王 莉，侯向萍，龔河軍，周 鳳，王瑞萍

（新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第一師阿拉爾醫(yī)院 新疆 阿拉爾 843300）

結(jié)核病是當(dāng)前威脅人類健康的常見(jiàn)呼吸道疾病之一，而我國(guó)又是世界上22個(gè)結(jié)核病高發(fā)國(guó)家之一，每年因結(jié)核病死亡的病例高達(dá)13萬(wàn)例。結(jié)核病是一種傳染病，其致病菌為結(jié)核分枝桿菌，雖然該疾病的臨床癥狀不明顯，病情發(fā)展較慢，但容易累及患者全身各個(gè)系統(tǒng)，且在診斷過(guò)程中極易發(fā)生漏診，最終造成患者死亡[1]。根據(jù)流行病學(xué)分析，我國(guó)結(jié)核病感染的人數(shù)超過(guò)5億，嚴(yán)重威脅患者身體及生命安全[2]。當(dāng)前，臨床常用結(jié)核病感染的檢測(cè)方法主要有結(jié)核培養(yǎng)、抗酸涂片等，但這些方法都有著較低的陽(yáng)性率、敏感度及特異度以及較長(zhǎng)的檢測(cè)周期[3]。因此，快速診斷及治療結(jié)核病是當(dāng)前控制結(jié)核病感染的重要措施。本研究選取2019年7月—2020年11月阿拉爾片區(qū)就診的289例疑似結(jié)核患者，分別進(jìn)行結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-SPOT試驗(yàn)）、抗酸桿菌涂片染色鏡檢，分析結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在阿拉爾片區(qū)結(jié)核病診斷中的運(yùn)用效果，現(xiàn)將研究方法及結(jié)果報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本次289例疑似結(jié)核患者來(lái)源于本院自2019年7月—2020年11月就診的。納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床完整資料可收集者；有咳嗽、咳痰、咯血或者午后低熱等癥狀者；完全知曉本研究的內(nèi)容并自愿參與者；具有較好依從性者。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重心、腎功能性疾病者；免疫系統(tǒng)疾病者；凝血障礙者或免疫系統(tǒng)疾病者；精神病者及意識(shí)障礙性疾病，無(wú)法有效配合研究者；不愿配合檢測(cè)、拒絕參加研究者。男性167例，女性122例；年齡（14～87）歲，平均年齡（48.89±4.11）歲。本研究符合醫(yī)學(xué)倫理。

1.2 方法

抗酸桿菌涂片染色鏡檢：根據(jù)CDC規(guī)定的方法圖片，由CDC培訓(xùn)后專職進(jìn)行涂片技術(shù)人員來(lái)負(fù)責(zé)。將涂片自然干燥后，置于染色架上；加熱固定；滴入石碳酸復(fù)紅溶液蓋滿玻璃片，染色10 min；流水自玻璃片一端輕緩沖洗，沖去染液，晾干；再滴入酸性酒精溶液蓋滿玻璃片，脫色1～2 min；采用流水沖洗玻璃片10～20 s；瀝干；加入亞甲藍(lán)溶液30～60 min；采用流水清緩沖洗玻片一端，將染色沖洗掉，瀝干，待鏡檢。

T-SPOT試驗(yàn)：清晨空腹抽取患者5 mL靜脈血，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，于被抗IFN-γ抗體微量板的4個(gè)孔中，加入不同的陽(yáng)性對(duì)照物。再一次向每孔中加入2×105濃度的PBMC，將其放在37℃的二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行20 h的孵育。在PBS溶液洗脫后再加入堿性磷酸酶標(biāo)記抗體及干擾素抗體，于室溫下孵育2 h。采用PBS溶液終止反應(yīng)，計(jì)算斑點(diǎn)數(shù)。陽(yáng)性診斷標(biāo)準(zhǔn)：比陰性對(duì)照多5個(gè)點(diǎn)。

1.3 觀察標(biāo)準(zhǔn)

比較兩種試驗(yàn)方法檢測(cè)的特異度、靈敏度、假陽(yáng)性、假陰性。靈敏度=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）×100%，特異性=真陰性/（假陽(yáng)性+真陰性）×100%。準(zhǔn)確率=（真陽(yáng)性+真陰性）/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用%表示，行χ2檢驗(yàn)，若P＜0.05表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 診斷結(jié)果

289例疑似結(jié)核患者中，確診98例，確診率33.91%，其中肺結(jié)核病患者73例，占74.49%，肺外結(jié)核病患者25例，占25.51%。

2.2 兩種檢測(cè)方法與金標(biāo)準(zhǔn)（痰培養(yǎng)）診斷結(jié)果比較

T-SPOT試驗(yàn)的特異度為83.77%、靈敏度為84.69%，準(zhǔn)確率為84.08%；抗酸桿菌涂片鏡檢的特異度為56.54%、靈敏度為31.63%，準(zhǔn)確率為48.10%。兩種試驗(yàn)的結(jié)果經(jīng)對(duì)比分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩種試驗(yàn)方法與金標(biāo)準(zhǔn)診斷結(jié)果比較

