鄧文靜 張宏意 歐曉華 盧昌華 黃偉展 嚴(yán)寒靜

摘?要：?分析外源性茉莉酸甲酯對(duì)廣藿香JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑關(guān)鍵基因JAZ2、MYC2、COI1及倍半萜合成途徑關(guān)鍵基因PTS、FPPS、SQLE表達(dá)的影響，為深入研究茉莉酸甲酯調(diào)控廣藿香JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及倍半萜合成途徑的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。該文分別用0.10和0.25 mmol·L-1的MeJA噴施廣藿香葉片，于處理后的0、2、6、12、24、48、72 h摘取葉片，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)JAZ2、MYC2、COI1、PTS、FPPS、SQLE基因的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果表明：0.10和0.25 mmol·L-1的MeJA對(duì)廣藿香JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑JAZ2、MYC2、COI1及倍半萜合成途徑PTS、FPPS、SQLE基因表達(dá)均有不同程度的促進(jìn)作用，其中對(duì)JAZ2基因表達(dá)影響最顯著。0.10 mmol·L-1 MeJA溶液處理2 h時(shí)，JAZ2表達(dá)量上調(diào)13.52倍;0.25 mmol·L-1 MeJA溶液處理48 h時(shí)，JAZ2表達(dá)量上調(diào)19.09倍。JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑關(guān)鍵基因JAZ2與倍半萜合成途徑關(guān)鍵基因FPPS存在極顯著正相關(guān)關(guān)系。綜上結(jié)果表明MeJA溶液可誘導(dǎo)廣藿香JAZ2、MYC2、COI1、PTS、FPPS、SQLE基因的表達(dá)，且不同濃度MeJA對(duì)基因表達(dá)有著不一樣的影響;JAZ2是JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑里響應(yīng)MeJA誘導(dǎo)的主要基因，其可激活倍半萜合成途徑FPPS基因的協(xié)同表達(dá)，進(jìn)而影響廣藿香醇等倍半萜合成。

關(guān)鍵詞： 廣藿香， 茉莉酸甲酯， JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑， 倍半萜合成途徑，基因表達(dá)

中圖分類號(hào)：?Q943

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：?A

文章編號(hào)：?1000-3142（2021）04-0559-08

Abstract：?The effects of exogenous methyl jasmonate （MeJA） on the key genes （PTS， FPPS， SQLE） expressions of Pogostemon cablin for the JA signal transduction and sesquiterpene synthesis pathways were studies. This would establish a foundation of the molecular mechanisms of MeJA in these two pathways. We treated the leaves of patchouli with 0.10 and 0.25 mmol·L-1 MeJA respectively and picked them at 0， 2， 6， 12， 24， 48， 72 h after treatments.?We used qRT-PCR to detect the key genes expression of JAZ2， MYC2， COI1， PTS， FPPS， SQLE. The results were as follows： 0.10 and 0.25 mmol·L-1 MeJA promoted the expression of these genes in different degrees， with the most significant effect on JAZ2. The expression levels of JAZ2 increased 13.52-fold after 2 h at 0.10 mmol·L-1 MeJA treatment and 19.09-fold after 48 h at 0.25 mmol·L-1 MeJA treatment. There was a significant positive correlation between the key gene JAZ2 in JA signal transduction pathway and FPPS in sesquiterpene synthesis pathway. The above results demonstrated that MeJA promoted the expression of JAZ2， MYC2， COI1， PTS， FPPS， SQLE， and different concentrations of MeJA had different effects on gene expression. JAZ2 was the main gene induced by MeJA in JA signal transduction pathway， which can activate the co-expression of FPPS gene in sesquiterpene synthesis pathway， so as to affect the synthesis of sesquiterpene such as patchouli alcohol.

