晏 英，陳 潔，唐 攀，毛遠(yuǎn)湖，李 毅，湯 磊，郝小江

1.貴州醫(yī)科大學(xué)醫(yī)藥衛(wèi)生管理學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025

2.貴州醫(yī)科大學(xué)/貴州省化學(xué)合成藥物研發(fā)利用工程技術(shù)研究中心，貴州 貴陽(yáng) 550004

3.貴州醫(yī)科大學(xué) 省部共建藥用植物功效與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550014

植物病毒是危害農(nóng)作物的一類(lèi)重要病原，因其危害大、防治困難，素有“植物癌癥”之稱(chēng)。由于植物病毒對(duì)植物細(xì)胞的絕對(duì)寄生性，病毒復(fù)制所需要的物質(zhì)、能量場(chǎng)所等完全由宿主提供，病毒能夠脅迫宿主細(xì)胞的生化機(jī)制，使其與病毒本身的生化機(jī)制糾纏在一起難以識(shí)別，所以藥物難以只對(duì)病毒進(jìn)行選擇性攻擊而不傷害宿主細(xì)胞，導(dǎo)致研究高選擇性的化學(xué)抗病毒制劑面臨極大的困難，至今仍未取得重大突破。煙草花葉病毒（tobacco mosaic virus，TMV）是其中最具代表性的植物病毒，該病毒發(fā)現(xiàn)110年以來(lái)，已發(fā)現(xiàn)可感染的植物高達(dá)500 種以上。TMV 是煙草生產(chǎn)上的嚴(yán)重病害，煙草及其他農(nóng)作物感染TMV 后，葉片葉綠素被破壞，光合作用減弱，生長(zhǎng)受抑制，造成植株生長(zhǎng)困難，畸形、矮化，甚至死亡。TMV 的防治較為困難，可導(dǎo)致農(nóng)作物減產(chǎn)幅度為20%～80%，全球每年因TMV 造成的損失可達(dá)數(shù)億美元[1]。煙草病毒病的發(fā)生日趨嚴(yán)重，尚未出現(xiàn)國(guó)際公認(rèn)的抗TMV 藥物[2]。因此，抗病毒制劑的研發(fā)和使用對(duì)于防治該病具有重要意義。

目前，傳統(tǒng)的抗病毒制劑往往效果不佳，或者對(duì)植物有毒害作用。運(yùn)用基因工程技術(shù)開(kāi)發(fā)轉(zhuǎn)基因抗病品種，如弱毒疫苗衛(wèi)星核酸等又存在一定爭(zhēng)議，不容易被采納。植物源活性物質(zhì)抗病毒效果良好，其治療效果不亞于化學(xué)合成制劑，且資源豐富，綠色環(huán)保，不會(huì)造成環(huán)境污染和殘留毒性問(wèn)題，具有廣闊的發(fā)展前景[3]。目前，從植物中分離得到的倍半萜內(nèi)酯、檸檬苦素、苦木素、石蒜生物堿、3-acetonyl-3-hydroxyoxindole（AHO）等化合物均有很強(qiáng)抗TMV 活性，從植物中分離純化化合物（即天然產(chǎn)物），篩選具有抗病毒活性的化合物，已經(jīng)被證實(shí)是一種有效對(duì)抗植物病毒的方法[4-6]。前期，本課題組研究楝科植物復(fù)葉地黃連抗TMV 活性成分的過(guò)程中，應(yīng)用TMV 活性追蹤法，分離得到一系列的抗TMV 活性成分檸檬苦素。深入研究發(fā)現(xiàn)，該類(lèi)化合物能誘導(dǎo)植物系統(tǒng)獲得抗性抵御病毒侵染，是潛在的新型植物系統(tǒng)獲得抗性化學(xué)誘導(dǎo)劑[7]。此類(lèi)化合物對(duì)TMV 新穎的作用機(jī)制，有望突破抗植物病毒劑研究的瓶頸。同時(shí)植物中存在的化學(xué)防御物質(zhì)對(duì)植物本身的自毒性是較小的，且具備特殊的識(shí)別病毒與宿主植物的能力，將有利于發(fā)現(xiàn)和研究新的抗病毒制劑。為了繼續(xù)尋找抗TMV 的活性化學(xué)成分，本研究進(jìn)一步了開(kāi)展楝科復(fù)葉地黃連植物的化學(xué)成分和抗TMV 活性研究。從復(fù)葉地黃連的甲醇提取物中分離得到了13 個(gè)化合物，分別鑒定為nymania-3（1）、prieurianin（2）、munronin L（3）、12-O-methylvolkensin（4）、12-hydroxyisopimara-8(14),15-dien-7-one（5）、munronin R（6）、3β,4βdihydroxypregnan-16-one（7）、(E)-aglawone-3-one（8）、N-(N-benzoyl-S-phenylalaninyl)-S-phenylalaninol acetate（9）、N-(N-benzoyl-S-phenylalaninyl)-Sphenylalaninol benzoate（10）、glabrol（11）、syringaresinol（12）、7-methoxy-8-hydroxydihydroasarone（13）。其中，化合物5、7～13 為首次從該植物中分離得到?；衔?～3、5、9～12 具有較強(qiáng)的抗TMV 活性。

