韋瑋

濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院檢驗科，山東濟(jì)寧 272100

呼吸道感染是由致病微生物侵入呼吸道并進(jìn)行繁殖所致的疾病，可分為上呼吸道與下呼吸道感染，其中上呼吸道感染主要為喉部及以上部位的感染，例如急慢性鼻炎、喉炎與咽炎；下呼吸道感染為喉部以下部位的感染，包括急慢性氣管炎、急慢性肺炎、支氣管炎[1]。有研究[2]發(fā)現(xiàn)，上呼吸道感染以病毒為常見病因，少數(shù)由細(xì)菌所致；下呼吸道感染則由細(xì)菌、病毒、衣原體、支原體、軍團(tuán)菌等微生物所致。由于呼吸道感染可以誘發(fā)諸多疾病，加之臨床癥狀各有不同，相同病原體能夠?qū)е露喾N疾病，而一種疾病也可能由諸多病原體所致[3]。所以，及時明確呼吸道感染患者的病原體類型，對于進(jìn)一步診療工作具有至關(guān)重要的作用。該研究選擇2018年8月—2020年2月該院1 800例呼吸道感染患者作為研究對象，利用間接熒光免疫法對其不同呼吸道8種病原體IgM抗體進(jìn)行早期檢測，旨在為呼吸道感染防治工作提供可靠的依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇該院收治1 800例呼吸道感染患者作為研究對象，其中男性985例，女性815例；年齡1~84歲，平均（45.6±12.8）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合《實用內(nèi)科學(xué)》15版中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)診斷包括支氣管肺炎、支氣管哮喘、急性上呼吸道感染等疾病；該次研究已向患者進(jìn)行充分的告知；該次研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核并批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：自身免疫性疾??；其他系統(tǒng)急慢性感染；惡性腫瘤；白血病。

1.2 方法

所有患者均采集靜脈血1~2 mL，以低速離心機(jī)離心5 min，血清分離后，以間接免疫熒光法對8種呼吸道病原體IgM抗體進(jìn)行檢測，包括：甲型流感病毒（IFA）、乙型流感病毒（IFB）、肺炎支原體（Mp）、呼吸道合胞病毒（RSV）、嗜肺軍團(tuán)菌（LP）、腺病毒（ADV）、肺炎衣原體（CP）和副流感病毒（PIVS）。具體操作嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行。為了保證試驗結(jié)果的科學(xué)性與有效性，每組試驗均設(shè)立陽性與陰性對照。通過熒光顯微鏡觀察結(jié)果。儀器與試劑：醫(yī)用臺式低速離心機(jī)（型號TD-6）；三用恒溫水箱（型號S-HH-W21）；轉(zhuǎn)移脫色搖床（型號：XK-8）；微量移液器（型號：KHB）；正置熒光顯微鏡（型號BX51TR-32FB3-F01）；免疫熒光分析檢測試劑盒購自上海貝西生物科技有限公司，由美國海德診斷有限公司生產(chǎn)，國械注進(jìn)20193402864。

1.3 觀察指標(biāo)

①觀察 患者呼吸道8種病原體IgM抗體陽性結(jié)果分布情況。②觀察該組呼吸道8種病原體IgM抗體多重感染陽性分布情況。③對比不同年齡段患者呼吸道8種病原體IgM抗體檢測的陽性率。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)資料，計數(shù)資料以頻數(shù)及百分比（%）表示，組間差異比較以χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 該組患者呼吸道8種病原體IgM抗體陽性結(jié)果分布情況

該組1 800例呼吸道感染患者共有655例IgM抗體為陽性，陽性率為36.39%，其中Mp IgM抗體陽性檢出率最高，其他依次為RSV、ADV、CP、IFA、IFB、PIVS、LP。見表1。

表1 該組患者呼吸道8種病原體IgM抗體陽性結(jié)果分布情況

2.2 該組呼吸道8種病原體IgM抗體多重感染陽性分布情況

該組呼吸道8種病原體IgM抗體單一感染陽性率61.83%、二重感染25.19%、三重感染11.45%、四重感染1.53%。見表2。

表2 該組呼吸道8種病原體IgM抗體多重感染陽性分布情況

2.3 不同年齡段患者呼吸道8種病原體IgM抗體檢測的陽性率對比

該組年齡<18歲患者M(jìn)p IgM抗體檢測的陽性率高于年齡18~59歲、≥60歲（P＜0.05）。其他年齡組RSV、ADV、CP、IFA、IFB、PIVS、LP IgM抗體檢測的陽性率對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

