趙 艷 王萬里 李 賓

結(jié)直腸癌為臨床上非常常見的消化道惡性腫瘤，且發(fā)病人數(shù)逐年增加。當(dāng)前胃腸腫瘤外科治療水平取得了長足進(jìn)步，但結(jié)直腸癌5年生存率仍無顯著提高[1]。究其原因主要是因為手術(shù)以及化療后腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移導(dǎo)致了結(jié)直腸癌的治療失敗，特別是約50%中晚期進(jìn)展期結(jié)直腸癌患者根治術(shù)后死于轉(zhuǎn)移和(或)復(fù)發(fā)[2-3]。因此要提高結(jié)直腸癌患者的預(yù)后和生存期，在研究促進(jìn)結(jié)直腸癌病理進(jìn)展的因素和機(jī)制方面顯得極其重要。著分子生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，腫瘤標(biāo)志物已廣泛應(yīng)用于腫瘤診斷、病情監(jiān)測或預(yù)后判斷[4-5]。甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)是目前診斷肝癌最重要的腫瘤標(biāo)記物，能夠排除良性肝病及懷孕等因素的影響，已被廣泛用于肝癌的診斷，但是在結(jié)直腸癌中的診斷效應(yīng)還不明確[6-7]。癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)具有靈敏度高、特異性好、半衰期短等優(yōu)點(diǎn)，可協(xié)助腫瘤的分期和預(yù)后的判斷[8-9]。本文采用免疫組化技術(shù)，檢測了120例結(jié)直腸癌患者的病灶組織和癌旁正常結(jié)直腸黏膜組織中AFP和CEA的表達(dá)情況，并結(jié)合該患者主要的臨床病理特征參數(shù)，分析并探討結(jié)直腸癌患者AFP和CEA表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性，揭示兩者在結(jié)直腸癌中表達(dá)的相關(guān)性。為臨床上進(jìn)一步了解結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的生物學(xué)行為提供依據(jù)?，F(xiàn)總結(jié)報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

2017年2月至2020年4月選擇在本院進(jìn)行診治的結(jié)直腸癌患者120例作為研究對象，納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)手術(shù)后病理診斷證實為結(jié)直腸癌；具有完整的臨床資料；患者簽署了知情同意書；醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)了此次研究；年齡20～75歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：危重或患有嚴(yán)重心臟疾病的患者；臨床資料缺乏者；妊娠與哺乳期婦女；合并其他部位腫瘤者。

1.2 AFP和CEA的免疫組化分析

取所有患者的病灶組織標(biāo)本(病灶組)與正常結(jié)直腸黏膜組織標(biāo)本(距腫瘤邊緣≥5 cm，正常組)，經(jīng)4%甲醛固定，于濃度梯度酒精中脫水，二甲苯中浸潤觀察組織塊至透明為止。用石蠟Ⅰ(<60 ℃，1 h)浸潤、石蠟Ⅱ(60 ℃，2 h)包埋后制成石蠟組織塊，用石蠟切片機(jī)5 μm 厚度進(jìn)行連續(xù)切片，常規(guī)制片、封片。

采用免疫組化對標(biāo)本分別進(jìn)行AFP和CEA蛋白表達(dá)的檢測，抗AFP抗體和抗CEA抗體滴度分別為1∶200和1∶400。隨機(jī)計數(shù)5 個高倍鏡視野(×400)，統(tǒng)計陽性細(xì)胞數(shù)目和顯色度。陽性強(qiáng)度采用半定量法，按陽性細(xì)胞占癌細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)評分，結(jié)果觀察采用盲法。

1.3 病理資料調(diào)查

調(diào)查所有患者的臨床病理資料，包括性別、年齡、腫瘤位置、腫瘤最大直徑、組織分化程度、臨床分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。

1.4 統(tǒng)計方法

統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS 22.00統(tǒng)計軟件處理，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計數(shù)數(shù)據(jù)以百分比表示，對比方法為t檢驗與卡方χ2分析，相關(guān)性分析采用Spearman 等級相關(guān)性分析法，均采用雙側(cè)檢驗，檢驗水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 AFP和CEA表達(dá)陽性率對比

病灶組AFP和CEA表達(dá)陽性率分別為71.7%和78.3%，顯著高于正常組的6.7%和10.8%(P<0.05)，見表1。

表1 兩組AFP和CEA表達(dá)陽性對比(例，%)

2.2 臨床病理特征

在120例患者中，年齡≥54歲76例，<54歲44例；男性80例，女性40例；發(fā)病位置：結(jié)腸48例，直腸72例；腫瘤最大直徑≥4 cm 56例，<4 cm 64例；組織學(xué)分化：高、中分化70例，低分化50例；浸潤深度：漿膜層以下66例，漿膜或以外54例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：陽性68例，陰性52例；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移：陽性26例，陰性94例。