Key words： Pogostemon cablin， methyl jasmonate， JA signal transduction pathways， sesquiterpene synthesis pathways， gene expression

廣藿香（Pogostemon cablin）為唇形科（Lamiaceae）刺蕊草屬（Pogostemon）植物，以干燥地上部分入藥，是我國(guó)傳統(tǒng)中藥之一，具有芳香化濕、開(kāi)胃止嘔、發(fā)表解暑的功效（國(guó)家藥典委員會(huì)，2015）。廣藿香中的揮發(fā)油主要為倍半萜類化合物，數(shù)量超過(guò)24種，其中以廣藿香醇為主要成分（Deguerry et al.， 2006）。廣藿香醇具有保護(hù)胃腸道、抗病原微生物、抗氧化、抗腫瘤和調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等作用（Ito et al.， 2016; 徐雯，2017）。近年來(lái)，廣藿香被用作藥用提取物、食品添加劑和香料，廣泛應(yīng)用于藥品、食品及日用化妝品行業(yè)。因此，研究廣藿香醇合成的分子機(jī)制，從分子水平上調(diào)控廣藿香倍半萜的代謝以提高廣藿香醇含量，具有重要的實(shí)際意義。

茉莉酸甲酯（methyl jasmonate， MeJA）是一種新型植物激素，參與植物生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)節(jié)和防御反應(yīng)，可有效調(diào)控藥用植物中次生代謝產(chǎn)物的生物合成（Avanci et al.， 2010）。茉莉酸（jasmonicacid， JA）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是調(diào)控植物次生代謝產(chǎn)物合成的主要途徑之一（Ryan， 1990），由多個(gè)基因或蛋白的協(xié)同作用完成。其中茉莉酸ZIM結(jié)構(gòu)域蛋白（jasmonate ZIM domain-containing protein， JAZ）、冠菌素不敏感蛋白1（coronatine insensitive 1， COI1）、轉(zhuǎn)錄因子MYC2等是JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的核心模塊，常通過(guò)彼此之間的相互作用來(lái)調(diào)控植物次生代謝產(chǎn)物的合成（Katsir et al.， 2008; Browse， 2009; Chini et al.， 2009）。

倍半萜是藥用植物中常見(jiàn)的有效成分。研究倍半萜合成途徑中關(guān)鍵酶基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，對(duì)調(diào)控?fù)]發(fā)性萜類合成具有重要價(jià)值。其中倍半萜合酶基因角鯊烯單加氧酶（squalene monooxygenase， SQLE）位于倍半萜類化合物骨架合成的上游途徑，能促進(jìn)倍半萜物質(zhì)的合成（王煥，2015）。法尼基焦磷酸合酶（farnesyl diphosphate synthase， FPPS）是合成倍半萜的前體法尼基焦磷酸（FPP）的關(guān)鍵酶。倍半萜合酶（terpene synthase， TPS）如廣藿香醇合酶（patchoulol synthase， PTS）能進(jìn)一步催化FPP生成廣藿香醇等倍半萜類化合物（Frister et al.， 2015）。

前人研究表明，MeJA可通過(guò)JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)開(kāi)啟一系列萜類合成途徑相關(guān)基因的協(xié)同表達(dá)，從而在轉(zhuǎn)錄水平上影響植物的萜類代謝，增加萜類化合物的積累（Xu et al.， 2004; Suttipanta et al.， 2011;何雪瑩，2016）。目前，對(duì)MeJA處理廣藿香后JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及倍半萜合成途徑相關(guān)性的研究尚未見(jiàn)報(bào)道，而進(jìn)一步研究其分子機(jī)制對(duì)提高廣藿香倍半萜類化合物的合成與積累具有重要價(jià)值。因此，本實(shí)驗(yàn)用不同濃度MeJA處理廣藿香，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測(cè)JAZ2、MYC2、COI1、PTS、FPPS、SQLE基因的表達(dá)量，旨在了解MeJA對(duì)廣藿香JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和倍半萜合成途徑關(guān)鍵基因表達(dá)的影響，挖掘受MeJA調(diào)控的基因，為深入研究廣藿香JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及倍半萜合成途徑的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1?材料與方法

