韓通，陳曦，張永博，李達翃，金成浩

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學生命科學技術(shù)學院，大慶163319；2.沈陽藥科大學中藥學院）

燈盞乙素（scutellarin），又名野黃芩苷，是從燈盞細辛中提取分離得到的一種重要的黃酮類天然產(chǎn)物（圖1）[1]?，F(xiàn)代藥理學研究表明，燈盞乙素具有心腦血管保護、抗氧化、抗炎和抗腫瘤等多種藥理活性[2]。目前，燈盞乙素已作為藥物的主要有效成分廣泛應用于心血管疾病的治療中，如燈盞花素片、注射劑和滴丸等。因此，基于燈盞乙素良好的生物活性，近年來對燈盞乙素的研究越來越廣泛。其中，燈盞乙素的抗腫瘤作用是近年來研究較多的熱點方向之一。根據(jù)文獻報道，燈盞乙素可以通過多種途徑來發(fā)揮抗癌作用。例如，燈盞乙素可以誘導腫瘤細胞凋亡[3-4]、抑制腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲[5-6]、逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的耐藥性[7]和增加腫瘤對藥物的敏感性等[8-9]。除了具有良好的抗腫瘤活性，燈盞乙素還具有較低的毒性，體外抗細胞增殖實驗表明，燈盞乙素可以選擇性的靶向腫瘤細胞，而對正常細胞毒性較小[10-11]。動物實驗表明燈盞乙素在持續(xù)高劑量的給藥下對小鼠幾乎無毒性[12]。這為以燈盞乙素為先導化合物進一步開發(fā)新的高效低毒的抗癌藥物提供了良好的基礎(chǔ)。

圖1 燈盞乙素的化學結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structure of scutellarin

然而，燈盞乙素的溶解性差、半衰期短和生物利用度低等藥代動力學問題，限制燈盞乙素的進一步應用。對燈盞乙素進行結(jié)構(gòu)修飾是改善燈盞乙素藥代動力學性質(zhì)的主要手段之一?？蒲泄ぷ髡邍L試對燈盞乙素的糖羧基進行酯化獲得燈盞乙素酯類前藥，如燈盞乙素乙酯、芐酯和不同分子量的聚乙二醇酯等，并研究酯化對燈盞乙素體內(nèi)代謝的影響，發(fā)現(xiàn)酯化后燈盞乙素的水溶性、穩(wěn)定性和生物利用度有了一定的提高[13-14]。然而，體內(nèi)酯酶較多，酯鍵在體內(nèi)仍極易代謝，相比于酯鍵，酰胺鍵的穩(wěn)定性更高，因此，研究選擇多種脂肪胺，合成了燈盞乙素的酰胺衍生物。此外，芐基是黃酮類化合物結(jié)構(gòu)改造一個常用的藥效團，如黃芩素的7-OH芐基化后，其衍生物的抗腫瘤活性顯著增強[15-16]。為了進一步提高燈盞乙素的抗腫瘤活性，燈盞乙素結(jié)構(gòu)中的4′-OH和6-OH進行芐基取代。綜上，研究以天然產(chǎn)物燈盞乙素為先導化合物，通過簡單易行的化學合成方法，獲得了4個燈盞乙素酰胺類衍生物，并對目標化合物進行抗腫瘤細胞株增殖活性測試。根據(jù)數(shù)據(jù)，對測試結(jié)果進行了分析。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

市售燈盞乙素購于南京澤朗生物科技有限公司；溴化芐、1-乙基-3（3-二甲基丙胺）碳二亞胺（EDCI）、1-羥基苯并三唑（HOBt）、丙胺、異丙胺、己胺和環(huán)己胺等藥品均購于上海阿拉丁生化科技有限公司；碳酸鉀，N，N-二甲基甲酰胺（DMF），乙酸乙酯，無水甲醇等試劑均為化學純或分析純。醇鈉由金屬鈉和無水甲醇制得。柱色譜分離采用硅膠H或硅膠（200～300目），薄層色譜用硅膠GF254，均采購于青島海洋化工廠。

1.2 儀器

磁力攪拌器（鞏義市予華儀器設(shè)備有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（EYELA，東京理化器械株式會社）；Bruker-ARX-300型和Bruker-AV-600型（TMS作內(nèi)標）核磁共振光譜儀；日本島津GCMS-5050A氣質(zhì)聯(lián)用儀；Agilent 1100離子阱型液-質(zhì)聯(lián)用儀。