2.3 AFP和CEA表達(dá)與臨床病理特的相關(guān)性

在120例患者中，不同組織學(xué)分化、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的AFP和CEA表達(dá)陽性率對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 AFP和CEA表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系/例

2.4 AFP和CEA表達(dá)的相關(guān)性

AFP表達(dá)陽性的86例患者中，CEA表達(dá)陽性者78例，表達(dá)陰性8例。在34例 AFP表達(dá)陰性的標(biāo)本中，CEA 表達(dá)陽性16例，表達(dá)陰性18 例。見表3。Spearman 等級相關(guān)性分析顯示：AFP和CEA表達(dá)存在相關(guān)性(γ=0.477，P=0.013)。

表3 AFP、CEA在結(jié)直腸癌中表達(dá)的相關(guān)性/例

3 討論

結(jié)直腸癌在發(fā)病初期病情較隱匿，臨床確診時多已發(fā)展至中晚期，且常伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致死亡率比較高。早期發(fā)現(xiàn)和診斷結(jié)直腸癌，對患者的治療方式的選擇改善預(yù)后具有重要意義[10]。AFP是白蛋白家族成員之一，分子量約為68 kDa，共有590個氨基酸[11]。已有研究顯示AFP蛋白的過表達(dá)屬于病理狀態(tài)且與腫瘤細(xì)胞的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移密切有關(guān)，并對患者預(yù)后的評估起到重要的作用[12]。不過AFP的敏感性和特異性較差，并存在一定的假陽性情況。腫瘤標(biāo)志物是腫瘤組織和細(xì)胞由于癌基因異常表達(dá)所產(chǎn)生的抗原和活性物質(zhì)，包括抗原、抗癌基因、激素、受體等[13]。CEA屬于腫瘤細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)抗原，是具有人類胚胎抗原特異性決定簇的酸性糖蛋白。其作為1種非特異性腫瘤標(biāo)志物，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生癌變時，腫瘤細(xì)胞的基因調(diào)控受損，大量的CEA可釋放進(jìn)入血液，導(dǎo)致血清CEA增多[14]。并且CEA可通過1種粘附分子發(fā)揮作用，能干擾細(xì)胞正常的粘附力，從而導(dǎo)致細(xì)胞移動性增強(qiáng)，促進(jìn)惡性腫瘤的增殖與轉(zhuǎn)移[15]。有研究顯示凡內(nèi)胚層起源的惡性腫瘤組織中均有CEA的產(chǎn)生，故CEA廣泛存在于肺癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌等多種惡性腫瘤患者的血清中[16-18]。本研究顯示病灶組的AFP和CEA表達(dá)陽性率為71.7%和78.3%，顯著高于正常組的6.7%和10.8%(P<0.05)，表明結(jié)直腸癌患者多伴隨有AFP和CEA的高表達(dá)。

當(dāng)前結(jié)直腸癌發(fā)病率以每年3%～4%的速度上升，并有繼續(xù)增長與年輕化的趨勢，如何有效的評估結(jié)直腸癌的病情與治療療效已被廣泛關(guān)注[19]。AFP的表達(dá)與肝癌密切相關(guān)，AFP水平在肝癌患者中較良性肝占位患者顯著增高，其受腫瘤病灶數(shù)、腫瘤大小等特性影響，在區(qū)分肝臟炎癥及妊娠等方面也具有顯著優(yōu)勢[20]。既往研究也表明，血清AFP含量隨著肝癌的生長成線性升高，對于肝癌具有很高的診斷特異性，AFP表達(dá)陽性預(yù)測肝癌發(fā)生的正確率在90%以上[21-22]。CEA在結(jié)直腸癌中過表達(dá)與細(xì)胞發(fā)生惡變及腫瘤進(jìn)展關(guān)系密切，在病理狀態(tài)下表達(dá)激活時，能夠參與惡性腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移[23-24]。本研究顯示不同組織學(xué)分化、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者的AFP和CEA表達(dá)陽性率陽性率對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Spearman 等級相關(guān)性分析顯示AFP和CEA表達(dá)存在相關(guān)性(γ=0.477，P=0.013)，進(jìn)一步證實AFP過表達(dá)可能通過激活CEA的表達(dá)促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展，兩者在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著正向協(xié)同的調(diào)控作用。本研究也存在一定的不足，調(diào)查的樣本數(shù)量比較少，且沒有進(jìn)行健康人的調(diào)查分析，將在后續(xù)研究中進(jìn)行深入探討。

綜上所述，AFP和CEA在結(jié)直腸癌組織中均呈高表達(dá)狀態(tài)，與結(jié)直腸癌浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)的臨床病理特征密切相關(guān)，兩者在結(jié)直腸癌中的編導(dǎo)存在正相關(guān)性。