1.1 材料

選擇廣東省四會(huì)市廣藿香植株，將扦插苗移栽至廣東藥科大學(xué)中藥學(xué)院種植10個(gè)月，株高約90 cm。經(jīng)廣東藥科大學(xué)中藥學(xué)院嚴(yán)寒靜教授鑒定為唇形科刺蕊草屬植物廣藿香（Pogostemon cablin）。

1.2 用MeJA處理廣藿香植株

選取長(zhǎng)勢(shì)相近且良好的廣藿香16株，隨機(jī)分為兩組，分別是實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，設(shè)3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。以1 mL無(wú)水乙醇為溶劑，配制0.10 mmol·L-1 MeJA溶液，用小噴瓶均勻噴施在廣藿香葉片表面，直至水滴滴落，立即用透明塑料膜將植株覆蓋，1.5 h后移除塑料膜。分別于處理后的0、2、6、12、24、48、72 h摘取葉片，用錫紙包裹放入液氮中速凍0.5 h后，放入-80 ℃冰箱保存，用于總RNA提取。以1 mL無(wú)水乙醇按照同倍數(shù)稀釋后噴施于廣藿香為對(duì)照組。

0.25 mmol·L-1 MeJA溶液處理方法同上。

1.3 廣藿香總RNA提取及cDNA第一鏈合成

使用TRI pure Reagent和RNA prep Pure Plant試劑盒，按照說(shuō)明書提取廣藿香總RNA，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其完整性，超微量紫外分光光度計(jì)UV2450測(cè)定其濃度和純度，將RNA放入-80 ℃冰箱保存。從冰箱取出RNA，測(cè)定其濃度和純度，計(jì)算用于反轉(zhuǎn)錄的RNA量，使用Evo M-MLV RT For PCR試劑盒按說(shuō)明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，獲得cDNA第一鏈。

1.4 基因表達(dá)量的測(cè)定

根據(jù)本課題組廣藿香轉(zhuǎn)錄組測(cè)序得到的JAZ2、MYC2、COI1、SQLE、FPPS基因序列及NCBI公布的PTS基因序列，用CmSuite8軟件設(shè)計(jì)qRT-PCR引物（表1）。以18S rRNA為內(nèi)參基因，18S引物同見(jiàn)表1（劉璐等，2016）。

使用SYBR Green Premix Pro Taq HS qPCR試劑盒，按照說(shuō)明書配制20 μL反應(yīng)體系：SYBR Green Premix Pro Taq HS Premix 10 μL，cDNA 1.5 μL，Primer F 0.4 μL，Primer R 0.4μL，RNase free water 7.7 μL。qRT-PCR（Bio-Rad Laboratories，Inc）反應(yīng)程序：預(yù)變性95 ℃、30 s，1個(gè)循環(huán);變性95 ℃、5 s，退火及延伸60 ℃、30 s，40個(gè)循環(huán)?？瞻讓?duì)照用水代替cDNA模板，每個(gè)樣品設(shè)三個(gè)技術(shù)重復(fù)，復(fù)孔間Ct值的STD<0.2。

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用2-ΔΔCt法計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)量（Livak & Schmittgen， 2001）。ΔCt處理= Ct處理-Ct內(nèi)參（處理）;ΔCt對(duì)照 = Ct對(duì)照-Ct內(nèi)參（對(duì)照）;ΔΔCt=ΔCt處理-ΔCt對(duì)照;2-ΔΔCt即基因的相對(duì)表達(dá)量。運(yùn)用SPSS分析軟件，用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析;用Pearson法對(duì)JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和倍半萜合成途徑中的關(guān)鍵基因進(jìn)行相關(guān)性分析。

2?結(jié)果與分析

2.1 廣藿香總RNA的質(zhì)量檢測(cè)