1 儀器與材料

Bruker AM-400/600 MHz 核磁共振儀、Bruker HTC/Esquire 質(zhì)譜儀（德國(guó)布魯克公司）；高效液相色譜儀為Agilent 1200 型（美國(guó)安捷倫科技司）；色譜柱Phenomenex Luna C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，美國(guó)菲羅門(mén)公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化，N-1300D-WD）；BP211D 電子天平（Sartorouius 公司）；高速冷凍離心機(jī)（2K15 型，德國(guó)Sigma 公司），Sephadex LH-20（瑞典Pharmacia 公司）；C18反相硅膠（日本YMC 公司）；正相硅膠和薄層色譜板（青島海洋化工廠）；核磁用氘代試劑（美國(guó)CIL 氘代試劑），四甲基硅烷（TMS）為內(nèi)標(biāo)；液相用水（娃哈哈純凈水）；色譜級(jí)甲醇、乙腈（科密歐試劑公司）；其余化學(xué)實(shí)驗(yàn)用溶劑為分析純（天津市康科德科技有限公司）。

供試毒源：TMV（U1）普通株系，購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所。保存于-20 ℃，臨用時(shí)取出用0.01 mol/L PB 稀釋至50 μg/mL。供試寄主：心葉煙Nicotiana glutinosa，為T(mén)MV 枯斑寄主，普通煙K326Nicotiana tabacumK326，溫室中繁育，種子均購(gòu)于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所。

樣品采自云南省文山州，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)孫慶文教授鑒定為復(fù)葉地黃連Munronia henryiHarms，憑證標(biāo)本（DHL201511）保存于貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

2 方法

2.1 提取與分離

干燥的全株復(fù)葉地黃連10 kg，用甲醇回流提取3 次，每次2 h，趁熱濾過(guò)，合并提取液，將其濃縮至無(wú)醇味得粗提物1043 g，加水混溶成渾濁液體，用醋酸乙酯等體積萃取3 次，回收醋酸乙酯得浸膏。浸膏417 g 經(jīng)硅膠（100～200 目）柱色譜分離，以石油醚-丙酮體系為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫（50∶1→30∶70），得到6 個(gè)組分Fr.1～6。Fr.3（39.7 g）經(jīng)C18柱色譜分離，以甲醇-水（40∶60→100∶0）進(jìn)行梯度洗脫，得到5 個(gè)亞組分（Fr.3A～3E）。Fr.3C 經(jīng)硅膠（200～300 目）柱色譜進(jìn)行分離，以二氯甲烷-甲醇（30∶1→50∶10）進(jìn)行梯度洗脫，再經(jīng)HPLC 制備[甲醇-水（80∶20）]得到化合物1（28.1 mg）、5（10.4 mg）和12（9.3 mg）；Fr.3D 經(jīng)硅膠（200～300 目）柱色譜進(jìn)行分離，以石油醚-醋酸乙酯（80∶10→30∶10）進(jìn)行梯度洗脫，再經(jīng)凝膠反復(fù)柱色譜（甲醇）分離得到化合物4（13.7 mg）和6（15.8 mg）。Fr.4（51.6 g）經(jīng)C18柱色譜分離，以甲醇-水（50∶50→100∶0）進(jìn)行梯度洗脫，得到6 個(gè)亞組分（Fr.4A～4F）。4B 經(jīng)硅膠（200～300目）柱色譜進(jìn)行分離，以石油醚-醋酸乙酯（70∶10→20∶10）進(jìn)行梯度洗脫，再經(jīng)HPLC 制備[甲醇-水（73∶27）]得到化合物2（10.9 mg）、3（14.2 mg）和7（8.7 mg）；Fr.4C 經(jīng)硅膠（200～300 目）柱色譜進(jìn)行分離，以二氯甲烷-甲醇（20∶1→30∶10）進(jìn)行梯度洗脫，再經(jīng)凝膠反復(fù)柱色譜（甲醇）分離得到化合物8（24.3 mg）。Fr.5（49.3 g）經(jīng)C18柱色譜分離，以甲醇-水（60∶40→100∶0）進(jìn)行梯度洗脫，得到4 個(gè)亞組分（Fr.5A～5D）。5B 經(jīng)硅膠（200～300 目）柱色譜進(jìn)行分離，以石油醚-醋酸乙酯（50∶10→10∶20）進(jìn)行梯度洗脫，再經(jīng)HPLC制備[甲醇-水（65∶35）]得到化合物10（18.4 mg）和11（14.6 mg）；Fr.5D 經(jīng)硅膠（200～300 目）柱色譜進(jìn)行分離，以石油醚-醋酸乙酯（40∶10→10∶30）進(jìn)行梯度洗脫，再經(jīng)HPLC 制備[甲醇-水（60∶40）]得到化合物9（21.5 mg）和13（7.6 mg）。