1.3 方法

1.3.1 4 ′，6-二芐基-燈盞乙素芐酯（2）的合成

取市售燈盞乙素1（300 mg，0.65 mmol），溶于10 mL DMF，攪拌至完全溶解。加入溴化芐（0.38 mL，3 mmol）和無水碳酸鉀（414 mg，3 mmol），室溫攪拌24 h，硅膠薄層色譜（TLC）監(jiān)測反應進程，待反應完成后。將反應液傾入20 mL冰水混合物中，乙酸乙酯萃?。?×30 mL），飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮，經(jīng)硅膠柱色譜分離（二氯甲烷∶甲醇20∶1），得黃色粉末狀固體2，該化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR、13C-NMR和HR-MS確證。

1.3.2 4 ′，6-二芐基-燈盞乙素（3）的合成

取化合物2（1 000 mg，1.37 mmol），溶于80 mL甲醇中，攪拌至固體完全溶解，滴加2 mL甲醇鈉，室溫反應24 h，硅膠薄層色譜（TLC）監(jiān)測反應進程，待反應完成后。將反應液濃縮，加水調(diào)pH至4～5，有大量沉淀析出，抽濾，烘干，得黃色粉末狀固體3，該化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR和MS確證。

1.3.3 4 ′，6-二芐基-燈盞乙素丙基酰胺（4a）的合成

將中間體3（100 mg，0.16 mmol），溶于5 mL的DMF中，攪拌至固體完全溶解。加入HOBT（26 mg，0.19 mmol）、EDC（I60 mg，0.32 mmol）和丙胺（20μL，0.16 mmol），于室溫反應24 h。硅膠薄層色譜（TLC）監(jiān)測反應進程，待反應完成后。將反應液傾入30 mL的H2O中，乙酸乙酯萃?。?×20 mL），飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮，經(jīng)硅膠柱色譜分離（二氯甲烷∶甲醇20∶1），得到黃色粉末狀固體4a，該化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR、13C-NMR和HRMS確證。

1.3.4 4 ′，6-二芐基-燈盞乙素異丙基酰胺（4b）的合成

化合物4b的合成方法同4a，4′，6-二芐基-燈盞乙素（3）與異丙胺進行縮合，得到黃色粉末狀固體4′，6-二芐基-燈盞乙素異丙基酰胺（4b）。該化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR、13C-NMR和HR-MS確證。

1.3.5 4′，6-二芐基-燈盞乙素己基酰胺（4c）的合成

化合物4c的合成方法同4a，4′，6-二芐基-燈盞乙素（3）與己胺進行縮合，得到黃色粉末狀固體4'，6-二芐基-燈盞乙素己基酰胺（4c）。該化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR、13C-NMR和HR-MS確證。

1.3.6 4 ′，6-二芐基-燈盞乙素環(huán)己基酰胺（4d）的合成

化合物4d的合成方法同4a，4′，6-二芐基-燈盞乙素（3）與環(huán)己胺進行縮合，得到黃色粉末狀固體4′，6-二芐基-燈盞乙素環(huán)己基酰胺（4d）?；衔锝Y(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR、13C-NMR和HR-MS確證。

圖2 燈盞乙素衍生物的合成路線Fig.2 Synthesis route of scutellarin derivatives

1.3.7 體外抗增殖活性測試

采用臺盼藍法測試目標化合物4a～d的抗腫瘤活性。選取人白血病細胞株HL-60和THP-1在37℃、5%CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。培養(yǎng)液為含10%熱滅活胎牛血清，青霉素100 U·mL-1和鏈霉素100 U·mL-1的RPMI1640細胞培養(yǎng)基。48 h更換培養(yǎng)液，細胞貼壁后，用0.25%胰蛋白酶消化傳代。實驗用細胞均處于對數(shù)生長期，臺盼藍拒染法表明細胞活力大于95%。

取對數(shù)生長期的受試細胞，以5×104cells·mL-1的密度接種于24孔板內(nèi)，每孔內(nèi)2 mL。接種完畢后即加入相應濃度的待測藥物。藥物處理72 h后，從每孔的細胞懸液中吸取50μL細胞懸液，加入50μL的0.4%臺盼藍溶液中混勻，在3 min內(nèi)，于光學顯微鏡下觀察，分別計數(shù)每孔的細胞總數(shù)。每孔中的總細胞數(shù)占對照孔總細胞數(shù)的百分比即為該濃度藥物的生長抑制率。每個細胞及藥物至少進行3次獨立重復實驗。采用SPSS軟件對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學分析，各組數(shù)據(jù)均采用平均值±SD的方式表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 燈盞乙素衍生物的結(jié)構(gòu)鑒定

