張媛媛 陳選英 薛曉會

鼻咽癌(NPC)是1種常見的惡性腫瘤，多發(fā)地區(qū)在東南地區(qū)和中國南方，發(fā)病早期容易發(fā)生轉(zhuǎn)移，是導致患者死亡的主要原因[1]。NPC患者進行放療治療不徹底，局部殘留病灶導致復發(fā)，限制其療效和預后。因此，研究NPC的轉(zhuǎn)移機制和尋找疾病的分子標志物可以提高治療效果，改善預后，具有重要的臨床應用價值[2]。在腫瘤不斷生長和增殖過程中，它們分泌的蛋白質(zhì)不僅是腫瘤細胞生長，侵襲和轉(zhuǎn)移所必需的，這些蛋白質(zhì)還可以從腫瘤細胞分泌并進入血液中，作為腫瘤標志物[3]。上皮型鈣黏蛋白(E-cadherin)是1種重要的細胞粘附分子，粘附連接作用受到破壞時會導致細胞分離[4]。E-box結(jié)合鋅指蛋白也稱Zeb蛋白，是特異性DNA序列轉(zhuǎn)錄因子，其家族成員包括Zeb1和Zeb2[5]。在本研究中，我們從我們的病理中心和相應的鼻咽癌鄰近標本中選取鼻咽癌轉(zhuǎn)移標本，探討轉(zhuǎn)錄抑制因子ZEB2蛋白表達和靶蛋白E-caderin蛋白在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的臨床應用價值。現(xiàn)有報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取在我院病理中心獲取的術(shù)后鼻咽癌組織標本90例，符合要求的鼻咽癌癌旁標本90例，研究對象納入時間2017年2月至2019年4月。納入標準：①鼻咽癌的診斷標準參考《鼻咽癌規(guī)范化診療指南2013年版》中的標準；②術(shù)前經(jīng)食管鏡取活組織病檢、術(shù)后病理學檢查證實；③患者手術(shù)前未接受輔助性放化療；④鼻咽癌癌旁組織標本為距離腫瘤邊緣<5 cm的食管組織；⑤本研究獲得醫(yī)學倫理委員會的批準，研究對象的各種基礎(chǔ)資料完整。排除標準：①伴有其他部位的原發(fā)性腫瘤；②因其他類型腫瘤實施放化療；③伴有免疫系統(tǒng)疾病、長期使用免疫調(diào)節(jié)劑的患者；④合并其他類型的嚴重食管病變。

90例鼻咽癌患者，年齡43～79歲，平均(59.8±10.3)歲，TNM分期：Ⅰ期21例、Ⅱ期36例、Ⅲ期29例、Ⅳ期4例；腫瘤組織分化程度：高分化20例、低分化32例、中分化38例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性59例；浸潤深度：肌層55例、未達肌層35例；病灶最大徑>5 cm 47例。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色 將樣品用甲醛固定，脫水并包埋在石蠟中。制備4 μm厚的連續(xù)切片，在65 ℃下脫蠟，并使用30 ml/l的過氧化氫使內(nèi)源過氧化物酶失活5 min，微波修復抗原，在4 ℃濕盒中加入一抗過夜，在37 ℃下加入生物素化的二抗30 min，用辣根過氧化物酶標記的抗生物素蛋白在37 ℃加入30 min，然后用氨基苯甲酰胺沖洗(DAB)顯色，蘇木精復染，脫水，密封后在光學顯微鏡下觀察。

1.2.2 免疫組化陽性結(jié)果判斷 ZEB2、E-caderin蛋白陽性染色分別表達于細胞核和細胞質(zhì)中，通過棕色或棕色的細胞核和/或細胞質(zhì)判斷陽性染色。每個切片選擇5個400倍視野，計算陽性細胞的數(shù)量計算為腫瘤細胞總數(shù)的百分比：沒有陽性細胞或陽性細胞<10%，其被判定為陰性;陽性細胞計數(shù)≥10%，并被判定為陽性。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 兩組中ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達率比較

鼻咽癌組織中的ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達率(67.78%、71.11%)顯著高于癌旁組織的22.22%、74.44%，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(表1)。

表1 兩組ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達率比較(例，%)

2.2 ZEB2蛋白、E-caderin蛋白表達與鼻咽癌組織病理學參數(shù)的關(guān)系

ZEB2蛋白陽性表達率與TNM分期和浸潤深度顯著相關(guān)(P<0.05)；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病灶直徑、組織學分化程度無顯著相關(guān)(P>0.05)，見表2。

表2 ZEB2蛋白表達與鼻咽癌癌組織病理學參數(shù)的關(guān)系(例，%)

經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，E-caderin蛋白陽性表達率與TNM分期和是否發(fā)生轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05)；與病灶直徑、組織學分化程度、浸潤深度無顯著相關(guān)性(P>0.05)，見表3。