2.2 活性篩選

2.2.1 化合物對(duì)TMV 的鈍化作用 挑選健康長(zhǎng)勢(shì)一致的5～6 葉期的心葉煙，暗室放置1 夜。將供試化合物與50 μg/mL 的TMV 按1∶1 比例混合至所需濃度，混勻放置0.5 h。每棵煙挑選大小相似的4～6 片葉子，每片葉子的一半摩擦接種化合物與TMV 的混合溶液100 μL 作為處理組；另一半摩擦接種50 μg/mL 的TMV 100 μL 作為陽(yáng)性對(duì)照組；摩擦接種相應(yīng)濃度DMSO 溶液的葉片作為空白組[8]。2 h 后用無(wú)菌水將葉表面的金剛砂洗凈。放入無(wú)蟲(chóng)溫室中，3～4 d 后按公式計(jì)算TMV 抑制率，每個(gè)化合物重復(fù)3 次。

抑制率＝1－處理的平均枯斑數(shù)/陽(yáng)性對(duì)照的平均枯斑數(shù)

2.2.2 化合物對(duì)TMV 的保護(hù)作用 挑選健康長(zhǎng)勢(shì)一致的5～6 葉期的心葉煙，暗室放置1 夜。每棵煙挑選大小相似的4～6 片葉子，供試化合物用無(wú)菌水稀釋為所需濃度，每片葉子的一半均勻施藥（化合物）100 μL 作為處理組，24 h 后每片葉子摩擦接種200 μg/mL TMV 200 μL，未施藥的一半作為陽(yáng)性對(duì)照，未施藥且摩擦接種相應(yīng)濃度DMSO 溶液的葉片作為空白。2 h 后用無(wú)菌水將葉表面的金剛砂洗凈。放入無(wú)蟲(chóng)溫室中，3～4 d 后按公式計(jì)算TMV 抑制率，每個(gè)化合物重復(fù)3 次。

2.2.3 化合物對(duì)TMV 的治療作用 挑選健康長(zhǎng)勢(shì)一致的5～6 葉期的心葉煙，暗室放置1 夜。每棵煙挑選大小相似的4～6 片葉子摩擦接種200 μg/mL TMV 200 μL，2 h 后每片葉子的一半均勻施藥（化合物）100 μL 作為處理；另一半作為陽(yáng)性對(duì)照；未施藥且摩擦接種相應(yīng)濃度DMSO 溶液的葉片作為空白。2 h 后用無(wú)菌水將葉表面的金剛砂洗凈。放入無(wú)蟲(chóng)溫室中，3～4 d 后按公式計(jì)算TMV 抑制率，每個(gè)化合物重復(fù)3 次。

新媒體以勢(shì)不可擋的信息技術(shù)迅速改變著我們的生活世界，繼而悄悄地然而又深刻地改變著我們所締造的文化世界。不僅僅是改變個(gè)體和社會(huì)的精神生活方式，而且改變著個(gè)體的實(shí)體性認(rèn)同，改變個(gè)體與他所處的整個(gè)世界的同一性方式和同一性性狀，最后，改變這個(gè)世界的精神氣質(zhì)和精神本質(zhì)，也就改變著我們的倫理世界。生活世界——文化世界——倫理世界，是新媒體邏輯和歷史地改變世界的三部曲。歸根結(jié)底，新媒體改變世界的基礎(chǔ)是賦權(quán)，通過(guò)賦權(quán)賦予傳播內(nèi)容一定的倫理地位，以全新的傳播和對(duì)話方式構(gòu)建倫理話語(yǔ)和倫理共識(shí)，為當(dāng)下的人類(lèi)文明發(fā)展?fàn)I造理想的倫理生態(tài)。