提取的廣藿香總RNA，用1%瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)其質(zhì)量。電泳圖顯示18S、28S條帶清晰分明且28S條帶的亮度大致為18S條帶的兩倍（圖1），表明RNA完整性良好;紫外分光光度計(jì)檢測(cè)結(jié)果顯示，OD260/OD280在1.8～2.1之間，表明RNA純度較高。RNA質(zhì)量較好，滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)需要。

2.2 MeJA處理對(duì)廣藿香基因表達(dá)量的影響

2.2.1?MeJA對(duì)廣藿香JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑關(guān)鍵基因JAZ2、MYC2、COI1表達(dá)的影響

JAZ2在0.10 mmol·L-1 MeJA溶液處理后2、6、12、24、48、72 h表達(dá)變化顯著，其表達(dá)量與對(duì)照組相比分別上調(diào)13.52、4.54、4.15、9.27、9.10、3.23倍，差異達(dá)極顯著和顯著水平;JAZ2在0.25 mmol·L-1 MeJA溶液處理后24、48、72 h，其表達(dá)量分別上調(diào)9.69、19.09、3.37倍，差異達(dá)極顯著和顯著水平（圖2：A）。MYC2在0.10 mmol·L-1 MeJA溶液處理后2、6、48、72 h，其表達(dá)量與對(duì)照組相比分別上調(diào)3.49、2.47、3.23、2.69倍，差異達(dá)極顯著水平;MYC2在0.25 mmol·L-1 MeJA溶液處理后24、48、72 h，其表達(dá)量分別上調(diào)2.18、2.19、2.55倍，差異達(dá)顯著水平（圖2：B）。兩種不同濃度MeJA溶液處理后，COI1的表達(dá)量變化不大（圖2：C）。由此可知，0.10 mmol·L-1 MeJA溶液可在處理初期促進(jìn)廣藿香JAZ2和MYC2的表達(dá)，而用0.25 mmol·L-1 MeJA溶液誘導(dǎo)后基因響應(yīng)較慢，直到24 h表達(dá)量才開(kāi)始上調(diào)。其中JAZ2表達(dá)量上調(diào)最顯著，而對(duì)COI1的表達(dá)影響不大。

2.2.2 MeJA對(duì)廣藿香倍半萜合成途徑關(guān)鍵基因PTS、FPPS、SQLE表達(dá)的影響?SQLE在0.10 mmol·L-1 MeJA溶液處理后2、48、72 h表達(dá)變化明顯，其表達(dá)量與對(duì)照組相比分別上調(diào)1.64、2.53、1.76倍，差異達(dá)顯著水平;SQLE在0.25 mmol·L-1 MeJA溶液處理后2、6 h表達(dá)量分別下調(diào)73%、63%，48 h表達(dá)量上調(diào)2.37倍，差異達(dá)顯著水平（圖2：D）。PTS在0.10 mmol·L-1 MeJA溶液處理后6、48、72 h表達(dá)變化明顯，其表達(dá)量與對(duì)照組相比分別上調(diào)2.65、4.81、2.55倍，差異達(dá)極顯著和顯著水平;PTS在0.25 mmol·L-1 MeJA溶液處理后12、48、72 h，其表達(dá)量與對(duì)照組相比分別上調(diào)2.67、4.88、2.23倍，差異達(dá)極顯著和顯著水平（圖2：E）。FPPS在0.10 mmol·L-1 MeJA溶液處理后48、72 h，表達(dá)量與對(duì)照組相比分別上調(diào)2.53、1.86倍，差異達(dá)顯著水平;FPPS在0.25 mmol·L-1 MeJA溶液處理后48 h，表達(dá)量與對(duì)照組相比上調(diào)2.20倍，差異達(dá)顯著水平（圖2：F）。由此可知，在0.10 mmol·L-1 MeJA溶液處理初期，SQLE表達(dá)量上調(diào)，而在0.25 mmol·L-1 MeJA溶液處理初期，SQLE表達(dá)量則下降。PTS和FPPS均在MeJA溶液處理后的48 h上調(diào)表達(dá)明顯。