中間體及目標化合物的結(jié)構(gòu)，采用核磁波譜1HNMR和13C-NMR，以及質(zhì)譜MS進行了鑒定。

中間體2：4′，6-二芐基-燈盞乙素芐酯，產(chǎn)率67%。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ（ppm）：12.96（s，1H，5-OH），8.03（d，2H，J=9.0 Hz，H-2′，6′），7.55（d，2H，J=7.0 Hz，Ar-H），7.48（d，2H，J=7.4 Hz，Ar-H），7.36（m，9H，Ar-H），7.25（d，2H，J=7.0 Hz，Ar-H），7.20（d，2H，J=9.0 Hz，H-3′，5′），7.12（s，1H，H-8），6.95（s，1H，H-3），5.66（d，1H，J=5.3 Hz，H-1″），5.57（d，1H，J=5.7 Hz，sugar hydroxyl），5.43（d，1H，J=7.4 Hz，sugar hydroxyl），5.37（d，1H，J=5.3 Hz，sugar hydroxyl），5.24（s，2H，-CH2-），5.17（d，2H，J=11.9 Hz，-CH2-），5.02（d，2H，J=10.9 Hz，-CH2-），4.29（d，1H，J=9.6 Hz，H-5″），3.53-3.40（m，3H，H-2″，3″，4″）；MS（ESI）m/z：733.2[M+H]+.

中間體3：4′，6-二芐基-燈盞乙素（3），產(chǎn)率95%。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ（ppm）：12.98（s，1H，5-OH），8.05（d，2H，J=8.5 Hz，H-2′，6′），7.56（d，2H，J=7.3 Hz，Ar-H），7.48（d，2H，J=7.3 Hz，Ar-H），7.41（t，2H，J=7.4 Hz，Ar-H），7.37（m，3H，Ar-H），7.32（t，1H，J=7.1 Hz，Ar-H），7.21（d，2H，J=8.7 Hz，H-3′，5′），7.13（s，1H，H-8），6.95（s，1H，H-3），5.67（d，1H，J=4.9 Hz，H-1″），5.40（d，2H，J=7.4 Hz，sugar hydroxyl），5.22（s，2H，-CH2-），5.02（dd，2H，J=10.9 Hz，-CH2-），4.09（d，1H，H-5″），3.48-3.42（m，3H，H-2″，3″，4″）；MS（ESI）m/z：643.2[M+H]+.

目標化合物4a：4′，6-二芐基-燈盞乙素丙基酰胺，產(chǎn)率91%。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ（ppm）：12.96（s，1H，5-OH），8.08（d，2H，J=9.0 Hz，H-2′，6′），8.01（t，1H，J=5.7 Hz，-NH-），7.57（d，2H，J=6.8 Hz，Ar-H），7.49（d，2H，J=6.9 Hz，Ar-H），7.41（d，2H，J=7.0 Hz，Ar-H），7.35（m，4H，Ar-H），7.21（d，2H，J=9.0 Hz，H-3′，5′），7.07（s，1H，H-8），6.96（s，1H，H-3），5.59（d，1H，J=5.8 Hz，H-1″），5.31（d，1H，J=5.3 Hz，sugar hydroxyl），5.26（d，1H，J=5.0 Hz，sugar hydroxyl），5.21（d，1H，J=7.7 Hz，sugar hydroxyl），5.24（s，2H，-CH2-），5.09（d，1H，J=10.9 Hz，-CH2-），4.98（d，1H，J=10.9 Hz，-CH2-），3.94（d，1H，J=9.6 Hz，H-5″），3.53-3.36（m，3H，H-2″，3″，4″），3.03（m，2H，-CH2-），1.40（m，2H，-CH2-），0.78（t，3H，J=7.2 Hz，-CH3）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ（ppm）：182.84，168.14，164.25，162.04，156.77，153.24，152.68，138.02，136.93，131.84，128.98，128.98，128.87，128.87，128.57，128.57，128.52，128.52，128.31，128.31，123.35，115.86，115.86，106.39，103.88，100.59，94.72，76.93，76.32，74.66，73.42，71.21，70.07，22.50，11.67；HR-MS（ESI）m/z calcd for C38H37NO11[M+Na]+706.236 7，found 706.227 9.