3 結(jié)果

3.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末；ESI-MSm/z:593[M＋Na]+，確定相對(duì)分子質(zhì)量為570；分子式C31H38O10；1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.29(1H,s,H-23),7.13(1H,s,H-21),6.95(1H,d,J=16.0 Hz,H-1),6.29(1H,d,J=16.0 Hz,H-2),6.16(1H,s,H-22),5.87(1H,d,J=8.0 Hz,H-12),5.62(1H,dd,J=8.0,12.0 Hz,H-11),5.37(1H,s,H-30b),5.25(1H,s,H-30a),3.89(1H,s,H-15),3.72(3H,s,7-OCH3),3.35(1H,d,J=8.0 Hz,H-5),3.09(1H,d,J=8.0 Hz,H-9),3.06(1H,dd,J=8.0,12.0 Hz,H-17),2.28(1H,d,J=16.0 Hz,H-6α),2.23(1H,dd,J=6.0,12.0 Hz,H-16α),2.19(1H,dd,J=8.0,16.0 Hz,H-6β),2.17(3H,s,12-OCOCH3),1.87(1H,dd,J=6.0,12.0 Hz,H-16β),1.73(3H,s,OCOCH3-11),1.56(3H,s,H-29),1.30(3H,s,H-19),1.01(3H,s,H-28),0.91(3H,s,H-18)；13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:173.5(C-7),170.3(12-OCOCH3),169.9(11-OCOCH3),166.6(C-3),148.4(C-1),142.5(C-23),140.2(C-21),136.6(C-8),121.2(C-30),121.1(C-2),122.0(C-20),111.1(C-22),83.5(C-4),74.2(C-12),71.0(C-11),71.0(C-14),59.5(C-15),53.2(C-17),52.3(OCH3-7),49.9(C-5),46.1(C-10),45.0(C-13),37.7(C-9),34.8(C-6),33.4(C-16),30.1(C-29),22.7(C-28),22.2(C-19),20.4(11-OCOCH3),20.3(12-OCOCH3),13.4(C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[9]，故鑒定化合物1 為nymania-3。

化合物2：白色粉末；ESI-MSm/z:785[M＋Na]+，確定相對(duì)分子質(zhì)量762；分子式C38H50O16；1H-NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.77(1H,s,COOH-11),7.26(1H,s,H-23),7.19(1H,s,H-21),6.16(1H,s,H-22),6.00(1H,dd,J=10.8,7.2 Hz,H-11),5.73(1H,s,H-1),5.52(1H,d,J=10.8 Hz,H-12),5.52(1H,s,H-30a),4.95(1H,s,H-30b),4.12(1H,d,J=12.0 Hz,H-28β),4.01(1H,m,H-2′),3.97(1H,d,J=12.0 Hz,H-28α),3.69(3H,s,OCH3-7),3.19(1H,d,J=3.0 Hz,H-2),3.14(1H,d,J=7.2 Hz,H-5),3.00(1H,m,H-17),2.99(1H,m,H-17),2.93(1H,s,H-9),2.87(1H,m,H-6α),2.66(1H,m,H-6β),2.28(1H,m,H-16α),2.12(3H,s,28-OCOCH3),2.07(3H,s,1-OCOCH3),2.05(1H,m,H-16β),2.00(1H,m,H-3′),1.48(1H,s,H-29),1.46(1H,m,H-4′α),1.17(1H,m,H-4′β),0.86(3H,d,J=6.0 Hz,H-5′),0.84(3H,s,H-19),0.83(3H,s,H-18),0.74(3H,t,J=6.6 Hz,H-6′)；13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ:206.2(C-15),174.9(C-7),170.2(C-3),169.6(28-OCOCH3),169.6(1-OCOCH3),168.5(C-1′),160.3(COOH-11),143.1(C-23),140.6(C-21),137.8(C-8),125.6(C-30),122.9(C-20),110.5(C-22),84.4(C-4),80.8(C-1),74.7(C-14),73.9(C-2′),71.4(C-11),71.4(C-12),69.7(C-28),53.4(OCH3-7),51.3(C-9),51.3(C-5),49.7(C-13),46.7(C-10),41.4(C-16),38.0(C-3′),36.9(C-17),35.2(C-2),32.8(C-6),25.9(C-29),23.0(C-5′),22.9(28-OCOCH3),20.7(1-OCOCH3),15.2(C-19),15.2(C-4′),13.0(C-18),11.5(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[10]，故鑒定化合物2 為prieurianin。