3.討論

結(jié)核病是由于結(jié)核桿菌感染所引起的慢性傳染病，可能侵入到全身各個(gè)器官，多侵犯患者肝臟。通常情況，潛伏期周期為4～8周，約有80%的患者發(fā)生在肺部，故肺結(jié)核在結(jié)核病中占有較大比重[4]。隨著環(huán)境污染的日益嚴(yán)重，結(jié)核發(fā)病率日益升高，除了少數(shù)發(fā)病急促外，多部分患者呈現(xiàn)慢性發(fā)病過(guò)程，且伴隨有低熱、乏力及咳嗽、咯血等癥狀，但多數(shù)不具有典型性，容易造成漏診或者誤診。因此，選擇合適的試驗(yàn)方法對(duì)提高結(jié)核病診斷水平具有重要意義。

當(dāng)前，細(xì)菌學(xué)試驗(yàn)是診斷結(jié)核病較為準(zhǔn)確的方法，但該檢測(cè)方法需要較長(zhǎng)檢測(cè)過(guò)程，且檢測(cè)過(guò)程較復(fù)雜，容易出現(xiàn)假陰性，不利大規(guī)模的結(jié)核病檢測(cè)[5]。近年來(lái)，隨著臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展，抗酸桿菌涂片鏡檢、T-SPOT在結(jié)核病診斷中得到應(yīng)用?？顾釛U菌涂片鏡檢是當(dāng)前應(yīng)用較廣泛的一種方法，其對(duì)于發(fā)現(xiàn)傳染源、確定診斷和制定化療方案、考核療效、評(píng)價(jià)防治結(jié)果等具有非常重要的意義。然而，我國(guó)人群卡介苗接種率相對(duì)較高，導(dǎo)致結(jié)核菌試驗(yàn)假陽(yáng)性率偏高，加上容易受到機(jī)體自身免疫狀態(tài)的影響，進(jìn)而限制了該試驗(yàn)方法的應(yīng)用[6]。T-SPOT是由酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)發(fā)展而來(lái)的檢測(cè)方法，主要是使用結(jié)核分枝桿菌特異性抗原刺激分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞因子干擾素分泌檢測(cè)抗原特異性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)情況，進(jìn)而判斷結(jié)核感染狀態(tài)，有著較高特異度及敏感度，更為重要的是其敏感度并不受到機(jī)體免疫狀態(tài)的影響[7]。我國(guó)石衛(wèi)武等[8]學(xué)者通過(guò)選取658例結(jié)核病患者為研究對(duì)象，所有接受檢測(cè)患者在抗結(jié)核之前均進(jìn)行T-SPOT檢測(cè)，比較疑似結(jié)核病、非結(jié)核病患者的試驗(yàn)結(jié)果，結(jié)果顯示結(jié)核病、疑似結(jié)核病、非結(jié)核病患者T-SPOT的陽(yáng)性率分別為85.71%，72.31%，28.63%，均具有顯著差異，表明T-SPOT試驗(yàn)在活動(dòng)性肺結(jié)核病診斷中有著較高輔助價(jià)值。而本研究選取2019年7月—2020年11月阿拉爾片區(qū)就診的289例疑似結(jié)核患者，分別進(jìn)行T-SPOT試驗(yàn)、抗酸桿菌涂片染色鏡檢，分析結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在阿拉爾片區(qū)結(jié)核病診斷中的運(yùn)用效果。結(jié)果顯示：T-SPOT試驗(yàn)的特異度和靈敏度明顯高于抗酸桿菌涂片染色鏡檢結(jié)果（P＜0.05）。表明T-SPOT試驗(yàn)用于結(jié)核病診斷中具有較高應(yīng)用價(jià)值。但也應(yīng)認(rèn)識(shí)到T-SPOT試驗(yàn)也存在一些不足，檢測(cè)步驟較繁瑣，價(jià)格較昂貴，對(duì)檢測(cè)人員的技術(shù)水平有較高要求，從而限制了其在基層醫(yī)院的應(yīng)用[9-10]。此外，該試驗(yàn)方法尚不能完全檢測(cè)結(jié)核病是否為陳舊性或者活動(dòng)性類型，因此，在后期研究中，應(yīng)明確結(jié)核分枝桿菌感染后的免疫反應(yīng)與結(jié)核病的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系。

綜上所述，阿拉爾片區(qū)結(jié)核病診斷中結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)有較高應(yīng)用價(jià)值，可提高結(jié)核病診斷水平，可進(jìn)行臨床應(yīng)用。但在本次研究中，樣本量較少，在以后的研究中將擴(kuò)大樣本量，對(duì)結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在阿拉爾片區(qū)結(jié)核病診斷中的運(yùn)用評(píng)價(jià)進(jìn)行深入探究。