衛(wèi)芳 王艷婷 趙靜雪 張二衛(wèi)

隨著科技的不斷發(fā)展和人們對高質量生活水平的需求增長，許多新興的產業(yè)和物種不斷產生，在滿足條件的同時一個隱形的殺手——生物安全問題日益凸顯。因此，微生物實驗室的風險評估和風險控制具有相當重要的意義。

為確保參與微生物實驗人員身體健康，環(huán)境不受污染，能夠正常開展微生物實驗，確保出具的數(shù)據(jù)準確、有效，需要對微生物實驗室所有實驗活動進行風險識別和分析評估，并提出相應的控制措施[1]。實驗室應建立并維持風險評估和風險控制程序，以持續(xù)進行危險識別、風險評估和實施必要的控制措施。

生物因子危害及風險控制措施

生物因子危害

實驗室使用的菌種基本包括大腸埃希氏菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌、單核增生李斯特氏菌、銅綠假單胞菌、副溶血性弧菌、產氣莢膜梭菌、糞鏈球菌等，存在一定的風險，包括菌種保存不當、未按照規(guī)定要求進行菌株傳代、操作時菌液濺灑、廢棄物處理不當?shù)取?/p>

風險控制措施

菌種保存不當：菌種保存應設置生物安全員專人負責保管，保存菌種的低溫冰箱設置雙人雙鎖。每次拿放菌種需要做相應的登記，由實驗室人員和生物安全員雙方簽字確認。

菌株傳代：菌株傳代應有完善的作業(yè)指導書和菌株傳代記錄，標準儲備菌株應在規(guī)定的時間內轉種傳代，并做相應的確認試驗，記錄相關原始數(shù)據(jù)存檔保存。

菌液濺灑：實驗室應具備防菌液濺灑措施，出現(xiàn)菌懸液濺灑時用消毒液進行處理，防止對人員和環(huán)境造成傷害和污染。

廢棄物處理不當：對于實驗室用過的帶菌的、污染過的培養(yǎng)基、試劑條、槍頭、接種環(huán)、玻璃器皿等廢棄物要采用相應的消毒劑滅菌或者121℃，30min以上高溫高壓滅菌，廢棄物的處理應有相應的制度和廢棄物處置記錄。

人員風險及風險控制措施

人員風險 由于微生物檢測人員專業(yè)知識欠缺，操作不規(guī)范導致實驗數(shù)據(jù)的不準確，甚至生物安全事故的發(fā)生。

風險控制措施 參與微生物檢測的人員應具備微生物相關專業(yè)知識，學歷、工作經驗應符合檢驗檢測要求，實驗室人員應熟悉生物檢測安全操作知識和消毒滅菌知識。

生物安全柜風險及風險控制措施

生物安全柜[2]風險 生物安全柜未按規(guī)定要求校準，參數(shù)不達標;未按照設備操作規(guī)程和使用說明進行操作維護可能使生物安全柜喪失功能，無法保證生物安全。

風險控制措施 應設置專門的設備管理員負責設備的定期校準和維護;制作生物安全柜操作規(guī)程，由專業(yè)老師培訓指導，考核通過方可上崗作業(yè)。

高壓滅菌器風險及風險控制措施

高壓滅菌器風險 高壓滅菌器未按規(guī)定要求校準，參數(shù)不達標，未按照設備操作規(guī)程和使用說明進行操作、維護，可能使滅菌效果降低或喪失。未定期做高壓滅菌器效果鑒定可能滅菌效果不達標導致滅菌不徹底，易引起空白長菌，樣品污染導致實驗失敗。高壓滅菌器內溫度過高，容易造成蒸汽燙傷。