化合物3：白色粉末；ESI-MSm/z:621[M＋Na]+，確定相對(duì)分子質(zhì)量598；分子式C34H46O9；1HNMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.33(1H,s,H-23),7.15(1H,s,H-21),6.96(1H,m,H-3′),6.07(1H,s,H-22),5.15(1H,t,J=7.6 Hz,H-15),4.95(1H,t,J=3.4 Hz,H-3),4.80(1H,m,H-1),4.80(1H,m,H-7),4.11(1H,d,J=2.8 Hz,H-6),4.08(1H,m,H-12),3.61(1H,s,H-28),3.53(1H,d,J=8.8 Hz,H-17),3.21(3H,s,OCH3-12),2.86(1H,d,J=12.8 Hz,H-5),2.74(1H,d,J=8.4 Hz,H-9),2.20(1H,m,H-16α),2.06(1H,m,H-2α),2.06(1H,m,H-2β),2.02(1H,m,H-16β),1.92(3H,s,3-OCOCH3),1.91(1H,s,H-5′),1.85(3H,d,J=6.8 Hz,H-18),1.82(1H,d,J=6.8 Hz,H-4′),1.63(1H,m,H-11),1.19(1H,s,H-29),1.19(1H,s,H-30),1.91(1H,s,H-5′),0.96(3H,s,H-19)；13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ:170.3(OCOCH3-3),166.8(C-1′),143.3(C-23),142.0(C-13),138.8(C-21),138.4(C-3′),136.7(C-14),128.6(C-2′),128.1(C-20),109.7(C-22),101.3(C-12),77.8(C-28),75.0(C-15),73.8(C-6),71.6(C-1),71.5(C-3),70.7(C-7),54.9(OCH3-12),49.7(C-8),44.8(C-17),42.7(C-4),40.8(C-10),38.8(C-5),38.2(C-16),35.2(C-9),28.4(C-11),27.7(C-2),20.9(OCOCH3-3),20.4(C-30),19.3(C-29),16.6(C-19),16.4(C-18),14.6(C-4′),12.0(C-5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[11]，故鑒定化合物3 為munronin L。

化合物4：白色粉末；ESI-MSm/z:621[M＋Na]+，確定相對(duì)分子質(zhì)量598；分子式C34H46O9；1HNMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.31(1H,s,H-23),7.28(1H,s,H-21),6.97(1H,dd,J=7.2,6.0 Hz,H-3′),6.42(1H,s,H-22),4.96(1H,m,H-15),4.95(1H,d,J=3.0 Hz,H-3),4.74(1H,t,J=2.6 Hz,H-1),4.61(1H,s,H-12),4.37(1H,d,J=2.4 Hz,H-7),4.06(1H,dd,J=12.6,2.4 Hz,H-6),3.60(1H,d,J=7.2 Hz,H-28β),3.59(1H,d,J=7.2 Hz,H-28α),3.44(1H,d,J=9.0 Hz,H-17),3.18(1H,d,J=10.2 Hz,H-9),3.06(3H,s,OCH3-12),2.90(1H,d,J=12.6 Hz,H-5),2.60(1H,m,H-16α),2.24(1H,m,H-2β),2.17(1H,m,H-2α),2.01(3H,s,3-OCOCH3),1.95(1H,d,J=6.6 Hz,H-5′),1.83(1H,d,J=7.2 Hz,H-4′),1.77(1H,m,H-11α),1.76(3H,s,H-18),1.64(1H,m,H-16β),1.60(1H,m,H-11β),1.35(1H,s,H-30),1.20(1H,s,H-29),0.96(3H,s,H-19)；13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ:170.5(3-OCOCH3),167.0(C-1′),144.7(C-14),143.0(C-23),139.3(C-21),139.1(C-13),136.8(C-3′),129.6(C-2′),128.9(C-20),110.7(C-22),98.2(C-12),78.2(C-28),77.0(C-15),74.1(C-6),73.6(C-7),71.8(C-3),71.0(C-1),54.1(OCH3-12),47.0(C-17),46.3(C-8),42.9(C-4),40.9(C-10),38.7(C-5),38.1(C-11),35.0(C-9),31.7(C-16),27.9(C-2),21.1(3-OCOCH3),20.9(C-30),19.9(C-29),16.3(C-18),16.3(C-19),14.4(C-4′),12.1(C-5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[12]，故鑒定化合物4 為12-O-methylvolkensin。

化合物5：白色粉末；ESI-MSm/z:415[M＋Na]+，確定相對(duì)分子質(zhì)量392；分子式C25H28O4；1HNMR(400 MHz,CDCl3)δ:6.57(1H,d,J=2.7 Hz,H-14),5.84(1H,dd,J=10.8,17.6 Hz,H-15),5.19(1H,dd,J=0.8,10.8 Hz,H-16b),5.18(1H,dd,J=0.8,17.6 Hz,H-16a),3.71(1H,dd,J=3.6,12.0 Hz,H-12),2.57(1H,dd,J=4.8,18.4 Hz,H-6α),2.28(1H,d,J=17.6 Hz,H-9),2.26(1H,d,J=18.4 Hz,H-6α),1.86(1H,m,H-11β),1.76(1H,m,H-1β),1.56(1H,m,H-11α),1.55(1H,m,H-3β),1.54(1H,m,H-2),1.52(1H,m,H-5),1.20(1H,m,H-3α),1.19(1H,m,H-1α),1.09(3H,s,H-17),0.88(3H,s,H-19),0.85(3H,s,H-18),0.85(3H,s,H-20)；13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:200.7(C-7),143.5(C-15),142.9(C-14),135.1(C-8),115.1(C-16),73.2(C-12),51.2(C-9),50.4(C-5),44.0(C-4),41.7(C-3),38.7(C-1),37.5(C-6),36.2(C-10),33.2(C-13),32.6(C-18),26.7(C-11),21.1(C-19),18.6(C-2),17.9(C-17),13.8(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[13]，故鑒定化合物5 為12-hydroxyisopimara-8(14),15-dien-7-one。

