劉惠 徐東升 陳虹 王瑩瑩 楊金生

摘要 目的：通過使用免疫組化和共聚焦技術(shù)研究拔罐對環(huán)跳穴區(qū)皮膚組織肥大細(xì)胞（Mast Cell）、神經(jīng)肽Y（Neuropeptide Y，NPY）及5-羥色胺（5-Hydroxytryptamine，5-HT）的影響。方法：選取10只健康SD大鼠，剃除雙后肢環(huán)跳穴區(qū)毛發(fā)，充分暴露穴區(qū)皮膚組織，在左側(cè)環(huán)跳穴進(jìn)行拔罐干預(yù)，拔罐后即刻灌流，并分別取正常大鼠和拔罐大鼠左側(cè)穴區(qū)皮膚組織，長寬均為1 cm。使用25%高滲糖脫水后用恒冷箱切片機(jī)制成20 μm厚的組織切片，然后分別用Mast Cell、NPY、5-HT抗體進(jìn)行熒光免疫組化檢測。結(jié)果：與正常組比較，拔罐組大鼠環(huán)跳穴區(qū)皮膚組織表皮層明顯增厚，且結(jié)構(gòu)不清，真皮及皮下組織血管擴(kuò)張擠壓變形，Mast Cell、NPY、5-HT陽性表達(dá)明顯增強(qiáng)。Mast Cell和5-HT在表皮和真皮內(nèi)靠近血管和毛囊聚集，在皮下組織中大量散在分布圍繞血管形成不連續(xù)的細(xì)胞帶。NPY神經(jīng)纖維在真皮及皮下組織的分布以串珠形式為主，在真皮下層繞血管毛囊匯聚明顯。使用熒光顯微鏡分別在10倍鏡下對5-HT和Mast Cell陽性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，在20倍顯微鏡下NPY陽性表達(dá)纖維的長度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果表明拔罐觀察組各項(xiàng)指標(biāo)均高于正常組，2組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：拔罐能夠使環(huán)跳穴區(qū)皮膚組織中Mast Cell、NPY、5-HT的表達(dá)上調(diào)，這些神經(jīng)活性物質(zhì)的釋放可能激活相關(guān)信號(hào)傳遞通路而實(shí)現(xiàn)拔罐的效果。

關(guān)鍵詞 拔罐;肥大細(xì)胞;神經(jīng)肽Y;5-羥色胺;環(huán)跳;穴區(qū)效應(yīng);皮膚組織;實(shí)驗(yàn)研究

Effect of Baguan on the Expression of Neuropeptides and Chemical Substances

in Skin Tissue of “Huantiao”（GB30） Acupoint Area

LIU Hui1，XU Dongsheng2，CHEN Hong3，WANG Yingying2，YANG Jinsheng1

（1 Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712046，China; 2 Institute of Acupuncture and Moxibustion，

China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China; 3 The Second Affiliated Hospital

of Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712046，China）

Abstract Objective：To investigate the influence of baguan on mast cell neuropeptide Y（NPY），5-Hydroxytryptamine（5-HT） in skin tissue at Huantiao（GB30）by using immunohistochemistry combined with confocal technique.Methods：A total of 10 rat was used in this experiment.Their skin tissue on hind limbs Huantiao（GB30） was exposed by shaving.Subsequently，baguan was carried out on the left side of Huantiao（GB30）.After baguan，the local skin tissue of 1 cm×1 cm on bilateral Huantiao（GB30） of rats were collected，and tissue sections of 20 μ m thickness were prepared by dehydration with 25% hypertonic sugar and sectioning in constant cooling box The Mast Cell、NPY、5-HT antibodies were used for fluorescent immunohistochemical test.Results：Compared with the normal group，the epidermal layer of the skin significantly thickened，with unclear structure，dermis and subcutaneous tissues dilated and extruded，and the positive expressions of Mast Cell，NPY and 5-HT increased significantly.Mast Cell and 5-HT aggregated in close proximity to the blood vessels and hair follicles in intra-epidermis and dermis，and are widely dispersed in subcutaneous tissue layer forming a discrete band of cells surrounding the blood vessels.NPY is distributed in the dermis and subcutaneous tissues in the beads form，and aggregated in close proximity to the blood vessels in the subdermal layer significantly.The markers of 5-HT and Mast Cell positive cells were counted under 10 times microscope，and the length of NPY positive fibers was counted under 20 times of microscope.The results showed that the indexes of baguan group were significantly higher than that of the control group.The difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion：Baguan plays a role in up-regulating the level of Mast Cell、NPY、5-HT in the local skin tissue at Huantiao（GB30）.These neuroactive substances may convey signals to certain pathways that contribute to the effects of baguan.