目標化合物4b：4′，6-二芐基-燈盞乙素異丙基酰胺，產(chǎn)率49%。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ（ppm）：12.94（s，1H，5-OH），8.09（d，2H，J=9.0 Hz，H-2′，6′），7.95（d，1H，J=7.7 Hz，-NH-），7.56（d，2H，J=6.9 Hz，Ar-H），7.48（d，2H，J=7.0 Hz，Ar-H），7.41（t，2H，J=7.4 Hz，Ar-H），7.36（m，3H，Ar-H），7.32（d，1H，J=7.0 Hz，Ar-H），7.20（d，2H，J=9.0 Hz，H-3′，5′），7.09（s，1H，H-8），6.96（s，1H，H-3），5.59（d，1H，J=5.9 Hz，H-1″），5.31（d，1H，J=5.2 Hz，sugar hydroxyl），5.27（d，1H，J=5.1 Hz，sugar hydroxyl），5.17（d，1H，J=7.7 Hz，sugar hydroxyl），5.24（s，2H，-CH2-），5.09（d，1H，J=10.8 Hz，-CH2-），4.98（d，1H，J=10.8 Hz，-CH2-），3.87（d，1H，J=9.4 Hz，H-5″），3.82（m，1H，-CH-），3.58-3.43（m，3H，H-2″，3″，4″），1.07（d，3H，J=6.6 Hz，-CH3），1.02（d，3H，J=6.5 Hz，-CH3）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ （ppm）：182.84，167.01，164.20，162.05，156.77，153.22，152.64，138.00，136.92，131.86，128.97，128.97，128.88，128.88，128.57，128.57，128.51，128.51，128.32，128.32，123.33，115.83，115.83，106.41，103.83，100.88，94.90，77.01，76.51，74.66，73.47，70.94，70.08，22.74，22.63；HR-MS（ESI）m/z calcd for C38H37NO11[M+Na]+706.236 7，found 706.226 9.

目標化合物4c：4′，6-二芐基-燈盞乙素己基酰胺，產(chǎn)率49%。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ（ppm）：12.95（s，1H，5-OH），8.10（d，2H，J=8.9 Hz，H-2′，6′），8.00（t，1H，J=5.3 Hz，-NH-），7.56（d，2H，J=6.9 Hz，Ar-H），7.49（d，2H，J=7.1 Hz，Ar-H），7.42（t，2H，J=7.6 Hz，Ar-H），7.36（m，3H，Ar-H），7.32（d，1H，J=7.2 Hz，Ar-H），7.21（d，2H，J=9.0 Hz，H-3′，5′），7.07（s，1H，H-8），6.98（s，1H，H-3），5.60（brs，1H，H-1″），5.20（d，1H，J=7.8 Hz，sugar hydroxyl），5.24（s，2H，-CH2-），5.09（d，1H，J=10.8 Hz，-CH2-），4.98（d，1H，J=10.8 Hz，-CH2-），3.92（d，1H，J=9.6 Hz，H-5″），3.54-3.43（m，4H，H-2″，3″，4″），3.06（m，2H，-CH2-），1.35（m，2H，-CH2-），1.15（m，2H，-CH2-），1.04（m，4H，-CH2-），0.65（t，3H，J=6.9 Hz，-CH3）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ （ppm）：182.85，166.71，164.24，162.05，156.72，153.27，152.73，138.00，136.19，131.84，131.21，130.77，128.98，128.98，128.88，128.88，128.58，128.58，128.52，128.52，128.31，128.31，123.33，115.87，115.87，106.44，103.89，100.58，94.70，76.99，76.44，74.69，73.42，70.96，70.07，47.33，25.48，19.66，18.05，16.48，6.93；HR-MS（ESI）m/z calcd for C41H41NO11[M+Na]+746.268 0，found 746.257 8.