2.3 相關(guān)性分析

2.3.1 0.10 mmol·L-1 MeJA處理后廣藿香JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及倍半萜合成途徑關(guān)鍵基因表達(dá)的相關(guān)性分析?從表2可以看出，0.10 mmol·L-1 MeJA誘導(dǎo)后，PTS與SQLE、FPPS與SQLE、PTS與FPPS均存在極顯著正相關(guān)關(guān)系。

2.3.2 0.25 mmol·L-1 MeJA處理后廣藿香JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及倍半萜合成途徑關(guān)鍵基因表達(dá)的相關(guān)性分析?從表3可以看出，0.25 mmol·L-1 MeJA誘導(dǎo)后，PTS與SQLE、FPPS與SQLE、PTS與FPPS均存在顯著正相關(guān)關(guān)系;JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑關(guān)鍵基因JAZ2與倍半萜合成途徑關(guān)鍵基因FPPS存在極顯著正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r達(dá)到0.914。

3?討論與結(jié)論

在植物中，茉莉酸甲酯的作用與植物激素發(fā)揮的作用相似，可通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有效調(diào)節(jié)植物的生長(zhǎng)發(fā)育、應(yīng)激反應(yīng)以及代謝產(chǎn)物 （Devoto &Turner， 2003; 蔣科技等，2010）。通過(guò)研究植物JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和倍半萜合成途徑，挖掘受MeJA調(diào)控的基因是進(jìn)一步研究?jī)蓚€(gè)途徑分子機(jī)制的關(guān)鍵。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，0.10和0.25 mmol·L-1的MeJA噴施廣藿香，JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的JAZ2、MYC2、COI1及倍半萜合成途徑的PTS、FPPS、SQLE基因表達(dá)量均有不同程度的上調(diào)，其中JAZ2表達(dá)量上調(diào)極顯著。這與已報(bào)道的丹參JAZs基因（裴天林，2019）、丹參SmMYC2基因（周陽(yáng)云，2015）、青蒿JAZ和COI1基因（陳俞裴，2017）、廣藿香FPPS基因（Tang et al.， 2019）、菊花TPS基因（王威姣，2020）經(jīng)MeJA處理后上調(diào)表達(dá)的結(jié)果類似。本研究結(jié)果表明廣藿香JAZ2、MYC2、COI1、PTS、FPPS、SQLE基因在轉(zhuǎn)錄水平上響應(yīng)了MeJA的誘導(dǎo)，關(guān)于進(jìn)一步的響應(yīng)調(diào)節(jié)機(jī)制仍需深入研究。

不同濃度MeJA的應(yīng)用對(duì)基因表達(dá)量和表達(dá)趨勢(shì)的影響是不一樣。本研究中，0.10 mmol·L-1MeJA溶液可在處理初期促進(jìn)廣藿香JAZ2、MYC2和SQLE的表達(dá)，而在0.25 mmol·L-1 MeJA溶液誘導(dǎo)初期，基因表達(dá)量沒(méi)有明顯上調(diào)，甚至出現(xiàn)抑制基因表達(dá)的現(xiàn)象。梁曉薇等（2017）研究發(fā)現(xiàn)，0.02和0.05 mmol·L-1的低濃度MeJA在處理初期能促進(jìn)甘草酸相關(guān)合成途徑酶基因表達(dá)，但較高濃度的MeJA（0.10 mmol·L-1）在處理初期沒(méi)有誘導(dǎo)相關(guān)基因表達(dá)。筆者推測(cè)MeJA濃度過(guò)高會(huì)抑制基因的表達(dá)，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，植物體內(nèi)MeJA降解到合適的濃度，進(jìn)而促進(jìn)基因的表達(dá)。MeJA濃度的高低是一個(gè)相對(duì)值，不同植物不同品種或者是同種植物的不同基因都有著不同的適宜誘導(dǎo)濃度。

