石 晶，劉桂蘭

(黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院·黑龍江 哈爾濱 150036)

外陰鱗狀上皮增生是以良性增生為主的外陰疾病，以外陰瘙癢為主要表現(xiàn)，惡變率為2%～5%[1]。目前其病因尚不完全清楚，普遍認(rèn)為該病為多因素致病，激素變化、自身免疫障礙、酶的改變、局部刺激因素、細(xì)胞增殖、感染、遺傳等與本病的發(fā)生有關(guān)[2]，已成為婦科常見(jiàn)的難治之癥。

HLA系統(tǒng)是目前所知人體最復(fù)雜的多態(tài)系統(tǒng)，與惡性腫瘤、自身免疫性疾病等多種疾病的遺傳易感性有密切的關(guān)系。近年來(lái)國(guó)外關(guān)于HLA基因多態(tài)性的相關(guān)報(bào)道，與外陰硬化性苔癬的相關(guān)性較多，但與外陰鱗狀上皮增生的關(guān)系卻未見(jiàn)報(bào)道。本項(xiàng)研究主要目的是探討免疫遺傳因素在外陰鱗狀上皮增生中的作用，為本病的病因和臨床治療提供理論基礎(chǔ)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選自2005年1月—2013年12月于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬一院、二院、哈爾濱242醫(yī)院、黑龍江省中醫(yī)醫(yī)院及黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬一院就診的病歷資料完整的外陰鱗狀上皮增生患者共74例；中醫(yī)辨證為肝腎陰虛型[3]385-38836例，平均年齡(39.36±8.79)歲；肝經(jīng)濕熱型[3]364-37138例，平均年齡(37.08±9.49)歲；正常對(duì)照組選擇女性體檢健康者62例(選自合作單位哈醫(yī)大一院)作為正常對(duì)照組，平均年齡(40.30±11.72)歲。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 1)符合外陰鱗狀上皮增生的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；2)年齡在20～60 周歲；3)簽署知情同意者。排除標(biāo)準(zhǔn)：1)外陰上皮內(nèi)瘤樣病變或病理檢查確診為原位癌、浸潤(rùn)癌等；2)伴有其他免疫相關(guān)性疾病，如結(jié)締組織病、糖尿病、系統(tǒng)性紅斑性狼瘡等以及精神神經(jīng)疾病者。

2 方法

2.1 HLA-ABDRB1基因檢測(cè) 采取各組外周靜脈血，抗凝，提取白細(xì)胞，提取人類(lèi)基因組DNA；PCR 擴(kuò)增反應(yīng)，進(jìn)入循環(huán)程序，共計(jì)34個(gè)循環(huán)。

2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件四格表χ2檢驗(yàn)公式計(jì)算，當(dāng)理論頻數(shù)<5時(shí)，使用Fisher精確概率檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 HLA-B*15 等位基因 HLA-B*15等位基因出現(xiàn)頻率在肝腎陰虛及肝經(jīng)濕熱兩組中明顯高于正常對(duì)照組，有顯著差異(P<0.01)，見(jiàn)表1。

3.2 HLA-B*40等位基因 HLA-B*40等位基因出現(xiàn)頻率在肝腎陰虛及肝經(jīng)濕熱兩組中明顯低于正常對(duì)照組，與正常對(duì)照組相比有顯著差異(P<0.01)，見(jiàn)表1。

3.3 HLA-DRB1*12等位基因 HLA-DRB1*12等位基因在肝經(jīng)濕熱型鱗狀上皮組(B組)出現(xiàn)頻率高，與對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.01)，見(jiàn)表1。

3.4 HLA-A*02等位基因 HLA-A*02基因在出現(xiàn)頻率A組(肝腎陰虛型)中明顯低于對(duì)照組，具有顯著性差異(P<0.01)，見(jiàn)表1。

表1 不同中醫(yī)辨證與HLA-ABDRB1基因多態(tài)性(例)

組別例數(shù)B08B13B15B18B27B35B37B38B40B44B46正常組622126064003084肝腎陰虛364814**004224**22肝經(jīng)濕熱3801214**2410004**20

組別例數(shù)B48B49B50B51B52B54B55B56B57B58B67正常組62400102602640肝腎陰虛36020461020220肝經(jīng)濕熱38200140220222