目標化合物4d：4′，6-二芐基-燈盞乙素環(huán)己基酰胺，產(chǎn)率39%。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ（ppm）：12.94（s，1H，5-OH），8.10（d，2H，J=8.9 Hz，H-2′，6′），7.94（d，1H，J=8.1 Hz，-NH-），7.56（d，2H，J=6.9 Hz，Ar-H），7.48（d，2H，J=7.0 Hz，Ar-H），7.41（t，3H，J=7.8 Hz，Ar-H），7.36（d，2H，J=7.7 Hz，Ar-H），7.32（d，1H，J=7.1 Hz，Ar-H），7.19（d，2H，J=9.0 Hz，H-3′，5′），7.11（s，1H，H-8），6.97（s，1H，H-3），5.59（brs，1H，H-1″），5.28（m，4H，-CH2，sugar hydroxyl），5.14（d，1H，J=7.8 Hz，sugar hydroxyl），5.09（d，1H，J=10.9 Hz，-CH2-），4.98（d，1H，J=10.9 Hz，-CH2-），3.90（d，1H，J=9.7 Hz，H-5″），3.57-3.43（m，4H，H-2″，3″，4″），1.58（m，6H，-CH2-），1.19（m，4H，-CH2-）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ（ppm）：182.85，166.88，164.20，162.04，156.73，153.18，152.66，138.00，136.93，131.84，128.99，128.99，128.87，128.87，128.57，128.57，128.51，128.51，128.32，128.32，123.36，115.81，115.81，106.40，103.84，100.88，94.97，76.11，76.37，74.66，73.50，70.74，70.06，47.70，32.54，32.49，25.62，24.65，24.56；HR-MS（ESI）m/z calcd for C41H41NO11[M+Na]+746.268 0，found 746.259 8.

目標化合物的結(jié)構(gòu)解析以4a為例，在1H-NMR譜數(shù)據(jù)中，存在明顯的燈盞乙素結(jié)構(gòu)中B環(huán)上4個氫信號，以AA XX的系統(tǒng)形式存在；在δ7.57～7.35附近存在10個芳香氫信號，判斷為兩個芐基中苯環(huán)氫信號；在δ5.24處存在二氫單峰以及δ5.09和4.98處存在兩個一氫雙峰，判斷為4和6取代芐基上的亞甲基氫信號；δ3.03處表現(xiàn)為二氫多重峰，歸屬為丙基中與氮相連的亞甲基；δ1.40處表現(xiàn)為二氫多重峰，歸屬為丙基中的亞甲基；δ0.78處表現(xiàn)為三氫三重峰，歸屬為丙基中與亞甲基相連的甲基氫信號。另外，在13C-NMR譜數(shù)據(jù)中出現(xiàn)24個芳香碳信號以及兩個羰基碳信號，判斷為燈盞乙素結(jié)構(gòu)中的芳香碳、4位羰基和糖上的羰基信號以及兩個芐基上的芳香碳信號；在高場區(qū)出現(xiàn)丙基的碳信號。高分辨質(zhì)譜HR-MS（ESI）m/z calcd for C38H37NO11[M+Na]+706.236 7，found 706.227 9。綜上，確認化合物為所設(shè)計合成的目標化合物4a。

2.2 生物活性測試

對所合成的燈盞乙素衍生物4a～d進行抗白血病活性測試，選取人白血病細胞株HL-60和THP-1，采用臺盼藍染色法進行測試，測試結(jié)果見表1。從表中的數(shù)據(jù)可以看出，所有化合物對兩株腫瘤細胞株均表現(xiàn)出一定的抑制作用。4a～d對THP-1細胞株的抗增殖活性強于HL-60，表現(xiàn)出明顯的腫瘤細胞選擇性，并且對THP-1的抗腫瘤作用強于先導化合物燈盞乙素，表明芐基取代可以提升燈盞乙素對THP-1細胞株的抑制作用。其中，化合物4d對THP-1的作用最強，其IC50值為16.77μmmol·mL-1。

表1 燈盞乙素衍生物的體外抗白血病細胞株增殖活性Table 1 Anti-proliferation activity of scutellarin derivatives against leukemic cell lines in vitro

3 討論

當前，惡性腫瘤依然是在世界范圍內(nèi)威脅人類健康的最主要疾病之一。在中國，癌癥儼然已經(jīng)成為一個重大的公共衛(wèi)生問題，其致死率僅次于心腦血管疾病高居第二位[17]。隨著科技發(fā)展和生活水平的不斷提高，癌癥的預防、診斷和治療能力不斷提高，化療方法依然在癌癥的治療過程中占據(jù)重要地位，但化療藥物發(fā)揮藥效的同時，伴隨著較多的毒副作用，因此，開發(fā)新型的抗腫瘤藥物仍然是迫在眉睫的問題。

