羅先慧 彭真 向希雄 張菁華 張明 吳晶

(1.湖北中醫(yī)藥大學，湖北 武漢 430061；2.湖北省中醫(yī)院，湖北 武漢 430065)

全球的肥胖率正以驚人的速度增長，據《中國居民營養(yǎng)與慢性病狀況報告(2015年)》顯示，我國成人肥胖率為11.9%，同比2002年上升了4.8%，形勢十分嚴峻[1-2]。目前肥胖的動物模型有高脂飲食誘導肥胖模型、遺傳性肥胖的轉基因動物模型、下丘腦性肥胖模型、內分泌性肥胖模型等，由于人類肥胖的原因多數是能量攝入過多導致脂肪堆積，故高脂飼料喂養(yǎng)是建模最常用的方式[3-5]。實驗研究較常用的大鼠品種主要是SD和Wistar大鼠[6]。張曉林等[7]分析認為在大鼠肥胖模型建立時Wistar大鼠和SD大鼠并沒有明顯種異性，SD大鼠的性情較為暴戾，而Wistar大鼠性情溫順容易飼養(yǎng)，所以建立大鼠肥胖模型時Wistar大鼠相對SD大鼠更為方便。并且相關研究表明[7]長期的高脂飼料喂養(yǎng)后Wistar大鼠的肥胖效果要優(yōu)于SD大鼠，然而目前國內報道的構建肥胖大鼠模型以SD大鼠居多，Wistar大鼠的相關數據缺乏。本研究通過比較不同配方高脂飼料對Wistar大鼠建模效果的影響，以期為提高構建Wistar大鼠肥胖模型成功率提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級雄性Wistar大鼠40只，4周齡，體質量(89.61±6.68)g，由湖北省實驗動物研究中心提供(SCXK(鄂)2015-0018)，飼養(yǎng)于湖北中醫(yī)藥大學動物實驗中心SPF級屏障系統(tǒng)內(SYXK(鄂)2012-0068)，每個鼠籠飼養(yǎng)5只大鼠，自由飲食，室溫(22±1)℃，濕度55%±2%，動物房裝有晝夜明暗交替照明系統(tǒng)，每12小時輪轉照明。

1.2 飼料配方 [大鼠飼料均委托武漢萬千佳興生物科技有限公司生產，(SCXK(鄂)2016-0011)]

1.2.1 大鼠繁殖飼料 玉米40%、豆粕20%、進口魚粉7%、面粉23%、進口酵母3.5%、復合礦物鹽4%、復合維生素0.2%、復合氨基酸0.8%、油1.5%

1.2.2 17%脂供能高脂飼料 (植物蛋白、動物蛋白、玉米淀粉、麥芽糊精、纖維素、油、復合礦物質、膽堿)78.8%、蛋黃粉10%、豬油10%、膽固醇1%、膽酸鈉0.2%

1.2.3 45%脂供能高脂飼料 (玉米、小麥、豆粕、進口魚粉、礦物質及復合維生素、油、復合氨基酸)51.16%、蔗糖13.95%、豬油11.16%、蛋黃粉18.61%、膽固醇0.19%、膽堿鈉0.28%、進口魚粉4.65%

1.3 實驗血生化儀器 由美國貝克曼公司提供的全自動生化分析儀(型號：AU5800)。

1.4 實驗方法 40只大鼠均采用普通繁殖飼料適應性喂養(yǎng)1周，1周后隨機分為4組，其中對照組10只，高脂飼料A組10只，高脂飼料B組10只，高脂飼料C組10只。對照組繼續(xù)使用大鼠繁殖飼料喂養(yǎng)，高脂飼料A組給予17%脂供能高脂飼料喂養(yǎng)，高脂飼料B組給予45%脂供能高脂飼料喂養(yǎng)，高脂飼料C組給予大鼠繁殖飼料和45%脂供能高脂飼料1:1混合喂養(yǎng)，每日觀察并記錄大鼠精神狀態(tài)、活動欲、飲水量和攝食量，每周定時測量并記錄大鼠體質量(g)。喂飼至12周所有大鼠統(tǒng)一取材。取材前12小時禁食禁水。測量大鼠鼻尖至肛門長度(身長)、測量大鼠體質量，腹腔注射10%水合氯醛(3.5mL/kg)麻醉后腹主動脈留取血標本2mL，3500r/min離心5 min后取血清。大鼠開腹后分離腎周脂肪、附睪脂肪組織，先用0.9% 氯化鈉溶液沖洗干凈，用濾紙吸干稱重。根據公式計算BMI、Lee’s指數、脂體比。