風險控制措施 設置專門的設備管理員負責設備的定期校準和維護。參加高壓滅菌器的專業(yè)培訓，持證上崗。

建立高壓滅菌器效果鑒定作業(yè)程序[3]，包括監(jiān)測方法和監(jiān)測頻率。并記錄相關數(shù)據(jù)。

化學法監(jiān)測是指將滅菌指示條放入待滅菌的物品中，經一個滅菌周期后，顏色和性狀符合規(guī)定要求則為合格，反之則不合格。

培養(yǎng)后指示管不變色（呈紫色），表示滅菌通過。培養(yǎng)后指示管變色（呈黃色），表示滅菌不通過。同時培養(yǎng)的對照管應為陽性（呈黃色）。

待高壓滅菌器內壓力降至0、溫度降至規(guī)定要求再拿取物品，可帶上防高溫手袋避免燙傷。

電熱鼓風干燥箱風險及風險控制措施

電熱鼓風干燥箱風險 滅菌時間不夠，滅菌不徹底可能導致培養(yǎng)皿污染空白長菌。高溫設備使用不當可能導致燒傷、燙傷等危害。

風險控制措施 制作電熱鼓風干燥箱作業(yè)指導書，包含規(guī)范的操作流程和滅菌時間，避免安全事故的發(fā)生。

紫外燈風險及風險控制措施

紫外燈風險 紫外燈未定期更換，超過使用壽命，可能導致滅菌效果不達標。操作時未關閉紫外燈，長期紫外燈光照可能導致操作人員皮膚受損。

風險控制措施 完善紫外燈使用記錄，定期更換，加強人員監(jiān)督力度。制作安全使用警示標識貼在紫外燈開關明顯位置，提醒操作人員，操作前關閉紫外燈。

生物安全實驗室風險及風險控制措施

生物安全實驗室風險 布局不合理，無菌室、陽性對照室、培養(yǎng)間未獨立開可能造成交叉污染。未安裝壓差表，可能無法保證生物安全實驗室潔凈度。

風險控制措施 生物安全實驗室[4] 應設置無菌室、陽性對照室、培養(yǎng)間等功能間，能有效降低感染率。生物安全實驗室應安裝壓差表，通過壓力差控制氣流方向，保證生物安全實驗室潔凈度。

洗眼器風險及風險控制措施

洗眼器風險 未安裝洗眼器，當發(fā)生有害物質噴濺眼睛或者面部時不能起到有效的保護措施。

風險控制措施 在實驗室的適當位置安裝洗眼器，當發(fā)生有害物質噴濺眼睛或者面部時第一時間提供水沖洗，降低傷害。

培養(yǎng)基使用風險及風險控制措施

培養(yǎng)基使用風險 培養(yǎng)基未按規(guī)定進行驗收，可能原料不合格導致菌種生長異常影響實驗結果;培養(yǎng)基未按要求的環(huán)境條件儲存，造成培養(yǎng)基受潮結塊可能影響產品質量;培養(yǎng)基未按標準要求滅菌，導致培養(yǎng)基滅菌不徹底或者營養(yǎng)物質受損影響菌種生長。

風險控制措施 制作培養(yǎng)基驗收[5]記錄，包括外觀驗收、內容物檢查、產品質量指標驗收（包含所用的標準菌株的信息）;培養(yǎng)基、試劑應按照相應的儲存環(huán)境保存，并在儲存柜里放置溫濕度表，每天監(jiān)測溫濕度變化，保證儲存環(huán)境符合培養(yǎng)基、試劑的儲存要求;培養(yǎng)基應按照規(guī)定的壓力、溫度、時間要求滅菌。

玻璃器皿、酒精燈風險及風險控制措施

玻璃器皿、酒精燈風險 玻璃器皿破損，可能造成操作員手被劃傷;有裂紋的玻璃器皿高溫加熱可能炸裂造成安全事故。未規(guī)范使用酒精燈導致酒精濺灑遇明火燃燒造成火災。

風險控制措施 避免使用有缺口的玻璃儀器、操作前檢查玻璃器皿有無破損裂紋。操作時注意安全，避免劃傷。加熱玻璃器皿時拿取應戴上隔熱手套。酒精燈的使用應注意酒精濺灑，一旦濺灑燃燒可用濕布撲滅。燈內酒精不易裝得太滿，避免外溢。

無菌室潔凈度風險及風險控制措施

無菌室潔凈度風險 未定期做無菌室潔凈度驗證，潔凈度不達標，導致樣品污染。

風險控制措施 制作無菌室潔凈度驗證作業(yè)指導書，包括驗證的方法及頻次并做好相應的記錄，定期做無菌室潔凈度驗證[6] ，如大于所設定的風險值則應分析原因，并采取適當措施。

結論

生物安全問題已經受到普遍的關注，隨著科學技術的發(fā)展，越來越多的科學研究、醫(yī)療機構、企業(yè)生產等行業(yè)涉及到生物安全問題。微生物實驗室的風險評估和風險控制是一個持續(xù)進行的過程，以上分析的風險因素可能存在評估不全面、不到位、防控措施待改進等缺點，我們將在以后的評估中不斷完善改進。

參考文獻

[1]GB 19489-2008 實驗室 生物安全通用要求[S]. 中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局中國國家標準化管理委員會發(fā)布，2008.

[2]YY 0569-2011 Ⅱ級生物安全柜[S]. 國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布，2011.

[3]CNAS-CL01-A001檢測和校準實驗室能力認可準則在微生物檢測領域的應用說明[S]. 中國合格評定國家認可委員會發(fā)布，2018.

[4] GB 50346-2011 生物安全實驗室建筑技術規(guī)范[S].北京：中國建筑工業(yè)出版社，2011.

[5]GB 4789.28-2013 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 培養(yǎng)基和試劑的質量要求[S].中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會發(fā)布，2013.

[6]GB/T 27405-2008 實驗室質量控制規(guī)范 食品微生物檢測[S]. 中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局中國國家標準化管理委員會發(fā)布，2008.

衛(wèi)芳 王艷婷 趙靜雪 張二衛(wèi)

河南中方質量檢測技術有限公司