Keywords Baguan; Mast Cell; Neuropeptide Y; 5-Hydroxytryptamine; Huantiao（GB30）; Acupoint effect; Skin tissue; Experimental research

中圖分類號(hào)：R245文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.05.016

拔罐療法是在傳統(tǒng)中醫(yī)理論指導(dǎo)下，和其他中醫(yī)外治法一樣，以刺激經(jīng)絡(luò)循行上具有特定效用的穴位來治療疾病的一種非藥物治療方法[1]。古人最早將拔罐療法稱為“角法”，馬王堆帛書《五十二病方》中就已經(jīng)有使用拔罐療法治療疾病的記載。近年來由于拔罐適應(yīng)證廣、療效好、見效快，不僅在中國廣泛運(yùn)用，在國外也引起廣泛關(guān)注[3]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)目前對于拔罐療法機(jī)制的研究開展甚少，而且主要機(jī)制研究集中于拔罐對于腧穴局部血流量、氧分壓變化，及其對機(jī)體免疫功能影響等方面[4-5]。而對于拔罐過程中腧穴活性物質(zhì)變化的研究更是不足。本研究以SD大鼠為研究對象，采用免疫組織化學(xué)結(jié)合激光共聚焦技術(shù)，觀察正常大鼠皮膚組織和拔罐后皮膚組織中相關(guān)神經(jīng)肽及化學(xué)物質(zhì)表達(dá)的變化，為臨床拔罐治療疾病提供相應(yīng)的形態(tài)學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)成年雄性健康SD大鼠10只，重量為（220±10）g，由中國中醫(yī)科學(xué)院針灸研究所實(shí)驗(yàn)中心提供[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)為SCKX（軍）2012-004]。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格遵守動(dòng)物倫理學(xué)和美國國立衛(wèi)生研究院的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物照料和使用指南》，按分組分籠喂養(yǎng)，加食物和水，1次/2 d，同時(shí)更換墊料，由同一實(shí)驗(yàn)人員負(fù)責(zé)動(dòng)物的日常管理。

1.1.2 試劑與儀器 本實(shí)驗(yàn)所用試劑及儀器見表1、表2。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 將10只健康SD大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為觀察組和正常組，每組5只。觀察組選取大鼠左側(cè)環(huán)跳穴進(jìn)行拔罐干預(yù)，正常組除不進(jìn)行拔罐干預(yù)外其他操作與觀察組相同。

1.2.2 干預(yù)方法 穴位選擇：定穴參考《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[6]中大鼠常用穴位定位方法，環(huán)跳穴位于左側(cè)后肢髖關(guān)節(jié)后上緣，股骨大轉(zhuǎn)子前方凹陷中。罐具選?。簝?nèi)徑（25±2）mm的5號(hào)抽氣罐。拔罐干預(yù)過程：使用小動(dòng)物呼吸機(jī)對SD大鼠進(jìn)行麻醉，剔除大鼠環(huán)跳穴區(qū)及周圍毛發(fā)，充分暴露穴區(qū)皮膚組織，并將拔罐部位皮膚用生理鹽水浸濕，后使用抽氣式真空拔罐器對左側(cè)環(huán)跳穴區(qū)進(jìn)行拔罐干預(yù)，留罐時(shí)間5 min，其間若氣罐出現(xiàn)松動(dòng)，及時(shí)使用拔罐器補(bǔ)充吸力（約每30秒吸拔2次）。正常組不進(jìn)行拔罐干預(yù)，其余操作和觀察組相同。見圖1。