用Pearson法分析廣藿香JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與倍半萜合成途徑關(guān)鍵基因的相關(guān)性，可知0.25 mmol·L-1 MeJA溶液誘導(dǎo)后，廣藿香JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑JAZ2與倍半萜合成途徑FPPS基因存在極顯著正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r高達(dá)0.914，推測(cè)外源性茉莉酸甲酯可通過(guò)廣藿香JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑JAZ2基因激活倍半萜合成途徑FPPS基因的協(xié)同表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控廣藿香倍半萜類合成，這與前人研究發(fā)現(xiàn)MeJA可通過(guò)JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)開(kāi)啟一系列萜類合成途徑相關(guān)基因的協(xié)同表達(dá)，從而在轉(zhuǎn)錄水平上影響植物的萜類合成的結(jié)果相符（Xu et al.， 2004; Suttipanta et al.， 2011; 何雪瑩，2016）;而低濃度MeJA溶液誘導(dǎo)后，兩個(gè)途徑關(guān)鍵基因間不存在極顯著正相關(guān)關(guān)系。由于植物基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)具有復(fù)雜性，推測(cè)只有當(dāng)MeJA溶液達(dá)到一定濃度時(shí)，廣藿香JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑關(guān)鍵基因才能開(kāi)啟倍半萜合成途徑相關(guān)基因的協(xié)同表達(dá)。此外，0.10 mmol·L-1 MeJA誘導(dǎo)后，倍半萜類合成骨架的上游基因SQLE與廣藿香醇合成途徑的下游基因PTS、FPPS存在極顯著性正相關(guān)關(guān)系，且0.25 mmol·L-1 MeJA誘導(dǎo)也具有類似的正向調(diào)節(jié)效果，推測(cè)MeJA誘導(dǎo)后倍半萜類合成骨架的上游基因能夠影響廣藿香醇合成途徑下游基因的表達(dá)。下游基因PTS和FPPS在兩種濃度MeJA誘導(dǎo)下分別存在極顯著和顯著正相關(guān)關(guān)系，表達(dá)量均在48 h達(dá)到最大值，F(xiàn)PPS能夠催化異戊烯基焦磷酸（IPP）和二甲基烯丙基焦磷酸（DMAPP）生成法尼基焦磷酸（FPP）等前體物質(zhì)，而PTS則可以催化FPP生成廣藿香醇等倍半萜類化合物（Frister et al.， 2015），推測(cè)MeJA誘導(dǎo)48 h后廣藿香醇含量會(huì)有一定程度的增加。

經(jīng)外源MeJA處理后，基因表達(dá)量在一定時(shí)間內(nèi)上調(diào)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)逐漸下調(diào)至處理前水平（魏潔書等，2013;梁曉薇等，2017）。本研究中，用兩種濃度MeJA溶液處理廣藿香，JAZ2、SQLE、PTS、FPPS基因表達(dá)量均在48 h達(dá)到最大值，MYC2和COI1基因表達(dá)量分別在2 h和12 h達(dá)到最大值，但72 h時(shí)各個(gè)基因的表達(dá)均呈現(xiàn)逐漸回落的趨勢(shì)，說(shuō)明基因表達(dá)受MeJA的調(diào)控是激發(fā)式的，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)最終會(huì)恢復(fù)至正常水平。綜上所述，MeJA溶液可誘導(dǎo)廣藿香JAZ2、MYC2、COI1、PTS、FPPS、SQLE基因的表達(dá)，且不同濃度MeJA對(duì)基因表達(dá)有著不一樣的影響;JAZ2是JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑里響應(yīng)MeJA誘導(dǎo)的主要基因，其可激活倍半萜合成途徑FPPS基因的協(xié)同表達(dá)，進(jìn)而影響廣藿香醇等倍半萜合成。

參考文獻(xiàn)：

AVANCI NC， LUCHE DD， GOLDMAN GH， et al.， 2010.Jasmonates are phytohormones with multiple functions， including plant defense and reproduction[J]. Genet Mol Res， 9（1）： 484-505.