從天然產(chǎn)物中尋找新型的抗腫瘤藥物一直是研究的熱點之一[18-19]。黃酮類化合物是一類極有研究價值的天然次生代謝產(chǎn)物，其廣泛分布于自然界植物中，具有結(jié)構(gòu)多樣、活性優(yōu)良和含量較高等諸多優(yōu)點。因此，黃酮類化合物一直是研究人員熱衷的研究對象。依靠豐富的自然資源，黃酮類化合物的研究開發(fā)極為迅速，在過去的20年里，提取，鑒定的黃酮類新化合物多達幾千余個[20-25]。這些豐富多樣的結(jié)構(gòu)為藥物發(fā)現(xiàn)提供了先導化合物來源，也為新藥研發(fā)及藥物設(shè)計提供了靈感。已有多種黃酮類藥物進入臨床應用，如醋柳黃酮、依普黃酮和黃酮哌酯等。此外，漢黃芩素作為抗癌新藥，也已進入臨床研究。因此，開發(fā)黃酮類抗癌藥物成為近年來的研究熱點[26]。燈盞乙素是一種極具藥用價值的黃酮類化合物，其抗癌能力近年來研究較多，眾多藥理學實驗證實燈盞乙素對于腫瘤的發(fā)生和發(fā)展起到重要的抑制作用。燈盞乙素對血液瘤和實體瘤都具有較強的抑制作用，已有文獻報道，燈盞乙素可以抑制多種白血病細胞株如HL-60、THP-1、CHRF、H9、NB4、U937、K562和Ju rkat的增殖，其半數(shù)抑制濃度（IC50）從35μmmol·mL-1到165μmmol·mL-1不等，并呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性[2，27]。因此，可以證實燈盞乙素對血液瘤細胞具有廣譜性且抗腫瘤活性良好。

截至目前，針對燈盞乙素抗腫瘤活性的結(jié)構(gòu)改造研究較少，并由于其藥代性質(zhì)差的問題，使其很難進行深入的體內(nèi)抗腫瘤活性研究。為了進一步擴展燈盞乙素的抗腫瘤功能，探索其體內(nèi)抗腫瘤效果。基于前期的文獻調(diào)研，研究合成了燈盞乙素的酰胺類衍生物，期望在改善藥代性質(zhì)的同時，進一步增強其抗腫瘤活性，獲得4個目標化合物4a～d。選取對燈盞乙素較為敏感的白血病細胞株HL-60（人早幼粒白血病細胞）和THP-1（人急性單核白血病細胞），采用臺盼藍染色法，進行了體外抗增殖活性測試。測試結(jié)果顯示，衍生物對兩株細胞都具有抑制作用，但比較衍生物對兩株細胞的IC50值，可以發(fā)現(xiàn)化合物4a～d具有腫瘤細胞選擇性，對THP-1細胞株的抑制活性更強。尤其以環(huán)己基酰胺化合物4d的IC50值最小，為燈盞乙素的三分之一。從測試結(jié)果可以分析出，此類化合物的構(gòu)效關(guān)系如下：（1）隨著脂肪胺碳鏈的增加，抗腫瘤增殖活性逐步降低；（2）4′位和6位芐基取代后，對THP-1的抑制活性增加；（3）脂肪環(huán)酰胺衍生物對THP-1的抗腫瘤活性強于直連脂肪酰胺。后續(xù)，我們將會對燈盞乙素酰胺類衍生物進行正常細胞毒性實驗測試，評價酰胺類衍生物的選擇性，擇優(yōu)進行抗腫瘤機制研究。

4 結(jié)論

以燈盞乙素為先導化合物，基于其良好的抗腫瘤活性和低毒性，對其開展藥物化學研究。通過三步化學反應，對燈盞乙素的4′，6位羥基進行芐基化，水解裸露糖羧基，并在糖羧基位置通過與多種胺縮合，獲得燈盞乙素酰胺衍生物。采用臺盼藍染色法測試目標化合物4a～d的抗白血病細胞株HL-60和THP-1增殖活性。活性測試數(shù)據(jù)表明，化合物4d對THP-1細胞具有較強的抗增殖能力，IC50值為16.77μmmol·mL-1，明顯強于先導化合物燈盞乙素，值得進行更為深入的藥理作用機制研究，為燈盞乙素的抗腫瘤功能開發(fā)提供理論依據(jù)。