1.2.3 試劑配制 1）0.2 mol/L磷酸緩沖液（Phosphate Buffer，PB）∶磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）、磷酸二氫鈉（NaH2PO4·12H2O）、純水。2）0.1～0.2 MPB、純水。3）25%蔗糖溶液∶0.1 MPB、固體蔗糖。4）8%多聚甲醛∶固體多聚甲醛、純水、氫氧化鈉（NaOH）。5）4%多聚甲醛∶8%多聚甲醛、純水。6）封閉液∶3%驢血清、0.5% Triton X-100、0.1 M PB。7）稀釋液∶1%驢血清、0.5% TritonX-100、0.1 M PB。8）一抗稀釋液∶羊抗5-HT抗體（1∶500）;小鼠抗Mast Cell抗體（1∶1 000）;兔抗NPY抗體（1∶500）分別和稀釋液混合。9）二抗稀釋液：Alexa 594熒光素化的驢抗兔二次抗體（1∶500）、Alexa 594熒光素化的驢抗小鼠二次抗體（1∶500）、Alexa 594熒光素化的驢抗羊二次抗體（1∶500）分別與Alexa 488熒光素化的鬼筆環(huán)肽（Pha）（1∶1 000）、核酸特異性熒光染料（DAPI）（1∶50 000）和稀釋液混合。

1.2.4 灌流取材及固定 拔罐干預(yù)1次后，對大鼠進(jìn)行稱重，使用10%烏拉坦進(jìn)行腹腔麻醉，在麻醉成功的基礎(chǔ)上對大鼠進(jìn)行灌流取材，大鼠仰面朝上置于試驗(yàn)臺(tái)，做一皮膚的U形切口，快速剪開肋骨及胸腔，暴露心臟。剪開大鼠心尖部，將灌流針頭經(jīng)左心室插入升主動(dòng)脈，用動(dòng)脈夾固定心臟與針頭的位置，之后剪開右心耳，灌入生理鹽水至大鼠血液顏色變清亮。按照大鼠體質(zhì)量灌入體質(zhì)量±10 mL的固定液（4%多聚甲醛）灌流結(jié)束后在大鼠左后肢環(huán)跳穴區(qū)取1.0 cm×1.0 cm的皮膚組織。將組織放入固定液中后固定2 h，再換至含25%的蔗糖中，置于4 ℃冰箱沉糖脫水后備用。

1.2.5 組織切片制備 將大鼠皮膚組織進(jìn)行修整，便于包埋痛同時(shí)準(zhǔn)備陽離子載玻片并對其進(jìn)行標(biāo)記編號(hào)。將各組大鼠皮膚組織置于包埋槽中（期間注意大鼠皮膚方向），使用包埋劑對組織進(jìn)行包埋。將包埋槽放置在恒冷箱切片機(jī)中使組織凍結(jié)，將包埋槽中的組織移至樣本托上，對皮膚組織進(jìn)行矢狀切片（厚度為20 μm），將組織貼在載玻片上，然后放于4 ℃冰箱陰干。

1.2.6 檢測指標(biāo)與方法 組織切片使用0.1 mol/L PB清洗，待組織膠清洗干凈后用組化筆在皮膚組織周圍畫圈。將封閉液用移液器滴加到組織切片上，室溫孵育1 h，其間配置一抗稀釋液，1 h后移去封閉液，分別滴加5-HT、Mast Cell、NPY抗體的一抗稀釋液，并將裝有組織切片的濕盒置于4 ℃冰箱中過夜。第2天使用0.1 M PB清洗3次，陰干后分別加入相應(yīng)二抗稀釋液，在室溫環(huán)境下放置2 h后使用0.1M PB清洗3次，洗凈二抗后陰干組織切片。在載玻片上滴加少量50%甘油，蓋上蓋玻片后皮膚標(biāo)本制作完成（加入二抗后的操作過程注意避光）。

