戴劍明， 謝志斌

肺癌的發(fā)病率和死亡率持續(xù)增長，已成為威脅人類生命安全的主要原因之一。除了外界因素的影響之外，人類基因遺傳多態(tài)性是腫瘤的發(fā)生發(fā)展的重要影響因素[1]。CD44為細(xì)胞黏附分子家族的一員，其為多種生長因子和細(xì)胞因子的受體，多項(xiàng)研究證實(shí)CD44過表達(dá)參與了各類惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，CD44單核苷酸多態(tài)性(SNP)為惡性腫瘤易感性的相關(guān)因素[2-3]。醌氧化還原酶(NQO1)為人體重要的Ⅱ相反應(yīng)酶，NQO1是一種重要的化學(xué)致癌物代謝酶，NQO1基因位點(diǎn)突變與多種惡性腫瘤易感性有關(guān)[4]。因此，本研究檢測了肺癌患者CD44基因的rs8193、rs13347基因位點(diǎn)及NQO1基因rs1437135、rs10517、rs1800566基因位點(diǎn)多態(tài)性，并探討其與肺癌易感性及化療預(yù)后的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取武漢科技大學(xué)附屬孝感醫(yī)院2017年1月至2018年1月收治的98例肺癌的患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理診斷確診為原發(fā)性肺癌；②CT顯示可測量病灶，美國東部腫瘤協(xié)作組(ECOG)評分0～2分；③同意參與本研究并簽署知情同意書；④均臨床資料完整，能夠配合完成此研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他臟器功能嚴(yán)重障礙者；②合并其他部位腫瘤者；③近期接受放化療治療者；④合并其他嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病者。另選擇同期100例健康體檢者作為對照組，均無溝通障礙、無不良基礎(chǔ)疾病，能夠配合完成此項(xiàng)研究。所有研究對象采用統(tǒng)一調(diào)查表調(diào)查年齡、性別、腫瘤家族史、吸煙狀況、既往病史，并統(tǒng)計(jì)肺癌患者臨床分期、病理類型、生存狀況、化療情況等。本研究獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)通過。

1.2 方法 所有患者均接受鉑類為基礎(chǔ)的一線化療，根據(jù)化療效果分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病穩(wěn)定(SD)和疾病進(jìn)展(PD)，其中CR為顯效組，PD為無效組。統(tǒng)計(jì)所有肺癌患者的中位生存時(shí)間(median survival time，MST)。

1.3 DNA提取 所有研究對象均收集5 ml靜脈血，采用QIAamp DNA Blood Mini Kit試劑盒(德國QIAGEN公司)提取DNA，采用NanoDrop2000分光光度計(jì)(美國ThemoFisherScientific公司)檢測DNA純度和濃度。

1.4 SNP位點(diǎn)基因分型 選取CD44基因的rs8193、rs13347基因位點(diǎn)及NQO1基因rs1437135、rs10517、rs1800566基因位點(diǎn)，根據(jù)Assay Design 3.1軟件(美國Sequenom公司)設(shè)計(jì)引物，并由上海英俊生物公司完成合成。將提純后的DNA樣品定量稀釋至100 ng/μl，PCR擴(kuò)增。將反應(yīng)產(chǎn)物樹脂純化，點(diǎn)樣于384孔SpctroCHIP(美國Sequenom公司)芯片上，經(jīng)MALDI-TOF-MS分析，通過Typer4.0軟件檢測質(zhì)譜峰，確定目標(biāo)位點(diǎn)基因型。

2 結(jié)果

2.1 CD44、NQO1基因多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系 CD44基因的rs8193、rs13347基因位點(diǎn)及NQO1基因rs1437135、rs10517、rs1800566基因位點(diǎn)的基因型和分布頻率在肺癌組及對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中，肺癌組CD44基因rs8193位點(diǎn)等位基因C分布頻率低于對照組，rs13347基因位點(diǎn)分布頻率高于對照組；肺癌組NQO1基因rs1437135位點(diǎn)等位基因A及rs1800566位點(diǎn)等位基因C分布頻率低于對照組，rs10517位點(diǎn)等位基因C分布頻率高于對照組。見表1、表2。

表1 兩組 CD44、NQO1基因分布頻率比較[例(%)]

表2 兩組 CD44、NQO1基因型分布比較[例(%)]

2.2 CD44、NQO1基因多態(tài)性與化療效果的關(guān)系 對比化療顯效和無效肺癌患者性別、年齡、吸煙史、病理類型，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；化療顯效和無效肺癌患者臨床分期、CD44基因的rs8193、rs13347基因位點(diǎn)及NQO1基因rs1437135、rs10517、rs1800566基因位點(diǎn)多態(tài)性比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 影響化療效果的臨床因素分析[例(%)]

2.3 CD44、NQO1基因多態(tài)性與肺癌患者預(yù)后的關(guān)系 不同CD44、NQO1基因型與肺癌患者中位生存時(shí)間(MST)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且CD44基因rs8193位點(diǎn)CC型、rs13347基因CT+TT型、NQO1基因rs1437135位點(diǎn)AA型、rs10517位點(diǎn)CT+TT型、rs1800566位點(diǎn)CC型MST相對每個(gè)位點(diǎn)其他分型更高。見表4。