BROWSE J， 2009. Jasmonate passes muster： A receptor and targets for the defense hormone[J]. Ann Rev Plant Biol， 60： 183-205.

CHEN YP， 2017. Functional verification of the jasmonic acid receptor gene AaCOI1 in Artemisia annua L.[D]. Chongqing： Southwest University.[陳俞裴， 2017. 青蒿茉莉酸受體AaCOI1的功能研究[D]. 重慶： 西南大學(xué).]

CHINI A， BOTER M， SOLANO R， 2009. Plant oxylipins： COI1/JAZs/MYC2 as the core jasmonic acid-signalling module[J]. Febs J， 276（17）： 4682-4692.

DEGUERRY F， PASTORE L， WU S， et al.， 2006. The diverse sesquiterpene profile of patchouli， Pogostemon cablin， is correlated with a limited number of sesquiterpene synthases[J]. Arch Biochem Biophys， 454（2）： 123-136.

DEVOTO A， TURNER JG， 2003. Regulation of jasmonate-mediated plant responses in Arabidopsis[J]. Ann Bot， 92（3）： 329-337.

FRISTER T， HARTWIG S， ALEMDAR S， et al.， 2015. Characterisation of a recombinant patchoulol synthase variant for biocatalytic production of terpenes[J]. Appl Biochem Biotechnol， 176（8）： 2185-2201.

HE XY， 2016. RNA sequencing on Amomum villosum Lour.-induced by MeJA identifies the genes of JA signal transduction and transcription factors involved in terpene biosynthesis[D]. Guangzhou： Guangzhou University of Chinese Medicine.[何雪瑩， 2016. 基于RNA-Seq的陽(yáng)春砂JA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及萜類合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的研究[D]. 廣州： 廣州中醫(yī)藥大學(xué).]

ITO K， AKAHOSHI Y， ITO M， et al.， 2016. Sedative effects of inhaled essential oil components of traditional fragrance Pogostemon cablin leaves and their structure-activity relationships[J]. J Tradit Complement Med， 6（2）： 140-145.

JIANG KJ， PI Y， HOU R， et al.， 2010. Jasmonate biosynthetic pathway： Its physiological role and potential application in plant secondary metabolic engineering[J]. Chin Bull Bot， 45（2）： 137-148.[蔣科技， 皮妍， 侯嶸， 等， 2010. 植物內(nèi)源茉莉酸類物質(zhì)的生物合成途徑及其生物學(xué)意義[J]. 植物學(xué)報(bào)， 45（2）： 137-148.]

KATSIR L， CHUNG HS， KOO AJ， et al.， 2008. Jasmonate signaling： A conserved mechanism of hormone sensing[J]. Curr Opin Plant Biol， 11（4）： 428-435.

LIANG XW， YANG Q， LI D， et al.， 2017. Regulation of methyl jasmonate on secondary metabolism of Glycyrrhiza uralensis root[J]. Guangdong Agric Sci， 44（6）： 57-62.[梁曉薇， 楊全， 李丹， 等， 2017. 茉莉酸甲酯對(duì)甘草根次生代謝的調(diào)控[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)， 44（6）： 57-62.]

LIU L， WU YG， YU J， et al.， 2016. Expression analysis of PTS gene of Pogostemon cablin at different time points[J]. J Trop Biol， 7（1）： 89-91.[劉璐， 吳友根， 于靖， 等， 2016. 廣藿香中PTS基因不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)分析[J]. 熱帶生物學(xué)報(bào)， 7（1）： 89-91.]

LIVAK KJ， SCHMITTGEN TD， 2001. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCt method[J]. Methods， 25（4）： 402-408.