BMI=體質量(kg)/身長(m)2

Lee’s指數=體質量(g)^(1/3)/體長(cm)×103

脂體比=(腎周脂肪+附睪周圍脂肪質量)/體質量×100%

成模標準：個體體質量超過對照組平均體質量20%的比例[8]。

由美國貝克曼公司提供的全自動生化分析儀檢測各血清標本的ALT、AST、TC、TG、HLD、LLD及Glu指標。

2 結果

2.1 不同配方高脂飼料對大鼠每日攝食量的影響 在12周的飼養(yǎng)過程中，高脂飼料各組與對照組呈現(xiàn)出相似的變化趨勢，B組的每日平均攝食量較其他各組偏低，與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見圖1。

圖1 各組大鼠平均攝食量Figure 1 Average food intake of rats in each group

2.2 不同配方高脂飼料對大鼠體質量的影響 本實驗每周對各組大鼠的體質量進行了階段性監(jiān)測，各組大鼠經過1周的適應性喂養(yǎng)分組后，體質量無顯著差異(P>0.05)，喂養(yǎng)至第9周A組和B組大鼠的體質量顯著高于對照組(P<0.05)。喂養(yǎng)至第11周，C組大鼠體質量顯著高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 不同配方高脂飼料對大鼠體質量的影響Table 1 The effect of high-fat diets with different formulas on rat body mass

2.3 不同配方高脂飼料對Wistar大鼠建模成功率的影響 第12周測量大鼠體質量前進行了禁食、禁水12小時的處理，其測量值不可作為評判各組大鼠成模率的指標，故選用前11周的大鼠體質量數據來評判建模效果。結果發(fā)現(xiàn)，經過11周的高脂飼料喂養(yǎng)，以高出對照組大鼠平均體質量的20%作為評判大鼠肥胖模型成模率的指標，A組大鼠的成模率在第11周的成模率為50%，而B組的成模率為40%，C組為10%。四組間成模率的差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),高脂飼料A組、B組的成模率顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。高脂飼料C組與對照組的差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，高脂飼料A組與高脂飼料B組的成模率無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，與C組比較差異具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

2.4 不同配方高脂飼料對大鼠形態(tài)學指標的影響 經過11周的高脂飼料喂養(yǎng)，各組大鼠的身長較對照組均無顯著性差異(P>0.05)。A組、B組的大鼠的BMI指數、Lee’s指數顯著高于對照組(P<0.05)。B組大鼠腎周脂肪重量、附睪脂肪重量和脂體比均顯著高于對照組(P<0.05)。A組大鼠僅有附睪脂肪重量顯著高于對照組(P<0.05)，腎周脂肪重量、脂體比與對照組無顯著性差異(P>0.05)，見表2。

表2 不同配方高脂飼料對各組大鼠形態(tài)學指標的影響Table 2 The effect of high-fat diets with different formulas on the morphological indexes of rats in each group

2.5 不同配方高脂飼料對大鼠血清相關生物化學指標的影響 B組大鼠血清TC、TG、LDL-C濃度較對照組顯著升高(P<0.01)，而HDL-C濃度顯著降低(P<0.05)。A組大鼠血清TC濃度較對照組顯著升高(P<0.05)，HDL-C濃度顯著降低(P<0.05)，C組大鼠血清TC、TG、HDL-C 、LDL-C較對照組均無顯著性差異(P>0.05)。實驗中高脂飼料A組、B組、C組大鼠血清AST、ALT、Glu較對照組均無顯著性差異(P>0.05)，見表3。