表3 E-caderin蛋白表達與鼻咽癌組織病理學參數(shù)的關(guān)系(例，%)

2.3 鼻咽癌患者中ZEB2與E-caderin蛋白表達的相關(guān)性

鼻咽癌組織中Zeb2陽性病例中有42例E-cadherin陽性，Zeb2陰性病例中E-eadherin陽性率為75.86%(22/29)，兩者表達呈顯著負相關(guān)性(Z=0.031，P<0．000)(表4)。

表4 兩組標本中ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達情況比較(例，%)

3 討論

在生長和增殖過程中，腫瘤不斷與身體交換，它們分泌的蛋白質(zhì)不僅是腫瘤細胞生長，侵襲和轉(zhuǎn)移所必需的。這些蛋白質(zhì)可以從腫瘤細胞分泌進入血液，成為腫瘤標志物，例如由前列腺癌細胞分泌的前列腺特異性抗原(PSA)和肝癌細胞分泌的甲胎蛋白可用作診斷，功效監(jiān)測和復發(fā)及轉(zhuǎn)移預測的腫瘤標志物[5-6]。腫瘤發(fā)展，侵襲和轉(zhuǎn)移是涉及多個分子的多步驟，高選擇性非隨機過程，并且基因水平的變化不可避免地導致大量分泌蛋白功能發(fā)生變化[7]。然而，由于這些方法的局限性，以前關(guān)于腫瘤分泌蛋白的大多數(shù)研究都集中在單一或某些類型的蛋白質(zhì)上[8]。隨著蛋白質(zhì)組學的出現(xiàn)，開始對分泌蛋白質(zhì)進行研究，分泌蛋白不限于由經(jīng)典分泌途徑分泌的蛋白質(zhì)，還包括由非經(jīng)典分泌途徑分泌的蛋白質(zhì)，包括細胞表面脫落的蛋白質(zhì)和其他途徑釋放的蛋白質(zhì)，與腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)[9]。

E-cadherin是1種鈣依賴性跨膜糖蛋白，使細胞之間緊密連接，維持穩(wěn)定的組織結(jié)構(gòu)，它在各種上皮細胞中普遍存在，參與細胞內(nèi)聚并在組織結(jié)構(gòu)重建和形狀維護中起著關(guān)鍵作用[10]。E-eadherin主要介導同源細胞的粘附功能，其表達降低或功能喪失降低了癌細胞與鄰近細胞之間的粘附，導致腫瘤細胞的活性和活動范圍增加，從而增加癌細胞的轉(zhuǎn)移和浸潤能力[11-12]。Zeb蛋白家族的成員，如Snail和Zeb，都含有螺旋-環(huán)-螺旋基序，可以特異性結(jié)合E-eadherin基因，促進E-cadherin在啟動子區(qū)E-box中的表達[13]。據(jù)報道，Zeb1和Zeb2抑制各種腫瘤細胞中E-cadhefin的表達，Zeb與轉(zhuǎn)錄共抑制因子CtBP1結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄抑制因子復合物，從而抑制E-cadhefin轉(zhuǎn)錄[14]。Zeb2通過與E-cadhefin基因啟動子的E-box結(jié)合來抑制腫瘤細胞的表達[15]。

本次研究結(jié)果顯示，鼻咽癌組織中的ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達率顯著高于癌旁組織。推測ZEB2蛋白、E-caderin蛋白可能參與鼻咽癌的發(fā)生和發(fā)展過程。并且ZEB2蛋白陽性表達率與不同TNM分期和浸潤深度比較，差異具有統(tǒng)計學意義；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同病灶直徑、不同組織學分化程度差異無統(tǒng)計學意義。E-caderin蛋白陽性表達率與不同TNM分期和是否發(fā)生轉(zhuǎn)移組間比較，差異具有統(tǒng)計學意義；與不同病灶直徑、不同組織學分化程度、不同浸潤深度差異無統(tǒng)計學意義。說明ZEB2蛋白、E-caderin蛋白的表達均與病灶的直徑無關(guān)，隨著浸潤的加深和TNM分期的增加，ZEB2蛋白陽性率顯著增加；E-caderin蛋白的陽性率表達與分化程度及遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)。NPC患者ZEB2和E-caderin蛋白表達的相關(guān)性來看，兩者表達呈顯著負相關(guān)。兩者之間存在調(diào)節(jié)關(guān)系，促進NPC的侵襲和轉(zhuǎn)移;聯(lián)合檢測ZEB2和E-caderin有望成為評估腫瘤惡性生物學行為的參考指標。

綜上所述，ZEB2、E-caderin在鼻咽癌組織中表達上調(diào)，與NPC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。