化合物6：白色粉末；ESI-MSm/z:373[M＋Na]+，確定相對(duì)分子質(zhì)量350；分子式C21H34O4；1HNMR(400 MHz,CDCl3)δ:5.70(1H,s,H-14),4.24(1H,s,H-6),3.71(1H,d,J=5.2 Hz,H-7),3.71(3H,s,OCH3-15),2.23(1H,m,H-12β),2.21(1H,m,H-11β),2.20(1H,m,H-12α),2.19(1H,m,H-16),2.18(1H,m,H-11α),1.81(3H,s,H-17),1.76(1H,m,H-1β),1.56(1H,m,H-2),1.43(1H,m,H-3β),1.37(1H,m,H-5),1.31(3H,s,H-18),1.21(1H,m,H-3α),1.21(3H,s,H-19),1.15(1H,m,H-1α),1.02(3H,s,H-20)；13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:167.4(C-15),160.5(C-13),145.7(C-9),125.2(C-8),115.0(C-14),76.3(C-7),71.9(C-6),51.1(OCH3-15),49.5(C-5),43.0(C-3),40.8(C-12),39.7(C-10),39.5(C-1),33.9(C-20),33.7(C-4),26.7(C-11),24.4(C-19),21.7(C-18),19.3(C-2),19.1(C-16),18.1(C-17)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[14]，故鑒定化合物6 為munronin R。

化合物8：白色粉末；ESI-MSm/z:337[M＋Na]+，確定相對(duì)分子質(zhì)量314；分子式C21H30O2；1HNMR(400 MHz,CDCl3)δ:6.53(1H,q,J=8.0 Hz,H-20),2.25(1H,m,H-12α),2.18(1H,dd,J=7.6,17.0Hz,H-15α),1.97(1H,dd,J=14.6,17.0 Hz,H-15β),1.86(3H,d,J=8.0 Hz,H-21),1.76(1H,m,H-2α),1.73(1H,m,H-11α),1.72(1H,m,H-8),1.70(1H,m,H-1α),1.69(1H,m,H-7α),1.68(1H,m,H-4α),1.65(1H,m,H-12β),1.48(1H,m,H-11β),1.46(1H,m,H-14),1.35(1H,m,H-5),1.33(1H,m,H-2β),1.30(1H,m,H-4β),1.06(3H,s,H-18),1.04(3H,s,H-19),0.97(1H,m,H-1β),0.91(1H,m,H-7β),0.89(1H,m,H-9)；13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:211.6(C-3),206.2(C-16),147.7(C-17),129.2(C-20),53.4(C-9),49.8(C-14),46.5(C-5),44.5(C-4),43.3(C-13),38.1(C-12),38.0(C-15),37.8(C-2),36.1(C-1),35.7(C-10),34.0(C-8),31.6(C-7),28.6(C-6),21.1(C-11),17.6(C-18),13.2(C-21),11.4(C-19)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[16]，故鑒定化合物8 為(E)-aglawone-3-one。

化合物9：白色粉末；ESI-MSm/z:467[M＋Na]+，確定相對(duì)分子質(zhì)量444；分子式C27H28N2O4；1H-NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.76(2H,d,J=6.0 Hz,H-2′,6′),7.56(1H,t,J=7.2 Hz,H-4′),7.48(2H,t,J=7.6 Hz,H-3′,5′),7.33～7.09(10H,m,H-2′′～6′′,2′′′～6′′′),6.77(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),5.98(1H,d,J=9.6 Hz,H-5),4.80(1H,m,H-7),4.37(1H,m,H-4),3.97(1H,dd,J=12.0,4.8 Hz,H-3β),3.85(1H,dd,J=12.0,4.8 Hz,H-3α),3.26(1H,dd,J=12.0,6.0 Hz,H-10β),3.10(1H,dd,J=12.0,6.0 Hz,H-10α),2.81(2H,m,H-11),2.05(3H,s,H-1)；13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ:170.8(C-2),170.2(C-6),167.1(C-9),136.7(C-1′′),136.6(C-1′′′),133.6(C-1′),131.9(C-4′),129.3(C-3′′),129.3(C-5′′),129.3(C-3′),129.3(C-5′),129.1(C-3′′′),129.1(C-5′′′),128.8(C-2′′),128.8(C-6′′),128.6(C-2′),128.6(C-6′),128.6(C-2′′′),128.6(C-6′′′),127.2(C-4′′),126.8(C-4′′′),64.6(C-3),55.0(C-7),49.4(C-4),38.4(C-10),37.4(C-10),20.8(C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[17]，故鑒定化合 物 9 為N-(N-benzoyl-S-phenylalaninyl)-Sphenylalaninol acetate。