National Pharmacopoeia Commission， 2015. Pharmacopoeia of the Peoples Republic of China （Part 1）[S]. Beijing： China Medical Science and Technology Press： 66.[國(guó)家藥典委員會(huì)， 2015. 中華人民共和國(guó)藥典（第一部）[S]. 北京： 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社： 66.]

PEI TL， 2019. The function of SmJAZ in regulating the biosynthesis of salvianolic acids and tanshinones in Salvia miltiorrhiza[D]. Yangling： Northwest A & F University.[裴天林， 2019. SmJAZ基因在調(diào)控丹參酮類和酚酸類物質(zhì)合成中的功能研究[D]. 楊凌： 西北農(nóng)林科技大學(xué).]

RYAN CA， 1990. Protease inhibitors in plants： genes for improving defenses against insects and pathogens[J]. Ann Rev Phytopathol， 28（1）： 425-449.

SUTTIPANTA N， PATTANAIK S， KULSHRESTHA M， et al.， 2011. The transcription factor CrWRKY1 positively regulates the terpenoid indole alkaloid biosynthesis in Catharanthus roseus[J]. Plant Physiol， 157（4）： 2081-2093.

TANG Y， ZHONG L， WANG X， et al.， 2019. Molecular identification and expression of sesquiterpene pathway genes responsible for patchoulol biosynthesis and regulation in Pogostemon cablin[J]. Bot Stud， 60（1）： 11.

WANG H， 2015. Research on volatile terpenoids and transcriptome changes of MeJA-induced Amomum villosum lour[D]. Guangzhou： Guangzhou University of Chinese Medicine.[王煥， 2015. MeJA影響陽(yáng)春砂揮發(fā)性萜類和轉(zhuǎn)錄組變化的研究[D]. 廣州： 廣州中醫(yī)藥大學(xué).]

WANG WJ， LI F， ZHANG WW， et al.， 2020. Cloning and expression characteristics of CmTPS1like gene in Chrysanthemum morifolium[J]. J Nanjing Agric Univ， 43（1）： 58-64.[王威姣， 李菲， 張皖皖， 等， 2020. 菊花CmTPS1like基因的克隆及表達(dá)特性[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 43（1）： 58-64.]

WEI JS， YANG JF， LING M， et al.， 2013. Regulatory effect of methyl jasmonate on HMGR， DXR and DXS genes expression in Amomum villosum Lour.[J]. J Guangzhou Univ Tradit Chin Med， 30（1）： 88-92.[魏潔書， 楊錦芬， 凌敏， 等， 2013. 茉莉酸甲酯調(diào)控陽(yáng)春砂HMGR、DXR和DXS基因表達(dá)[J]. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)， 30（1）： 88-92.]

XU W， WU YQ， DING HR， et al.， 2017. Research progress on pharmacological effects and mechanism of herba pogostemonis[J]. Shanghai J Tradit Chin Med， 51（10）： 103-106.[徐雯， 吳艷清， 丁浩然， 等， 2017. 廣藿香的藥理作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 上海中醫(yī)藥雜志， 51（10）： 103-106.]

XU YH， WANG JW， WANG S， et al.， 2004. Characterization of GaWRKY1， a cotton transcription factor that regulates the sesquiterpene synthase gene （+）-δ-cadinene synthase-A[J]. Plant Physiol， 135（1）： 507-515.

ZHOU YY， 2015. Functional characterization of SmMYC2a and SmMYC2b which regulate multiple jasmonate-inducible steps in the biosynthesis of active compounds in Salvia miltiorrhiza[D]. Fuzhou： Fujian University of Traditional Chinese Medicine.[周陽(yáng)云， 2015. 茉莉酸信號(hào)途徑關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子SmMYC2調(diào)控丹參有效成分生物合成的功能解析[D]. 福州： 福建中醫(yī)藥大學(xué).]

（責(zé)任編輯?何永艷）