固定好的皮膚組織使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)，使用共聚焦顯微鏡拍照。拍好的圖片使用Adobe Photoshop CS2、Adobe Illustrator CS6軟件進(jìn)行標(biāo)注和編輯。使用熒光顯微鏡在10倍視野下選取12個(gè)面積相同的區(qū)域進(jìn)行2組皮膚標(biāo)本的Mast Cell、5-HT進(jìn)行計(jì)數(shù);在20倍視野下對NPY陽性表達(dá)纖維的長度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，完成統(tǒng)計(jì)后使用GraphPad Prism 6軟件制作條形圖。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間數(shù)據(jù)比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 拔罐對SD大鼠環(huán)跳穴區(qū)皮膚組織5-HT表達(dá)的影響 環(huán)跳穴區(qū)局部皮膚組織的表皮層、真皮層、皮下組織均有5-HT陽性標(biāo)記，拔罐干預(yù)后皮膚組織（圖2B）與正常皮膚組織（圖2A）比較，表皮層明顯增厚，且結(jié)構(gòu)不清，真皮及皮下組織血管擴(kuò)張擠壓變形，同時(shí)5-HT陽性表達(dá)增多，呈明顯的血管毛囊趨向性。

2.2 拔罐對SD大鼠環(huán)跳穴區(qū)皮膚組織NPY表達(dá)的影響 NPY神經(jīng)纖維在真皮及皮下組織的分布以串珠形式為主，在真皮淺層靠近表皮的部分則以散在游離分布為主，在真皮深層圍繞血管和毛囊走行分布。與正常組織（圖4A）比較，拔罐組織（圖4B）NPY表達(dá)明顯增強(qiáng)，在真皮下層血管匯聚明顯。

2.3 拔罐對SD大鼠環(huán)跳穴區(qū)皮膚組織Mast Cell表達(dá)的影響 環(huán)跳穴區(qū)局部正常皮膚組織（圖6A）中Mast Cell在表皮和真皮上層鮮少分布，在真皮下層繞血管毛囊散在分布，拔罐后（圖6B）在表皮和真皮內(nèi)靠近血管和毛囊聚集，在皮下組織中大量散在分布并伴有脫顆?，F(xiàn)象，圍繞血管形成不連續(xù)的細(xì)胞帶。

3 討論

3.1 SD大鼠拔罐的參數(shù)確定 通過對國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)的歸類分析，發(fā)現(xiàn)目前關(guān)于拔罐基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究的文獻(xiàn)較少，分析原因可能是由于對動(dòng)物皮膚特點(diǎn)與人有一定差異性，對拔罐操作有所影響所致。查閱與拔罐實(shí)驗(yàn)研究相關(guān)文獻(xiàn)后得出，目前用于拔罐的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物主要為小型豬、兔、大鼠等，本研究選取SD大鼠，在空氣麻醉狀態(tài)下對大鼠進(jìn)行拔罐干預(yù)，探索拔罐后穴區(qū)化學(xué)物質(zhì)的變化情況。在臨床、教材以及拔罐技術(shù)操作規(guī)范國家標(biāo)準(zhǔn)中拔罐的留罐時(shí)間較多界定為10～15 min，但實(shí)際操作過程中考慮到大鼠皮膚具有彈性大并缺乏與皮下組織牢固結(jié)合的特點(diǎn)[7]，預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)選擇適當(dāng)力度能夠使罐體吸附住的情況下，采用不同的留罐時(shí)間3、5、10 min進(jìn)行比較，結(jié)果表明留罐3 min后與正常組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;留罐10 min后皮下組織疏松水腫，皮下可見片狀出血，不利于進(jìn)一步的形態(tài)學(xué)觀察。故本實(shí)驗(yàn)選擇留罐5 min后比較2組之間的差異。

