鄒 江 ，沈丹丹 ，王 東 ，王建華 ，羅立駿 △，曾令高

（1. 重慶市食品藥品檢驗檢測研究院·麻醉精神藥品質(zhì)量監(jiān)測重點實驗室，重慶 401121； 2. 重慶大學生物工程學院，重慶 400044）

甲磺酸伊馬替尼是全球首個獲批的小分子酪氨酸激酶抑制劑，其對 BCR － ABL 酪氨酸激酶［1－3］、血小板衍生生長因子受體［4］和 c － kit 酪氨酸激酶［5］有高度特異性，且不影響正常造血干細胞的生長。人用藥品注冊技術要求國際協(xié)調(diào)會議《殘留溶劑的指導原則》（Q3C）指出，殘留溶劑是指原料藥（API）、輔料及制劑的生產(chǎn)過程中使用過的溶劑，通過分離、純化等步驟不能保證完全將其除去，通常是指有機溶劑。20 世紀90 年代，殘留有機溶劑的毒性及致癌作用引起了各國研究機構(gòu)和監(jiān)管部門的重視，將其作為藥品質(zhì)量控制的一個重要內(nèi)容。甲磺酸伊馬替尼原料藥在其合成、晶型制備等過程中使用了多種有機溶劑［6－9］，如二類溶劑甲醇、四氫呋喃、N，N－二甲基甲酰胺（DMF），三類溶劑乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯，均對人體和環(huán)境具有潛在毒性，甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF 的限度分別為 0.3% ，0.5% ，0.5% ，0.5% ，0.5%，0.072% ，0.088%［10］。本研究中參照 2020 年版《中國藥典（四部）》通則 0861 殘留溶劑測定法［11］，建立了毛細管氣相色譜法同時測定甲磺酸伊馬替尼原料藥中上述7 種有機溶劑含量，并進行了方法學研究?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

7890B 型氣相色譜儀，包括FID 檢測器（美國Agilent公司）；XPE205 型電子分析天平（瑞士 MettlerToledo 公司）。

1.2 試藥

甲磺酸伊馬替尼原料藥（石藥集團歐意藥業(yè)有限公司，批號分別為 695171257，695180104，695180203）；乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜均為分析純，甲醇、四氫呋喃、DMF 均為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：以6%氰丙基苯－94%二甲基硅氧烷為固定液的 Agilent DB － 624 型毛細管柱（30 m × 320 mm，1.8 μm）；程序升溫：初始溫度為 45 ℃，保持 4 min，再以 15 ℃ ／min 的速率升至 200 ℃ ，保持 2 min；載氣：氮氣；流速：2 mL ／min；進樣口溫度：220 ℃，分流比：15 ∶1；檢測器：火焰離子化檢測器；檢測器溫度：250 ℃；氫氣流量：40 mL ／min；空氣流量：400 mL ／min；進樣量：1 μL。

2.2 溶液制備

取甲醇 3.010 3 g、乙醇 5.023 9 g、丙酮 5.015 5 g、異丙醇 5.007 6 g、乙酸乙酯 5.223 9 g、四氫呋喃 0.743 2 g、DMF 0.921 0 g，精密稱定，分別置 100 mL 容量瓶中，用二甲基亞砜定容，搖勻，各精密量取5 mL，置同一50 mL容量瓶中，用二甲基亞砜定容，即得混合對照品貯備液，精密量取5 mL，置50 mL 容量瓶中，用二甲基亞砜定容，即得混合對照品溶液。取甲磺酸伊馬替尼約1 g，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，用二甲基亞砜溶解并定容，搖勻，即得供試品溶液。取二甲基亞砜作為空白溶液。

2.3 方法學考察

系統(tǒng)適用性試驗：取2.2 項下空白溶液和混合對照品溶液各適量，按2.1 項下色譜條件進樣分析，色譜圖見圖1。甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF 依次出峰，分離度均大于1.5，基線分離良好；空白溶液在與上述7 種對照品溶液相同保留時間處無干擾峰，表明專屬性良好。

