陳日錦 何就明 何小洪 杜廣勝 江玲 馮志濤 王曉玉

心力衰竭（heart failure，HF）是多種心血管疾病的終末階段，5年存活率和惡性腫瘤相仿，約為50%[1]。其本質(zhì)是一種分子-臨床綜合征，基因表達(dá)調(diào)控異常與心衰的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[2]。基于心衰發(fā)病的復(fù)雜性，臨床上趨向于聯(lián)合應(yīng)用多種生物標(biāo)志物以提高心衰臨床診斷與鑒別診斷、療效評估、危險(xiǎn)分層及預(yù)后評估的特異性及敏感性[3]。本研究旨在通過測定循環(huán)miRNA-21、IL-6、B型腦鈉肽（BNP）的水平變化情況，以闡明聯(lián)合檢測循環(huán)miRNA-21、IL-6、BNP對慢性心力衰患者的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年11月-2020年12月在本院心內(nèi)科住院的HF患者54例為觀察組，依據(jù)心功能等級分為A組（NYHAⅡ級，20例）、B組（NYHAⅢ級，18例）和C組（NYHAⅣ級，16例）；選取本院體檢中心體檢無HF者30例為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）觀察組符合文獻(xiàn)[4]《中國心力衰竭診斷和治療指南2018》心衰診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）觀察組慢性心衰病史大于6個(gè)月；（3）年齡30～80歲；（4）觀察組NYHA分級Ⅱ～Ⅳ級；（5）觀察組左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）＜50%。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）嚴(yán)重肝腎功能障礙或惡性腫瘤；（2）急、慢性感染性疾??；（3）血液系統(tǒng)疾??；（4）慢性阻塞性肺疾病及全身免疫性疾病等。A組男11例，女9例；年齡46～72歲，平均（62.00±12.66）歲；合并高血壓9例，合并糖尿病6例；吸煙12例；低密度脂蛋白（2.77±0.29）mmol/L。B組男10例，女8例；年齡45～75歲，平均（62.78±11.17）歲；合并高血壓8例，合并糖尿病5例；吸煙10例；低密度脂蛋白（2.81±0.33）mmol/L。C組男7例，女9例；年齡45～73歲，平均（68.00±8.03）歲；合并高血壓6例，合并糖尿病7例；吸煙11例；低密度脂蛋白（2.74±0.23）mmol/L。對照組男16例，女14例；年齡43～74歲，平均（64.40±10.03）歲，合并高血壓13例，合并糖尿病9例；吸煙16例；低密度脂蛋白（2.83±0.31）mmol/L。各組年齡、性別、高血壓病史、糖尿病史、吸煙史、低密度脂蛋白比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），有可比性。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 炎癥因子 所有研究對象均抽取清晨空腹靜脈血6 ml，恒溫箱溫浴30 min，以3 000 r/min離心10 min，取上清液，置于-80 ℃冰箱保存待測。運(yùn)用全自動(dòng)生化免疫分析儀和試劑盒，采用放射免疫法分析測定BNP水平，采用雙抗體夾心法原理測定IL-6水平。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)測定循環(huán)miRNA-21表達(dá)水平 采用ABI PRISM 7500 序列檢測系統(tǒng)檢測循環(huán)miRNA-21，qRT-PCR 反應(yīng)條件：95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s；40個(gè)循環(huán)，組內(nèi)重復(fù)3次取平均值。每個(gè)樣本均檢測3次。以Ct值表示循環(huán)miRNA表達(dá)水平。循環(huán)中循環(huán)miRNA-21的相對表達(dá)量采用2ΔΔCt法表示。

1.2.3 彩色多普勒超聲診斷系統(tǒng)對所有受試者進(jìn)行心臟B超檢查，測定左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析中，正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用Pearson檢驗(yàn)方法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組循環(huán)miRNA-21、IL-6、BNP、LVEF水平比較

HF各組循環(huán)miRNA-21、IL-6、BNP水平均高于對照組，LVEF均低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；C組BNP、IL-6、循環(huán)miRNA-21水平顯著高于A、B組（P＜0.05），LVEF 顯著低于 A、B 組（P＜0.05），見表 1。