化合物10：白色粉末；ESI-MSm/z529[M＋Na]+，確定相對(duì)分子質(zhì)量506；分子式C32H30N2O4；1H-NMR(600 MHz,CDCl3)δ:7.71(1H,d,J=7.2 Hz,H-2′),7.69(1H,d,J=7.2 Hz,H-6′),7.67(1H,d,J=7.2 Hz,H-2′′′′),7.65(1H,d,J=7.2 Hz,H-6′′′′),7.53(1H,t,J=7.6 Hz,H-4′′′′),7.21～7.46(16H,m,H-3′～5′,2′′～6′′,2′′′～6′′′,3′′′′～5′′′′),6.70(1H,d,J=8.4 Hz,H-4),6.59(1H,d,J=6.4 Hz,H-7),4.94(1H,q,J=6.8 Hz,H-6),4.63(1H,m,H-3),4.05(1H,dd,J=4.4,11.6 Hz,H-2),3.32(1H,dd,J=6.4,14.0 Hz,H-10)；13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ:171.9(C-5),167.4(C-8),167.2(C-1),137.1(C-1′′′),135.7(C-1′′),134.1(C-1′),133.2(C-1′′′′),132.0(C-4′′′′),131.4(C-4′),129.3(C-3′′),129.3(C-3′′′),129.1(C-5′′),129.1(C-5′′′),128.8(C-6′′′′),128.8(C-6′′′),128.8(C-2′′),128.7(C-2′′′′),128.7(C-2′′′),128.7(C-6′′),128.6(C-6′),128.4(C-2′),127.4(C-4′′),127.1(C-5′),127.1(C-3′′′′),127.1(C-5′′′′),127.0(C-3′),126.8(C-4′′′),65.3(C-2),54.5(C-6),50.2(C-3),37.5(C-9),37.2(C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[18]，故鑒定化合物10 為N-(N-benzoyl-S-phenylalaninyl)-S-phenylalaninol benzoate。

化合物11：黃色粉末；ESI-MSm/z:415[M＋Na]+，確定相對(duì)分子質(zhì)量392；分子式C25H28O4；1HNMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.76(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),7.07(1H,s,H-6),7.07(1H,s,H-6′),6.55(1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),6.20(1H,s,H-2′),5.36(1H,dd,J=3.2,12.8 Hz,H-2),5.36(1H,t,J=6.0 Hz,H-2′′′),5.35(1H,t,J=6.0 Hz,H-2′′),3.43(2H,d,J=7.2 Hz,H-1′′′),3.38(2H,d,J=7.2 Hz,H-1′′),3.04(1H,dd,J=3.0,16.8 Hz,H-3β),2.83(1H,dd,J=7.2,16.8 Hz,H-3α),1.78(3H,s,H-4′′′),1.78(3H,s,H-5′′′),1.74(3H,s,H-4′′),1.74(3H,s,H-5′′)；13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:191.7(C-4),161.3(C-7),160.9(C-8a),152.9(C-4′),135.2(C-3′′′),134.7(C-3′′),130.7(C-1′),127.3(C-2′),127.3(C-3′),126.5(C-5),125.7(C-6),125.7(C-6′),121.7(C-2′′),121.0(C-2′′′),115.0(C-8),114.5(C-4a),110.4(C-5′),79.7(C-2),44.1(C-3),29.7(C-1′′′),25.8(C-4′′),25.8(C-4′′′),22.3(C-1′′),17.9(C-5′′),17.9(C-5′′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[19]，故鑒定化合物11 為glabrol。

化合物12：白色粉末；ESI-MS：m/z441[M＋Na]+，確定相對(duì)分子質(zhì)量418；分子式C22H26O8；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ:6.60(1H,s,H-2′),6.60(1H,s,H-2′′),6.60(1H,s,H-6′),6.60(1H,s,H-6′′),4.75(1H,d,J=3.4 Hz,H-2),4.75(1H,d,J=3.4 Hz,H-6),4.32(1H,dd,J=7.2,5.5 Hz,H-4α),4.32(1H,dd,J=7.2,5.5 Hz,H-8α),3.94(6H,s,3′,3′′-OCH3),3.92(3H,s,5′-OCH3),3.91(3H,s,5′′-OCH3),3.85(1H,m,H-4β),3.85(1H,m,H-8β)；13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:147.2(C-5′),147.2(C-5′′),147.2(C-3′),147.2(C-3′′),134.3(C-4′),134.3(C-4′′),132.1(C-1′),132.1(C-1′′),102.7(C-2′),102.7(C-2′′),102.7(C-6′),102.7(C-6′′),86.1(C-2),86.1(C-6),71.8(C-4),71.8(C-8),56.4(3′-OCH3),56.4(3′′-OCH3),56.4(5′-OCH3),56.4(5′′-OCH3),54.4(C-1),54.4(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[20]，故鑒定化合物12 為syringaresinol。

