置100 mL量瓶中，加0.1%氫氧化鈉水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL的量瓶中，加0.1%氫氧化鈉水溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。（濃度為9.89 μg/mL）

2.2.2 樣品溶液的制備

取聚酯瓶10個，剪碎（碎片小于0.02 g），按滴眼劑瓶裝量（6 mL）加0.1%氫氧化鈉水溶液60 mL，超聲10 min使溶解，放冷至室溫，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 對苯二甲酸線性關(guān)系考察

取上述對苯二甲酸對照品溶液（濃度為9.89 μg/mL），分別精密吸取5、10、20、30 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以對苯二甲酸對照品的進(jìn)樣量（Cng）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，作線性回歸，得回歸方程：A=8 795C-3 029.3（r2= 1，n = 4），結(jié)果如表1所示。

表1 對苯二甲酸線性范圍測定結(jié)果

結(jié)果表明：進(jìn)樣量在49.45～296.7 ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度實(shí)驗(yàn)

取上述對苯二甲酸對照品溶液（濃度為9.89 μg/mL），精密吸取20 μL注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖及峰面積，結(jié)果如表2所示。

表2 對苯二甲酸進(jìn)樣精密度測定結(jié)果

結(jié)果表明：儀器精密度良好。

2.3.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取樣品，共5份（每份10瓶），照2.2.2樣品溶液的制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，計(jì)算樣品中對苯二甲酸溶出量，測定結(jié)果如表3所示。

表3 對苯二甲酸重復(fù)性測定結(jié)果

結(jié)果表明：采用該方法測定對苯二甲酸含量，重現(xiàn)性較好。

2.3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取上述對苯二甲酸對照品溶液（濃度為9.89 μg/mL），精密吸取20 μL注入高效液相色譜儀，分別于0、2、4、6、8、12 h測定一次，記錄色譜圖，結(jié)果如表4所示。

表4 溶液穩(wěn)定性考察結(jié)果

結(jié)果表明：樣品溶液的峰面積在12 h內(nèi)無明顯變化，說明本品溶液穩(wěn)定性較好，適合常規(guī)定量分析。

2.3.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量（1.187 μg/瓶）的同一樣品5份（每份10瓶），剪碎（碎片小于0.02 g），分別精密加入0.1%氫氧化鈉水溶液50 mL，然后再精密加入對苯二甲酸對照品溶液（濃度為0.989 μg/mL）10 mL，照2.2.2樣品溶液的制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，計(jì)算含量，測定結(jié)果如表5所示。

表5 對苯二甲酸溶出量回收率測定結(jié)果

計(jì)算公式：

結(jié)果：采用本法測定聚酯藥用滴眼劑瓶中對苯二甲酸的溶出量的回收率為98.69%～102.02%，平均回收率為100.40%，RSD=1.34%，表明測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

應(yīng)用紫外可見分光光度計(jì)在190～400 nm波長范圍內(nèi)對對苯二甲酸（濃度為9.89 μg/mL的0.1%氫氧化鈉水溶液）進(jìn)行掃描，可以看出，對苯二甲酸對照品在238 nm的波長處有最大吸收，再結(jié)合其它參考文獻(xiàn)資料，我們最終選擇檢測波長為240 nm。

3.2 空白輔料干擾實(shí)驗(yàn)

取0.1%氫氧化鈉水溶液適量，放于適宜玻璃瓶中，按正文中供試品溶液的制備方法制得空白對照溶液，取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明本品的空白對照溶液對對苯二甲酸的測定無干擾。

3.3 流動相與色譜柱的選擇

本試驗(yàn)參考相關(guān)文獻(xiàn)資料[1,2]對苯二甲酸的含量測定項(xiàng)下所使用的流動相，通過試驗(yàn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)對苯二甲酸的理論塔板數(shù)均在3 000以上，峰型也較好。此外，還對3種色譜柱進(jìn)行比較，在該色譜條件下，Diamonsil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm）、Zorbax SB-C18色譜柱（4.6 mm×200 mm）和Venusil MP C18色譜柱（4.6 mm×250 mm）與空白溶劑色譜峰分離度均較好，理論塔板數(shù)均在3 000以上。

3.4 提取溶劑的選擇

對苯二甲酸溶于堿溶液，微溶于熱乙醇，不溶于水、乙醚、冰醋酸及三氯甲烷，故考慮采用堿溶液提取。查文獻(xiàn)資料，滴眼液一般采用氫氧化鈉溶液和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值，比較對苯二甲酸在0.1%氫氧化鈉水溶液和0.1%碳酸氫鈉水溶液的溶解度，試驗(yàn)結(jié)果顯示，對苯二甲酸在0.1%氫氧化鈉水溶液中溶解度較大（10 mg對苯二甲酸在50 mL0.1%氫氧化鈉水溶液中，輕微振搖即可溶解），故最終采用0.1%氫氧化鈉水溶液作為溶劑。

3.5 提取方式的選擇

分別采用121 ℃濕熱滅菌30 min和超聲30 min兩種方式進(jìn)行提取，結(jié)果顯示，采用這兩種方式進(jìn)行提取，樣品中對苯二甲酸的溶出量基本一致，考慮到超聲的方式操作更簡便，故最終決定采用超聲提取。

3.6 超聲時間選擇

取樣品，依法分別超聲10、20、30 min，結(jié)果顯示，超聲10 min和超聲30 min，樣品中對苯二甲酸的含量無明顯區(qū)別，說明對苯二甲酸在超聲10 min的情況下已經(jīng)基本溶出，本著節(jié)約的原則，最終確定該樣品超聲時間為10 min。

4 結(jié)語

本研究建立了聚酯藥用滴眼劑瓶中對苯二甲酸含量HPLC檢測方法，該方法科學(xué)合理、可操作性強(qiáng)、重復(fù)性好、結(jié)果準(zhǔn)確、易于掌握，可為生產(chǎn)企業(yè)和質(zhì)量檢測機(jī)構(gòu)提供檢測依據(jù)。