表3 不同配方高脂飼料對大鼠血清相關生物化學指標的影響Table 3 The effect of high-fat diets with different formulas on serum biochemical indexes in rats

3 討論

食源性肥胖模型被認為是眾多肥胖動物模型中最接近自然狀態(tài)下的肥胖模型，高能量、高營養(yǎng)的食物攝入是食源性肥胖主要致肥因素[9-10]。高脂飼料的配方比例是決定大鼠肥胖造模成功與否的關鍵，目前常見的高脂飼料配方為基礎飼料與添加物 (如:豬油、玉米油、雞蛋、蛋黃粉、膽固醇、膽鹽等) 充分混合而成[11-12]。傳統(tǒng)認為脂肪含量越高,老鼠發(fā)生肥胖的程度越大[13]。朱磊等[14]研究發(fā)現(xiàn)高脂飼料含脂量過高會導致大鼠進食量減少，不利于建立肥胖模型。目前較為成熟的高脂飼料配方主要為基礎飼料加入豬油(10%～15%)和膽固醇(1%～2%)等[15]。也有文獻報道[16]采用普通飼料和高脂飼料混合喂養(yǎng)，尊重大鼠的自主選擇，更加符合人類肥胖的過程。本次實驗選用17%、45%的脂供能高脂飼料和45%的高脂飼料與普通大鼠繁殖飼料1∶1混合飼料喂養(yǎng)，并與對照組普通飼料喂養(yǎng)進行比較。以超過基礎飼料喂養(yǎng)組體質量20%為依據[8]，17%脂供能高脂飼料組和45%的脂供能高脂飼料組的成模率均顯著高于對照組。

營養(yǎng)性肥胖大鼠模型的判斷標準并未統(tǒng)一，通常以高脂飼料喂養(yǎng)組體質量超過基礎飼料喂養(yǎng)組體質量20%為依據，但是近年來越來越多的研究指出應結合大鼠的Lee’s指數、皮下脂肪的堆積程度、血脂、血糖等情況綜合評判[16]。本研究中，A組和B組的成模率差異無統(tǒng)計學意義，B組大鼠的腎周脂肪重量、附睪脂肪重量和脂體比均顯著高于對照組；血清TC、TG、LDL-C濃度較對照組顯著升高，HDL-C濃度顯著降低。

有相關報道[17]提出普通飼料和高脂飼料混合喂養(yǎng)大鼠,由大鼠自主選擇,在保證正常生長發(fā)育和營養(yǎng)平衡的同時通過額外攝入能量誘導肥胖的發(fā)生。這種喂養(yǎng)方法更符合人類肥胖形成過程中攝食的特點。但本次實驗中45%的高脂飼料與普通大鼠繁殖飼料1∶1混合喂養(yǎng)組成模率低，且與單純高脂飼料組相比，差異具有統(tǒng)計學意義。這可能是混合喂養(yǎng)雖然模擬人類的飲食方式，但因為飼料的含脂量不夠，所以大鼠的體質量增長不顯著，這種過于理想的造模方式在實際造模過程中效果往往不甚理想。

同種屬實驗動物在接受相同的高脂飲食喂養(yǎng)后，部分產生明顯肥胖，而部分動物的體重增長比例相對較低，即會出現(xiàn)肥胖易感和肥胖抵抗現(xiàn)象。有研究表明[18]，在喂養(yǎng)大鼠的第2～4周剔出具有肥胖抵抗的大鼠可以明顯提高建模率。本次實驗考慮觀察大鼠整體的肥胖成模率，故沒有剔出肥胖抵抗的大鼠，導致成模率不高，建模時間長。高脂飼料各組大鼠雖然長期高脂、高糖飲食，尚未對肝功能及血糖造成顯著性影響，但是否存在肝臟組織脂肪變性及糖耐量異常，還需進一步的實驗研究及探索。

4 結論

本研究結果顯示，45%的高脂飼料更適合構建Wistar大鼠肥胖模型。