化合物13：白色粉末；ESI-MSm/z:279[M＋Na]+，確定相對(duì)分子質(zhì)量256；分子式C13H20O5；1HNMR(600 MHz,CDCl3)δ:6.90(1H,s,H-6),6.53(1H,s,H-3),4.42(1H,d,J=6.0 Hz,H-7),3.85(3H,s,4-OCH3),3.83(3H,s,5-OCH3),3.81(1H,s,H-8),3.78(3H,s,2-OCH3),3.23(3H,s,7-OCH3),1.01(1H,d,J=6.4 Hz,H-9)；13C-NMR(150 MHz,CDCl3)δ:152.7(C-2),149.3(C-4),143.6(C-5),118.3(C-1),111.1(C-6),97.4(C-3),81.7(C-7),71.8(C-8),57.4(7-OCH3),56.7(2-OCH3),56.7(5-OCH3),56.3(4-OCH3),18.0(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[21]，故鑒定化合物13 為7-methoxy-8-hydroxydihydroasarone。

3.2 抗TMV 活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

復(fù)葉地黃連全株中分離得到的化合物1～13 的抗TMV 活性結(jié)果見(jiàn)表1，從鈍化活性結(jié)果來(lái)看，化合物1～3、5、9～12 的抑制率高于寧南霉素，表明這些化合物在體外能作用于病毒；從保護(hù)活性來(lái)看，化合物1、3、4、10、11 高于寧南霉素，化合物2、5 與寧南霉素相當(dāng)，其余化合物均低于寧南霉素，表明化合物1～5、10、11 能誘導(dǎo)煙草獲得植物系統(tǒng)抗性抵御病毒；從治療活性來(lái)看，化合物1、4、5、11 高于寧南霉素，化合物2、3、9、12 和寧南霉素相當(dāng)，表明化合物1～5、9、11、12 能直接作用于病毒，不影響宿主細(xì)胞；從鈍化活性的IC50值結(jié)果來(lái)看，化合物1、2、3、5、9～12 具有較強(qiáng)的抗TMV 活性。結(jié)果顯示檸檬苦素類(lèi)化合物除了能誘導(dǎo)煙草獲得植物系統(tǒng)抗性抵御病毒，同時(shí)能作用于病毒，從結(jié)構(gòu)上看，化合物1 和2 屬于A,B 環(huán)開(kāi)裂的檸檬苦素，化合物3 和4 屬于C 環(huán)開(kāi)裂的檸檬苦素，說(shuō)明不同結(jié)構(gòu)類(lèi)型的檸檬苦素抗植物病毒能力不同。二萜化合物、二肽類(lèi)化合物、黃酮化合物既能誘導(dǎo)煙草獲得植物系統(tǒng)抗性抵御病毒，也能作用于病毒，具有較強(qiáng)的抗植物病毒能力，豐富抗植物病毒化合物結(jié)構(gòu)多樣性。

表1 化合物1～13 的抗TMV 活性Table 1 Antiviral activities of compounds 1?13 against tobacco mosaic virus

4 討論

通過(guò)應(yīng)用多種色譜方法從楝科植物復(fù)葉地黃連全株的甲醇提取物中分離得到13 個(gè)單體化合物，化合物5、7～13 為首次從該植物中分離得到。對(duì)化合物1～13 進(jìn)行抗TMV 活性測(cè)試，發(fā)現(xiàn)化合物1～3、5、9～12 具有較強(qiáng)的抗TMV 活性，其活性高于陽(yáng)性對(duì)照藥物寧南霉素。檸檬苦素類(lèi)化合物、二萜化合物、二肽類(lèi)化合物、黃酮化合物既能誘導(dǎo)煙草獲得植物系統(tǒng)抗性抵御病毒，也能作用于病毒，具有較強(qiáng)的抗植物病毒能力，檸檬苦素類(lèi)化合物抗植物病毒活性可能和骨架類(lèi)型緊密相關(guān)。本研究結(jié)果豐富了復(fù)葉地黃連的化學(xué)成分及生物活性?xún)?nèi)容，為其進(jìn)一步的研究開(kāi)發(fā)奠定了理論基礎(chǔ)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突