賴海濤，呂禹澤，蘇國(guó)成, ，林瓊?cè)A

1.集美大學(xué)食品與生物工程學(xué)院（廈門 361021）；2.廈門市食品科技研發(fā)檢測(cè)中心（廈門 361100）

砷毒性大，可分為有無(wú)機(jī)砷和有機(jī)砷。醫(yī)學(xué)研究表明，在多數(shù)情況下無(wú)機(jī)砷比有機(jī)砷更毒，故常用無(wú)機(jī)砷的含量來(lái)反映砷的含量，又因As3+比As5+的毒性強(qiáng)60倍，所以研究常用As3+進(jìn)行[1-2]。在魚蝦等常見水產(chǎn)品中，常含有砷元素，由于無(wú)機(jī)砷毒性大，當(dāng)人食用含砷超標(biāo)的魚蝦等水產(chǎn)品后，有可能使人中毒、致癌甚至死亡[3-4]，所以對(duì)水產(chǎn)品中的無(wú)機(jī)砷含量進(jìn)行檢測(cè)很有必要[5-7]。目前國(guó)際上ISO（國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織）和CAC（國(guó)際食品法典委員會(huì)）標(biāo)準(zhǔn)中尚未有測(cè)定砷含量的標(biāo)準(zhǔn)方法[8]。我國(guó)目前使用的檢測(cè)砷含量的方法很多，包括滴定分析法、極譜法、氫化物原子吸收（HGAAS）法、電感耦合離子質(zhì)譜（ICP-MS）法、種子活化法、原子熒光光譜法等，它們有各自的缺點(diǎn)[3,9-10]：有的不夠靈敏，有的需要昂貴的儀器和試劑，有的只能檢測(cè)到總砷的含量，無(wú)法區(qū)分砷的價(jià)態(tài)[11-12]。所以建立一種快速、簡(jiǎn)單、靈敏的方法來(lái)檢測(cè)水產(chǎn)品明蝦中的砷很有意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

明蝦，廈門市售。

1.1.1 主要試劑

0.010 mg/mL As2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液，4.2×10-4mol/L KBrO3標(biāo)準(zhǔn)溶液，100 mg/L甲基橙標(biāo)準(zhǔn)溶液，1.0×10-4mol/L EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液，AR硝酸，AR鹽酸，用時(shí)配制成所需濃度，所用水均為超純水，所用玻璃瓶均用40%硝酸溶液浸泡24 h以上。

1.1.2 主要儀器與設(shè)備

XHF-I高速分散器（內(nèi)切式勻漿機(jī)，寧波新芝生物技術(shù)股份有限公司）；UV-5200型紫外可見分光光度計(jì)（上海元析儀器有限公司）；SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；FA1004電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）；SY-2-6電熱式恒溫水浴鍋（箱）（天津歐諾儀器儀表有限公司）；DHG-9146A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；各種型號(hào)可調(diào)式移液槍（熱電（上海）儀器有限公司）；0.45 μm微孔濾膜（混合纖維膜，上海市新亞凈化器件廠）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)原理

在酸性介質(zhì)中，BrO3-和Cl-發(fā)生反應(yīng)：2BrO3-+10Cl-+12H+＝Br2+5Cl2+6H2O，產(chǎn)生的Br2、Cl2能使甲基橙溶液褪色，若溶液中存在As(Ⅲ)，As(Ⅲ)將會(huì)和游離的Br2、Cl2發(fā)生氧化還原反應(yīng)，推遲甲基橙的變色時(shí)間[12]。試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定甲基橙的入射光波長(zhǎng)，建立甲基橙溶液褪色的推遲時(shí)間與As(Ⅲ)質(zhì)量濃度的線性關(guān)系，建立線性回歸方程，檢測(cè)樣品中砷As(Ⅲ)含量。

1.2.2 樣品處理流程

活明蝦去頭去尾去殼→挑出蝦線→切碎剁細(xì)→稱取10 g蝦肉→均質(zhì)→加入6 mol/L鹽酸→振蕩抽提1 h→EDTA絡(luò)合→過(guò)膜→樣品提取液。此蝦泥用時(shí)每份為10 g。

