張穎，張赟赟，巫凱，陳鋒，李嘉，楊海船*（1.廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院化學所，南寧 530022；2.廣西中藥質(zhì)量標準研究重點實驗室，南寧 530022）

光莖栓果菊（Launaea acaulis）為菊科栓果菊屬植物，又稱土蒲公英、滑背草鞋，主要分布于廣西、廣東、貴州、云南等地。全草或根入藥，具有清熱解毒、利尿之功效，用于癰疽疔瘡、尿路感染[1-2]。廣西民間將其煮水服用治療乳腺癌，有較好的療效。本實驗前期采用MTS法檢測細胞活性，發(fā)現(xiàn)光莖栓果菊醇提物的石油醚萃取部位在體外對乳腺癌MCF-7細胞、白血病HL-60細胞和結腸癌SW480細胞的增殖有抑制作用，抑制率分別為90.61%、91.36%、84.44%。目前，光莖栓果菊的化學成分、藥理作用研究等仍處于空白，栓果菊屬植物化學成分相關研究也未見報道。光莖栓果菊的藥效物質(zhì)基礎不明確，不能指導其臨床的使用。為填補其研究空白，也為開發(fā)抗腫瘤的新藥物提供依據(jù)，本研究對光莖栓果菊醇提物的石油醚萃取部位進行甲酯化處理，采用GC-MS對其進行分析，為系統(tǒng)地研究光莖栓果菊化學成分提供參考。

1 儀器與材料

Agilent 6890A氣相色譜-5973N質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agilent 公司）；FA1004 N分析天平（上海精科，精度：0.1 mg）；石油醚（60～90℃，廣東光華科技股份有限公司，批號：20191214，分析純），正己烷（廣東光華科技股份有限公司，批號：20191010，分析純）；無水硫酸鈉（廣州化學試劑廠，批號：20180718，分析純）；光莖栓果菊購自南寧水街草藥市場，經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院黃云峰副研究員鑒定為光莖栓果菊（Launaea acaulis）的全草。

2 方法

2.1 供試品制備

稱取光莖栓果菊全草10 kg，粉碎，用95%乙醇回流提取3 次，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇，得總浸膏，加水混懸，用石油醚萃取，回收溶劑得石油醚萃取物。取石油醚萃取物1 g，置于50 mL具塞燒瓶中，加正己烷20 mL溶解，加1%硫醇甲醇溶液10 mL，搖勻，于70℃恒溫水浴1 h，加純凈水20 mL，振搖，靜置待分層清晰后取上清液，經(jīng)無水硫酸鈉脫水，過濾，濾液作為供試品。

2.2 GC-MS分析條件

2.2.1 GC條件 RTX-5MS毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；升溫程序：初始溫度60℃，以5℃·min－1升溫至100℃，以10℃·min－1升溫至200℃，以5℃·min－1升溫至260℃保持10 min；載氣為He；進樣量1.0 μL；分流比為50∶1。

2.2.2 MS條件 電離方式EI，電離能量70 eV，進樣口溫度230℃，離子源溫度230℃，掃描質(zhì)量范圍為50～1000 amu，掃描時間100 s，柱流量1.0 mL·min－1。

2.3 分析方法

取“2.1”項下供試品，采用GC-MS分析，所得的MS圖通過HPMSD化學工作站NIST98標準質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索，分別對各色譜峰進行確認，并按峰面積歸一化法計算各化合物的百分含量。

3 結果與分析

按“2.2”項下條件對供試品進行GC-MS測定，得到光莖栓果菊醇提物的石油醚部位脂溶性成分的總離子流圖，見圖1（各峰號對應成分見表1）。

圖1 光莖栓果菊脂溶性成分總離子流圖Fig 1 Total ion flow chart of liposoluble components in Launaea acaulis

按峰面積歸一化法計算各化合物的百分含量，本實驗從光莖栓果菊石油醚部位鑒定出29個化合物，主要為有機酸類化合物，其中棕櫚酸占18.08%，亞麻酸占16.83%，亞油酸占15.22%，硬脂酸占12.90%，10-甲基十八烷酸占8.14%。這些成分均為首次從光莖栓果菊中鑒定出來。結果見表1。

表1 光莖栓果菊脂溶性成分GC-MS 分析結果Tab 1 GC-MS analysis of liposoluble components in Launaea acaulis

續(xù)表1

4 討論

近年來，中草藥抗腫瘤活性成分已成為研究熱點。本研究從光莖栓果菊抗腫瘤活性部位共鑒別出29 個成分，其中有機酸類化合物的含量較高，依次為棕櫚酸、亞麻酸、亞油酸、硬脂酸、10-甲基十八烷酸。亞油酸、亞麻酸為多不飽和脂肪酸，且為必需脂肪酸。有學者從體外細胞實驗角度探討多不飽和脂肪酸對結腸癌細胞LoVo和RKO的生長抑制、線粒體損傷、脂肪酸代謝等方面的影響，結果表明亞油酸、亞麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、γ-亞麻酸在濃度大于 120 μmol·L－1時均能顯著抑制LoVo和RKO細胞的生長，誘導細胞凋亡，但對正常細胞HUVEC影響較小[3]。而棕櫚酸可通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激途徑濃度和時間依賴性地降低成骨細胞增殖活性，增加細胞凋亡，增高細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關蛋白和基因的表達[4-5]。因此，亞油酸、亞麻酸、棕櫚酸可能為光莖栓果菊抗腫瘤活性成分。本研究結果可為廣西特色藥材光莖栓果菊的藥效物質(zhì)基礎研究提供參考依據(jù)，促進該藥材資源的合理開發(fā)和利用。