表1 各組循環(huán)miRNA－21、IL-6、BNP、LVEF水平比較 （±s）

表1 各組循環(huán)miRNA－21、IL-6、BNP、LVEF水平比較 （±s）

*與對照組比較，P＜0.05；#與C組比較，P＜0.001；△與B組比較，P＜0.001。

組別 循環(huán)miRNA-21 IL-6（ng/L） BNP（ng/ml） LVEF（%）A 組（n=20） 1.08±0.53*# 11.46±1.77*# 125.75±11.57*# 46.52±2.16*#B 組（n=18） 1.43±0.20*# 11.46±2.80*# 314.94±22.07*# 43.22±2.21*#C組（n=16） 2.04±0.32*△ 27.75±2.48*△ 556.68±126.63*△ 37.18±3.05*△對照組（n=30） 0.29±0.07 5.87±1.41 49.10±19.76 61.60±5.39 F值 27.964 252.823 167.421 63.618 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.2 血漿中循環(huán)miRNA-21、IL-6與BNP、LVEF的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，HF患者循環(huán)miRNA-21水平與BNP呈正相關(guān)（r=0.67，P＜0.01），與LVEF呈負(fù)相關(guān)（r=-0.61，P＜0.01）。IL-6與 BNP呈正相關(guān)（r=0.88，P＜0.01），與LVEF 呈負(fù)相關(guān)（r=-0.83，P＜0.01）。

3 討論

心衰的發(fā)病率與年齡呈正相關(guān)，隨著老齡的進(jìn)展，心衰的發(fā)病率會(huì)進(jìn)一步升高，有必要根據(jù)生物標(biāo)志物對心衰進(jìn)行早期診斷，預(yù)后評估并指導(dǎo)治療[5]。目前已有多種與心衰密切相關(guān)的生物標(biāo)志物如BNP、N端前腦鈉肽（NT-proBNP）、超敏C反應(yīng)蛋白、肌鈣蛋白等在臨床廣泛應(yīng)用[6]。然而這些標(biāo)志物的診斷和預(yù)后價(jià)值也因疾病性質(zhì)、年齡、遺傳背景和生活方式等受到限制[7]。循環(huán)miRNA是一種高度保守的非編碼小RNA，主要通過影響心肌細(xì)胞的能量代謝、心肌纖維化、心室重構(gòu)、心肌細(xì)胞的自律性參與心力衰竭發(fā)生、發(fā)展的病理生理過程[8]。循環(huán)miRNA很穩(wěn)定，不僅存在于細(xì)胞內(nèi)，更可穩(wěn)定存在于血液循環(huán)中，是理想的生物標(biāo)志物[9]。大量研究表明，心臟和循環(huán)miRNA-21都與心肌纖維化程度有關(guān)[10]。在收縮期心衰時(shí)，循環(huán)miRNA-21抑制心臟成纖維細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致心肌肥厚和纖維化。在有癥狀的心臟患者中，miRNA-21也被認(rèn)為是一個(gè)潛在的重要預(yù)后生物標(biāo)志物。Zhang等[11]研究表明循環(huán)miRNA-21與HF癥狀嚴(yán)重程度的相關(guān)性，隨著NYHA等級的提高，循環(huán)外周靜脈血循環(huán)miRNA-21和冠狀靜脈循環(huán)miRNA-21水平逐漸升高，血清循環(huán)miRNA-21具有成為心衰標(biāo)志物的潛力。聯(lián)合分析miRNA-21、galectin-3、NT-proBNP可提高循環(huán)miRNA-21表達(dá)對預(yù)測無癥狀T2DM患者急性HF發(fā)生價(jià)值[12]。Wang等[13]研究發(fā)現(xiàn)miRNA-21和Cys C的聯(lián)合評估在老年2型心腎綜合征患者中具有良好的臨床價(jià)值。

目前指南推薦利鈉肽用于心力衰竭篩查、診斷和鑒別診斷、病情嚴(yán)重程度及預(yù)后評估[14]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，觀察組血漿循環(huán)miRNA-21的水平明顯高于對照組，且隨著NYHA心功能分級而逐漸升高。再次驗(yàn)證循環(huán)miRNA-21與心力衰竭的相關(guān)性[15-16]。

IL-6主要來源于活化的單核巨噬細(xì)胞。IL-6可降低心肌收縮力，促進(jìn)組織纖維化，同時(shí)可調(diào)節(jié)心肌肥厚。IL-6一定程度上反映心力衰竭嚴(yán)重程度，預(yù)測心血管事件的發(fā)生[17]。本研究結(jié)果表明：心衰患者IL-6水平與NYHA心功能分級呈正相關(guān)，可作為評價(jià)病情嚴(yán)重程度的指標(biāo)之一。然而本次研究樣本數(shù)有限，關(guān)于miRNA-21表達(dá)水平在慢性心力衰竭診斷價(jià)值仍需要進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，本研究表明心衰患者的血漿中循環(huán)miRNA-21、IL-6與BNP呈正相關(guān)，與LVEF呈負(fù)相關(guān)。在臨床上，可通過聯(lián)合檢測循環(huán)miRNA-21、BNP、IL-6等生物學(xué)標(biāo)志物，提高對心衰的早期診斷價(jià)值。