組別例數(shù)DR01DR03DR04DR07DR08DR09DR10DR11DR12DR13DR14DR15DR16正常組62612161601221012128162肝腎陰虛36201442122686480肝經(jīng)濕熱3840264160222**4662

4 討論

本課題組前期研究在對(duì)231 例中國(guó)漢族女性外陰白色病變患者(其中外陰硬化性苔蘚123 例，外陰鱗狀上皮增生92 例)中醫(yī)證侯分布特征的調(diào)查研究結(jié)果顯示，肝經(jīng)濕熱型(42 例)占外陰鱗狀上皮增生的45.65%；肝腎陰虛型(38 例)占外陰鱗狀上皮增生總?cè)藬?shù)的41.30%；由此可見(jiàn)，肝經(jīng)濕熱型居首位，該證型可能與外陰鱗狀上皮增生密切相關(guān)，原因可能是下焦多潮濕，且濕郁容易化熱，同時(shí)由于飲食結(jié)構(gòu)的改變，喜食煎炸油膩之品，并缺乏運(yùn)動(dòng)，從而易釀濕生熱，濕熱循經(jīng)下注，則出現(xiàn)帶下色黃臭穢，從而出現(xiàn)陰部瘙癢，且瘙癢較重。這也與外陰鱗狀上皮增生患者瘙癢癥狀較重相吻合。

人類(lèi)白細(xì)胞抗原(Human Leukocyte Antigen，HLA)即主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex，MHC)，整個(gè)基因組已被測(cè)序，其基因圖已于1999年發(fā)表在Nature雜志上[5]。許多HLA基因包含大量的多個(gè)等位基因，且高度多態(tài)性，使其成為迄今為止已知的最復(fù)雜的人類(lèi)基因綜合體。HLA復(fù)合體位于人類(lèi)第6號(hào)染色體短臂6p21.31上，其中有128個(gè)為功能性基因(具有表達(dá)產(chǎn)物)，具有豐富的多基因性和多態(tài)性特征[6]。HLA系統(tǒng)在128個(gè)功能性基因中，與免疫系統(tǒng)有關(guān)的基因占39.8%，特別是Ⅱ類(lèi)區(qū)域中顯示與免疫相關(guān)的幾乎是所有的基因[7]。

目前國(guó)外關(guān)于外陰硬化苔蘚(VLS)與HLA基因多態(tài)性研究較多，在本課題組前期研究中發(fā)現(xiàn)外陰硬化苔蘚的易感基因是HLA-B*15、-DR*12；HLA-B*40等位基因是肝腎陰虛型的抗性基因，而與肝經(jīng)濕熱型VLS無(wú)相關(guān)性；與國(guó)外報(bào)道大致相吻合，但關(guān)于外陰鱗狀上皮增生與HLA基因多態(tài)性研究未見(jiàn)報(bào)道。本研究顯示外陰鱗狀上皮增生中醫(yī)證型為肝經(jīng)濕熱型相關(guān)的等位基因有：HLA-B*15、HLA-B*40、HLA-DR*12，易感基因?yàn)镠LA-B*15、HLA-DR*12，抗性基因是HLA-B*40。中醫(yī)證型為肝腎陰虛型相關(guān)的等位基因有：HLA-B*15、HLA-B*40、HLA-A*02；抗性基因?yàn)镠LA-A*02、HLA-B*40，其中HLA-A*02可能是標(biāo)志性抗性基因；易感基因?yàn)镠LA-B*15。

本研究提示：通過(guò)HLA基因檢測(cè)、篩查易感基因和抗性基因的方法應(yīng)該可以判斷外陰鱗狀上皮增生的易感人群，并根據(jù)等位基因HLA-A*02、HLA-B*15、HLA-B*40、HLA-DR*12進(jìn)行對(duì)照研究和判定分析其中醫(yī)體質(zhì)及辨證分型，對(duì)外陰鱗狀上皮增生的預(yù)防、早期診斷、中醫(yī)辨證分型及治療都具有重要的指導(dǎo)意義。由于本研究病例例數(shù)較少，具有一定的局限性，本課題組將進(jìn)一步進(jìn)行多中心大樣本研究，并重視檢測(cè)單倍型和低頻率基因位點(diǎn)，以及進(jìn)行外陰白色病變的家庭調(diào)查研究，并全面考慮影響因素，如基因連鎖不平衡等。