1.2.3 測(cè)定方法

1.2.3.1 甲基橙吸收曲線繪制[13]

空白液：在10 mL容量瓶中加入1.4 mL 2.5 mol/L的HCl，定容。

在10 mL容量瓶中加入1.4 mL 2.5 mol/L的HCl、1 mL 100 mg/L的甲基橙和5 mL超純水，置于23 ℃的水浴鍋中30 min，定容，以空白液作參比，用紫外可見分光光度計(jì)在300～700 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，確定甲基橙的入射光波長(zhǎng)。

1.2.3.2 As(Ⅲ)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

空白液：在10 mL容量瓶中加入1.4 mL 2.5 mol/L HCl和1 mL 4.2×10-4mol/L KBrO3溶液，定容。

分別在10 mL容量瓶中加入0，0.2，0.4，0.6，0.8和1.0 mL 10 μg/mL As2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液（即As2O3的質(zhì)量濃度分別為0，200，400，600，800和1 000 μg/L），在各個(gè)容量瓶中加入1.4 mL 2.5 mol/L的HCl、1 mL 100 mg/L的甲基橙和5 mL超純水，置于23 ℃的水浴鍋中30 min，再加入1 mL 4.2×10-4mol/L KBrO3溶液，迅速定容至10 mL，45 s內(nèi)轉(zhuǎn)移到比色皿中，測(cè)定508 nm波長(zhǎng)處的吸光度達(dá)到1.190時(shí)所需要的時(shí)間（即滯后時(shí)間），根據(jù)As(Ⅲ)質(zhì)量濃度與吸光度達(dá)到1.190所需時(shí)間建立線性方程。

1.2.3.3 樣品的測(cè)定

空白液：在10 mL容量瓶中加入1.4 mL 2.5 mol/L HCl和1 mL 4.2×10-4mol/L KBrO3溶液，用超純水定容至10 mL。

取1份（10 g）蝦泥，加入40 mL 6 mol/L鹽酸抽提，加入15 μL 1.0×10-4mol/L的EDTA溶液除去金屬干擾離子，過(guò)0.45 μm濾膜，在50 mL容量瓶中用超純水定容，得到樣品提取液。在10 mL容量瓶中加入1 mL樣品提取液、1.4 mL 2.5 mol/L的HCl、1 mL 100 mg/L的甲基橙和5 mL超純水，置于23 ℃的水浴鍋中30 min，再加入1 mL 4.2×10-4mol/L KBrO3溶液，迅速定容至10 mL，45 s內(nèi)轉(zhuǎn)移到比色皿中，檢測(cè)508 nm波長(zhǎng)處當(dāng)吸光度達(dá)到1.190時(shí)所需要的時(shí)間（即滯后時(shí)間），再根據(jù)線性回歸方程計(jì)算出As(Ⅲ)質(zhì)量濃度。

用10 g超純水替代樣品進(jìn)行上述操作，可計(jì)算出測(cè)定方法的檢測(cè)限。

2 結(jié)果與討論

2.1 甲基橙入射光波長(zhǎng)的測(cè)定

按1.2.3.1小節(jié)檢測(cè)甲基橙入射光波長(zhǎng)，結(jié)果見圖1。結(jié)果顯示，在508 nm波長(zhǎng)處甲基橙溶液有最大吸收峰，因此，把508 nm波長(zhǎng)作為入射光波長(zhǎng)。

圖1 甲基橙的吸收曲線

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

按1.2.3.2小節(jié)，繪制吸光度達(dá)到1.190時(shí)As(Ⅲ)質(zhì)量濃度與滯后時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見圖2。結(jié)果顯示，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為y=0.601 7x+43.476，相關(guān)系數(shù)為r=0.999 2，方程有良好的線性關(guān)系。