3.2 拔罐干預(yù)后Mast Cell、5-HT、NPY的變化 研究發(fā)現(xiàn)，拔罐后大鼠皮膚表皮層增厚，部分大鼠出現(xiàn)角質(zhì)層脫落，觀察時(shí)在表皮上方顯示出強(qiáng)熒光帶，而且穴區(qū)局部皮膚組織中的Mast Cell、5-HT、NPY表達(dá)發(fā)生明顯的變化。HT作為神經(jīng)遞質(zhì)和免疫調(diào)節(jié)因子，負(fù)責(zé)激活感覺神經(jīng)末梢，針刺、艾灸、刮痧、拔罐等操作可能會(huì)引起代償性（突觸后）改變，可能導(dǎo)致細(xì)胞外5-HT功效增強(qiáng)[8-9]，參與后續(xù)疼痛信息的傳導(dǎo)。NPY在皮膚中均屬于神經(jīng)肽，是主要存在于皮膚組織中的感覺神經(jīng)[10]，具有維持皮膚正常感覺和對傷害性刺激感受[11-13]的功能，且這些穴區(qū)神經(jīng)纖維和Mast Cell對體表刺激有反應(yīng)，體表刺激可誘導(dǎo)SP、NPY和CGRP的痛覺神經(jīng)肽在皮下神經(jīng)纖維中高表達(dá)，進(jìn)而激活Mast Cell。Mast Cell聚集并脫顆粒，又可釋放胰蛋白酶、5-HT和HA，共同參與痛覺過敏、神經(jīng)免疫相互作用和組織炎癥反應(yīng)等[14-16]。5-HT、Mast Cell和NPY的變化，與課題組觀察刮痧刺激后產(chǎn)生的變化基本類似[17]，提示刮痧、拔罐均為體表刺激，在臨床應(yīng)用時(shí)同一部位疊加使用的可行性與必要性。

本研究證實(shí)，拔罐對大鼠環(huán)跳穴區(qū)的物理性機(jī)械刺激，可導(dǎo)致局部皮膚組織出現(xiàn)一定程度的充血、水腫等，提示拔罐可能對局部皮膚組織產(chǎn)生良性刺激[18]，同時(shí)對Mast Cell、5-HT和NPY表達(dá)變化產(chǎn)生顯著影響，可改善局部微循環(huán)，并通過影響Mast Cell、5-HT和NPY等化學(xué)物質(zhì)的表達(dá)產(chǎn)生持續(xù)弱刺激，形成級(jí)聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)而影響整體微循環(huán)，產(chǎn)生拔罐的通絡(luò)效應(yīng)，達(dá)到治療疾病的效果[19]。拔罐后穴區(qū)這些化學(xué)成分的增加提示其可能參與了拔罐作用信息的傳遞過程，為我們進(jìn)一步研究拔罐效應(yīng)的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。

拔罐作為一種體表刺激，可以改變大鼠局部皮膚的組織形態(tài)，拔罐時(shí)使用適度的吸附力度和留罐時(shí)間，其產(chǎn)生的皮膚組織形態(tài)改變是一種可自我修復(fù)的短暫改變，具有安全性。本研究主要以穴區(qū)皮膚化學(xué)物質(zhì)的形態(tài)學(xué)描述為主，而對其含量的分析研究相對不足。下一步研究將繼續(xù)測定其形態(tài)學(xué)的分布趨勢，同時(shí)對于拔罐穴區(qū)皮膚組織中的Mast Cell、NPY、5-HT含量的變化也將做進(jìn)一步的檢測和研究。

參考文獻(xiàn)

[1]楊金生，王敬.拔罐療法的治病機(jī)理探討[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，1996，2（6）：39-40.

[2]馬榕，葛泉希，王超，孟向文.論拔罐禁忌及風(fēng)險(xiǎn)防范[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2019，21（2）：89-92.

[3]李丹丹，孟向文，劉華朋，等.拔罐療法作用機(jī)理研究概述[J].遼寧中醫(yī)雜志，2014，41（11）：2506-2508.