3 討論

呼吸道感染屬于臨床常見病之一，誘發(fā)該病的病原體種類較多，而針對不同的病原體感染，臨床所采取的治療方法也有所不同[4]。然而，不同病原體感染后的臨床表現(xiàn)十分相近，僅依靠臨床表現(xiàn)的癥狀與常規(guī)經(jīng)驗判斷無法有效區(qū)分，所以必須采用實驗室檢測病原體類型，以便合理選擇有效的藥物，避免抗生素濫用，促進(jìn)疾病盡早康復(fù)[5-6]。目前，實驗室主要的檢測方法包括病原體分離培養(yǎng)、酶聯(lián)免疫吸附試驗、組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)檢測、快速膠體金、基因芯片等實驗，但上述方法均有較大的局限性[7]。培養(yǎng)法是早期用于病原體分離的方法，其根據(jù)病原體細(xì)菌嗜性，選取合適的組織與細(xì)胞進(jìn)行接種，基于感染細(xì)胞表現(xiàn)的蛋白標(biāo)志物，以免疫學(xué)與血細(xì)胞吸附法對病原體增殖情況進(jìn)行檢測與鑒定[8]。雖然病毒分離培養(yǎng)法能夠客觀分離感染病毒的種類，然而該方法步驟繁瑣，檢測時間長、成本高，且易出現(xiàn)假陰性，檢測結(jié)果受各類因素的影響，所以臨床應(yīng)用率并不高[9]。分子生物學(xué)檢測具有較高的敏感度與特異度，但易被污染，對于實驗室環(huán)境要求較高，不利于基層醫(yī)院開展。酶聯(lián)免疫吸附試驗每次僅能夠檢測一種病素[10]。基因芯片技術(shù)是在基因探針技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的新興技術(shù)，具有快捷、高效、高度準(zhǔn)確性與靈敏性等優(yōu)勢，但該技術(shù)成本昂貴、操作復(fù)雜，無法在臨床廣泛推廣[11]?？焖倌z體金檢測操作簡單、快捷，不需要特殊的儀器與設(shè)備，但不能準(zhǔn)確定量，準(zhǔn)確性與靈敏度較低，易出現(xiàn)假陰性，易導(dǎo)致部分病原體感染漏診[12]。

近年來，隨著免疫標(biāo)記技術(shù)的不斷完善，免疫熒光技術(shù)也在臨床得到了廣泛的應(yīng)用[13]。免疫熒光技術(shù)是在生物化學(xué)、免疫學(xué)與顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上，基于抗原抗體反應(yīng)原理所建立的新型技術(shù)。在檢測過程中，其將已知的抗體或抗原標(biāo)記上熒光標(biāo)記物，再以熒光抗體作為探針檢測組織內(nèi)相應(yīng)抗原或細(xì)胞，使形成的抗原抗體復(fù)合物上包含熒光素，之后通過熒光顯微鏡對標(biāo)本進(jìn)行觀察，明確抗體或抗原的含量、性質(zhì)[14]。由于抗原抗體結(jié)合后可以在相應(yīng)位置形成特殊的熒光模型，陽性與陰性標(biāo)本的熒光強(qiáng)度存在明顯差異，所以利于觀察到檢測結(jié)果[15]。目前，臨床主要采用間接免疫熒光法檢測IgM抗體，這是因為機(jī)體感染后所出現(xiàn)的免疫反應(yīng)主要為體液免疫，而IgM抗體是抗原刺激機(jī)體后形成體液免疫應(yīng)答過程中最早的抗體，血清內(nèi)IgM抗體水平升高往往說明存在近期感染，這為呼吸道感染的早期診斷提供了準(zhǔn)確的信息，利于指導(dǎo)臨床合理用藥[16]。

司序等[17]通過間接免疫熒光法對1722例呼吸道感染就診住院患者進(jìn)行了8項呼吸道病原體檢測，其中陽性822例，占全部受檢群體的47.7%，單項感染患者409例（49.8%），雙重感染264例（32.1%），三重感染137例（16.7%），四重感染12例（1.4%）。該文研究結(jié)果顯示，1 800例呼吸道感染患者共有655例IgM抗體為陽性，陽性率為36.39%，其中Mp IgM抗體陽性檢出率最高，其中單一感染陽性率61.83%、二重感染25.19%、三重感染11.45%、四重感染1.53%。結(jié)果可見，8項呼吸道病原體的IgM抗體篩查試劑將病原體作為抗原包，可以有效檢測出血清內(nèi)的IgM抗體，并以吸附劑對血清進(jìn)行處理，進(jìn)一步提高了呼吸道感染病原體的檢測效果。廖冰潔等[18]收集了2062例呼吸道感染患者的血清，以間接免疫熒光法對呼吸道病原體IgM抗體進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示<18歲，18~50歲以下，≥50歲陽性病例年齡組患者M(jìn)p IgM抗體陽性率分別為45.4%、20.9%、21.6%，其中<18歲組的陽性率高于其他組。該文研究結(jié)果與上述結(jié)果相近，該次研究中年齡<18歲患者M(jìn)p IgM抗體檢測的陽性率83.64%高于年齡18~59歲73.04%、≥60歲70.97%（P＜0.05）。Mp是兒童時期肺炎與其他呼吸道感染的重要病原體，其屬于病毒與細(xì)菌之間的病原微生物，能夠通過呼吸道飛沫傳染，小兒免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育成熟，一旦抵抗力降低，極易因Mp誘發(fā)呼吸道感染[19]。由于Mp對于大環(huán)內(nèi)脂類抗菌藥物十分敏感，而對于氨奉糖苷類與β內(nèi)酰胺類耐藥，所以病原體的檢測對于合理應(yīng)用抗菌藥物具有至關(guān)重要的意義，可以有效避免病毒感染時抗菌藥物不合理應(yīng)用所致的繼發(fā)耐藥菌株二重感染[20]。

表3 不同年齡段患者呼吸道8種病原體IgM抗體檢測的陽性率對比[n（%）]

綜上所述，Mp是引起呼吸道感染的重要病原體，采用間接免疫熒光法檢測呼吸道病原體IgM抗體對于呼吸道感染患者早期診斷具有顯著的意義，能夠有效避免抗菌藥的盲目應(yīng)用。