線性關系考察：精密量取2.2 項下混合對照品貯備液0.25，1.00，2.50，5.00，7.50，10.00 mL，分別置 50 mL容量瓶中，用二甲基亞砜定容，搖勻，制成系列溶合對照品溶液，取適量，按2.1 項下色譜條件進樣測定，以峰面積（A）為縱坐標、各成分質(zhì)量濃度（C，mg／mL）為橫坐標進行線性回歸。結(jié)果見表1。

檢測限考察：精密量取2.2 項下混合對照品貯備液0.5 mL，置100 mL 容量瓶中，用二甲基亞砜定容，搖勻，按 2.1 項下色譜條件進樣測定，以信噪比（S ／ N）＝3 計算檢測限。結(jié)果見表1。

圖1 氣相色譜圖1.methanol 2.ethanol 3. acetone 4.isopropanol 5. tetrahydrofuran 6.ethyl acetate 7.dimethylformamideA.Blank solution B.Mixed reference solutionFig.1 GC chromatograms

表1 7 種有機溶劑的線性范圍、回歸方程、檢測限Tab.1 Linear range，regression equation and LOD of seven organic solvents

精密度試驗：取 2.2 項下混合對照品溶液，按2.1 項下色譜條件連續(xù)進樣6 次，記錄峰面積。結(jié)果甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF 峰面積的 RSD 分別為 1.72% ，2.03% ，2.20% ，2.22% ，2.12%，2.04%，4.91%（n ＝ 6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取2.2 項下混合對照品溶液適量，室溫下放置 0，2，4，8，12 h 后，按 2.1 項下色譜條件進樣測定，計算各成分峰面積。結(jié)果甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF 的 RSD 分別為4.37%，6.95% ，8.32% ，14.94% ，4.72% ，7.22% ，11.57%（ n ＝5），表明對照品溶液室溫下放置8 h 內(nèi)相對穩(wěn)定。

加樣回收試驗：取甲磺酸伊馬替尼約0.5 g，精密稱定，置5 mL 容量瓶中，共9 份，分別加入約相當于各成分限度50%，100%，150%的混合對照品溶液，用二甲基亞砜定容，平行3 份，按2.1 項下色譜條件進樣測定，計算回收率。結(jié)果見表2。

2.4 樣品含量測定

取3 批原料藥，按2.1 項下色譜條件進樣測定。結(jié)果7 種殘留有機溶劑含量測定結(jié)果均低于檢測限。

3 討論

DMF 的沸點很高，不宜采用頂空進樣法，采用直接進樣法靈敏度高，精密度及重復性好。選擇溶劑時，由于四氫呋喃、DMF 限度要求較低，對靈敏度要求高，因此需制備的樣品質(zhì)量濃度很高。樣品僅在水、二甲基乙酰胺、二甲基亞砜中的溶解度滿足要求，若采用二甲基乙酰胺為溶劑，會對DMF 的檢測產(chǎn)生較大干擾，同時考慮到直接進樣，以水為溶劑影響色譜柱使用壽命，故采用二甲基亞砜為溶劑。選擇色譜柱時，本研究中涉及的有機溶劑極性差異較大，采用常見的非極性和弱極性色譜柱 HP －1（30 m × 0.25 mm，1.0 μm）和HP － 5（30 m ×0.25 mm，1.0 μm），發(fā)現(xiàn)丙酮和異丙醇難以實現(xiàn)基線分離；采用強極性色譜柱 DB－WAX（30 m×0.25 mm，0.25 μm），HP － Innowax（30 m × 0.25 mm，0.5 μm），HP － Innowax（30 m × 0.32 mm，0.5 μm），異丙醇和乙醇的分離度均不佳。同時發(fā)現(xiàn)，使用上述色譜柱時均存在不同程度的空白干擾。選用中等極性色譜柱DB － 624，能實現(xiàn)對各組分的良好分離，未發(fā)現(xiàn)空白干擾。

本研究中建立了同時測定甲磺酸伊馬替尼中7 種殘留溶劑含量的方法，3 批樣品的檢測結(jié)果均符合有關規(guī)定。所建立的方法操作簡便、快速，靈敏度及回收率均較高，可為制訂及完善甲磺酸伊馬替尼原料藥相關法定標準提供參考。

表2 加樣回收試驗結(jié)果（n ＝9）Tab.2 Results of the recovery test（n ＝ 9）