[4]徐東升，佘琛，王佳，等.大鼠“太沖”穴區(qū)皮膚組織中血管和神經(jīng)纖維的顯微結(jié)構(gòu)特征[J].針刺研究，2016，41（6）：486-491.

[5]何偉，吳美玲，景向紅，等.穴位的本態(tài)：穴位組織細(xì)胞化學(xué)的動(dòng)態(tài)變化[J].中國針灸，2015，35（11）：1181-1186.

[6]余曙光.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2009：151.

[7]章金濤，葛蓓蕾，朱奎成，等.SD大鼠皮膚組織病理學(xué)觀察[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2008，18（3）：81-82，86.

[8]Bertrand PP，Kunze WA，F(xiàn)urness JB，et al.The terminals of myenteric intrinsic primary afferent neurons of the guinea-pig ileum are excited by 5-hydroxytryptamine acting at 5-hydroxytryptamine-3 receptors[J].Neurosci，2000，101（2）：459-469.

[9]Nonkes LJ，van Bussel IP，Verheij MM，et al.The interplay between brain 5-hydro-xytryptamine levels and cocaine addiction[J].Behav Pharmacol，2011，22（8）：723-738.

[10]Wu ML，Xu DS，Bai WZ，et al.Local cutaneous nerve terminal and mast cell responses to manual acupuncture in acupoint LI4 area of the rats[J].Journal of Chemical Neuroanatomy，2015，68：14-21.

[11]吳勝，吳仲敏，傅磊冕.皮膚中的P物質(zhì)及其作用[J].解剖學(xué)研究，2009，31（3）：220-222.

[12]Kashiba H，Ueda Y.Acupuncture to the skin induces release of substance P and calcitonin generelated peptid from peripheral terminals of primary sensory neurons in the rat[J].Am J Chin Med，1991，19（3/4）：189-197.

[13]Benarroch E E.CGRP：sensory neuropeptide with multiple neurologic implications[J].Neurology 2011，77（3）：281-287.

[14]周丹，潘萍，郭義，等.針刺引起的炎性反應(yīng)是針效產(chǎn)生始動(dòng)環(huán)節(jié)之一[J].中國針灸，2009，29（1）：32-34.

[15]Huang Meng，Zhang Di，Sa ZY et al.In adjuvant-induced arthritic rats，acupuncture analgesic effects are histamine dependent：potential reasons for acupoint preference in clinical practice[J].Evid Based Complement Alternat Med，2012，2012：810512.

[16]Tang YY，Cao GX，Chen Xi et al.A finite element framework for studying the mechanical response of macromolecules：application to the gating of the mechanosensitive channel MscL[J].Biophys J，2006，91：1248-1263.

[17]王瑩瑩，陳虹，張豪斌，等.刮痧對皮膚組織形態(tài)和GCS、SP、SOD、表達(dá)的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2019，34（7）：3204-3208.

[18]楊金生.中國拔罐健康法[M].北京：中醫(yī)古籍出版社，1996：8.

[19]劉華朋，楊靜，朱成慧，等.拔罐療法對寒凝血瘀型家兔局部皮膚相關(guān)因子影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].吉林中醫(yī)藥，2018，38（1）：76-79.

（2020-04-14收稿 責(zé)任編輯：芮莉莉）

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81674079）;北京市自然科學(xué)基金項(xiàng)目（7172149）

作者簡介：劉惠（1994.07—），女，碩士研究生，研究方向：中醫(yī)外治法研究，E-mail：1837595345@qq.com

通信作者：楊金生（1964.02—），男，博士，主任醫(yī)師，研究方向：針灸標(biāo)準(zhǔn)化及中醫(yī)外治法研究，E-mail：zml@ibucm.com;王瑩瑩（1981.02—），女，博士，主任醫(yī)師，研究方向：中醫(yī)外治法及針刺戒煙方案研究，E-mail：yyw261206@126.com