圖2 As(Ⅲ)質(zhì)量濃度與時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.2 精密度測(cè)定

取1.0 mL 10 μg/mL As2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2.3.2小節(jié)重復(fù)試驗(yàn)6次，結(jié)果如表1所示?？梢钥闯觯鄬?duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差δRSD＜5%，說(shuō)明方法精密度較好，在誤差允許范圍內(nèi)試驗(yàn)方法是可行的。

表1 精密度測(cè)定

2.2.3 Fe2+，Cu2+，Zn2+，Al3+的干擾試驗(yàn)

2.2.3.1 干擾離子的消除

在As(Ⅲ)溶液中加入0.0，10，100，1 000和10 000 μg/L等不同質(zhì)量濃度的Fe2+，Cu2+，Zn2+，Al3+等干擾離子，按1.2.3.2小節(jié)進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著Fe2+質(zhì)量濃度的增大，甲基橙的穩(wěn)定期會(huì)變短，甲基橙褪色越快，說(shuō)明Fe2+干擾越大，所以在樣品處理過(guò)程中用EDTA絡(luò)合除去Fe2+。而Cu2+，Zn2+，Al3+的干擾雖然影響很小，但仍可在樣品預(yù)處理時(shí)用EDTA絡(luò)合除去。

2.2.3.2 EDTA（1.0×10-4mol/L）用量

取若干份蝦泥，分別用0，10，15和20 μL 1.0×10-4mol/L的EDTA絡(luò)合，再按1.2.3.2小節(jié)進(jìn)行樣品中As(Ⅲ)的檢測(cè)，結(jié)果見圖3。由圖3可知，當(dāng)EDTA量少時(shí)，測(cè)定結(jié)果誤差較大；當(dāng)加入的EDTA過(guò)量時(shí)，EDTA不僅絡(luò)合掉了干擾離子，同時(shí)也絡(luò)合了部分As(Ⅲ)，測(cè)定結(jié)果誤差還是較大。故試驗(yàn)選用15 μL 1.0×10-4mol/L的EDTA來(lái)除去干擾離子以最大限度減小誤差。

圖3 EDTA用量

2.3 樣品測(cè)定

2.3.1 樣品檢測(cè)及加標(biāo)回收率試驗(yàn)

取若干份樣品，分別加入0.0，0.5，1.0和1.5 mL 100 μg/mL As2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后再按1.2.3.3小節(jié)進(jìn)行樣品As(Ⅲ)的檢測(cè)，平行試驗(yàn)3次，可得樣品的砷含量及加標(biāo)回收率，結(jié)果見表2?？梢钥闯觯魑r中As含量為9.32±0.13 mg/kg，該檢測(cè)方法的加標(biāo)回收率為91.40%～100.46%，說(shuō)明該試驗(yàn)系統(tǒng)誤差小，方法可行。

表2 加標(biāo)回收率

2.3.2 檢測(cè)限測(cè)定

用10 g超純水替代樣品進(jìn)行上述操作，共6組重復(fù)18次，可得樣品砷含量的最低檢測(cè)限。從表3可知，最低檢測(cè)限為0.28 mg/kg，檢測(cè)限低，說(shuō)明該檢測(cè)方法的靈敏度較高，可適用于無(wú)機(jī)砷的微量檢測(cè)。

表3 檢測(cè)限測(cè)定

3 結(jié)論

該方法與ICP-MS法、原子吸收法等比較，操作簡(jiǎn)單，響應(yīng)時(shí)間短，在10 min內(nèi)就能檢測(cè)出結(jié)果。其檢測(cè)限為0.28 mg/kg，加標(biāo)回收率為91.40%～100.46%，說(shuō)明該檢測(cè)方法可靠。試驗(yàn)只做了明蝦中As(Ⅲ)檢測(cè)，但可由此擴(kuò)展到快速檢測(cè)出其他水產(chǎn)品中As(Ⅲ)含量，同時(shí)也可為水產(chǎn)品檢測(cè)砷試劑盒的研制提供依據(jù)。