3 討論

肺癌的發(fā)生發(fā)展為遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果[5]。主要的環(huán)境致癌因素有職業(yè)暴露、大氣污染、吸煙等，但不同個(gè)體對于環(huán)境致癌物的易感性也不同。環(huán)境中的致癌物多為間接致癌物，人體對環(huán)境致癌物的易感性與環(huán)境致癌物代謝相關(guān)酶的遺傳變異有關(guān)[7]。多數(shù)環(huán)境致癌物通過Ⅰ相、Ⅱ相代謝酶代謝而失活，從而失去致癌作用，一部分通過Ⅰ相、Ⅱ相代謝酶代謝進(jìn)一步活化，從而形成致癌性終產(chǎn)物，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

NQO1為NAD(P)H醌氧化還原酶，其以NAD(P)H為受體，從而將NADPH或NADH的電子傳遞給醌類與其衍生物，生成低毒的氫醌類化合物[7-8]，NQO1與其Ⅰ相、Ⅱ相代謝酶參與了機(jī)體解毒代謝過程。目前研究證實(shí)[9-10]，NQO1基因序列中非同義編碼基因SNP分別位于第四外顯子的G406C、C465T和第6外顯子的C609T可引起蛋白質(zhì)編碼氨基酸序列改變；并有研究發(fā)現(xiàn)，NQO1基因多態(tài)性與各類惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[11]。本研究對于健康人群及肺癌患者NQO1基因型和等位基因分別頻率研究顯示，肺癌患者NQO1基因rs1437135、rs10517、rs1800566基因位點(diǎn)均出現(xiàn)改變。其中，肺癌組CD44基因rs8193位點(diǎn)等位基因C分布頻率低于對照組，rs13347基因位點(diǎn)分布頻率高于對照組；肺癌組NQO1基因rs1437135位點(diǎn)等位基因A及rs1800566位點(diǎn)等位基因C分布頻率低于對照組，rs10517位點(diǎn)等位基因C分布頻率高于對照組。提示，NQO1基因突變導(dǎo)致機(jī)體NQO1相關(guān)酶活異常是導(dǎo)致肺癌發(fā)生發(fā)展的遺傳機(jī)制。

表4 不同CD44、NQO1基因型肺癌患者M(jìn)ST比較

基因型nMST (月)t值P值CD44/rs819310.700<0.001 CC2917.3±1.5 CT+TT6914.0±1.1CD44/rs1334714.447<0.001 CC4513.6±1.4 CT+TT5317.7±1.4NQO1/rs14371359.855<0.001 AA2517.2±1.0 AG+GG7314.5±1.6NQO1/rs1051711.877<0.001 CC4614.1±1.9 CT+TT5218.3±1.6NQO1/rs180056612.285<0.001 CC2117.4±1.5 CT+TT7713.8±1.4

CD44廣泛存在于上皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及中胚層細(xì)胞等細(xì)胞表面，CD44過表達(dá)可抑制細(xì)胞的凋亡作用，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力。Márquez-González等[12]研究發(fā)現(xiàn)，CD44變體與大腸癌的風(fēng)險(xiǎn)，TNM分期和腫瘤位置有關(guān)。CD44基因多態(tài)性與胃腸癌、肺癌等存在密切關(guān)系[13-15]。本研究選取了肺癌患者CD44基因的rs8193、rs13347基因位點(diǎn)，結(jié)果顯示，CD44基因的rs8193、rs13347基因位點(diǎn)與肺癌易感性相關(guān)。本研究中，CD44基因的rs8193、rs13347基因位點(diǎn)及NQO1基因rs1437135、rs10517、rs1800566基因位點(diǎn)多態(tài)性與肺癌患者化療效果及患者M(jìn)ST存在相關(guān)性。其中，且CD44基因rs8193位點(diǎn)CC型、rs13347基因CT+TT型、NQO1基因rs1437135位點(diǎn)AA型、rs10517位點(diǎn)CT+TT型、rs1800566位點(diǎn)CC型MST相對每個(gè)位點(diǎn)其他分型MST更高。因此，本研究推測CD44基因rs8193位點(diǎn)CC基因型、NQO1基因 rs1437135位點(diǎn)AA基因型及rs1800566位點(diǎn)CC型可能為抑制肺癌發(fā)生的保護(hù)因素，CD44基因rs13347位點(diǎn)CC基因型、NQO1基因rs10517位點(diǎn)CC基因型為肺癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素。但本研究未對納入人群的地域、種族、職業(yè)等環(huán)境因素進(jìn)行研究，這些因素可能對研究結(jié)果造成一定影響，在今后將進(jìn)一步研究，明確各項(xiàng)因素對CD44、NQO1基因多態(tài)性的影響，以期為肺癌患者的防控、診治提供理論依據(jù)。