劉景宜

洛陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 洛陽(yáng) 471023

硝苯地平緩釋片Ⅰ是常用的降壓藥之一，硝苯地平血藥濃度時(shí)間曲線平緩長(zhǎng)久，每服用一次能維持最低有效血藥濃度（10 ng/mL）長(zhǎng)達(dá)12 h。不同時(shí)間的釋放度關(guān)系到藥效的好壞，合理準(zhǔn)確測(cè)定釋放度的結(jié)果比較重要。本試驗(yàn)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X-056）-2004Z 及《中國(guó)藥典》2015 年版四部通則0931 第二法及通則0401 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-2401PC 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）；UV-2700 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）；FADT-801 自動(dòng)取樣溶出系統(tǒng)（上海富科思分析儀器有限公司）；MSA224S-1CE-DU 電子天平（德國(guó)賽多利斯）；RCZ-8M 溶出試驗(yàn)儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）。

1.2 試藥

硝苯地平對(duì)照品批號(hào)：100338-201806，規(guī)格：100 mg/支，中國(guó)食品藥品檢定研究院生產(chǎn)，含量：99.9%。硝苯地平緩釋Ⅰ樣品為河南省2020 年硝苯地平類專項(xiàng)抽檢樣品；硝苯地平緩釋片Ⅰ樣品收集情況及執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，見(jiàn)表1。

表1 樣品收集情況及執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品的影響因素

對(duì)照品的制備：精密稱取硝苯地平對(duì)照品約12.5 mg，置25 mL 量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 mL，置100 mL 量瓶中，加鹽酸溶液稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液［1］。

配制對(duì)照品，總計(jì)7 次，測(cè)定吸光度，計(jì)算吸光度與對(duì)照品濃度的比值，再計(jì)算7 次比值的RSD（測(cè)定吸光度時(shí)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)均重新關(guān)機(jī)再開(kāi)機(jī)）。測(cè)量數(shù)值與計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 測(cè)量數(shù)值與計(jì)算結(jié)果

由表2 可見(jiàn)，對(duì)照品吸光度和濃度比值比較恒定，對(duì)照品狀態(tài)穩(wěn)定，對(duì)結(jié)果影響較小。實(shí)際工作中，配制一次對(duì)照品，測(cè)定吸光度后可以在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)狀態(tài)穩(wěn)定時(shí)多次使用該次測(cè)量結(jié)果，不需要每次在做釋放度時(shí)重新配制對(duì)照品。

2.2 濾膜的影響因素

在對(duì)陜西A 藥廠的樣品做檢驗(yàn)時(shí)，采用溶出儀自動(dòng)取樣，最后得到的檢驗(yàn)結(jié)果與藥廠的檢驗(yàn)結(jié)果存在較大差異，與廠家技術(shù)人員溝通后，又對(duì)可能影響釋放量的各種因素充分驗(yàn)證后，認(rèn)為造成結(jié)果差異的因素為濾膜的孔徑、材質(zhì)［2-8］。

根據(jù)《中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》2019 年版的規(guī)定，在對(duì)樣品進(jìn)行檢驗(yàn)前，先對(duì)對(duì)照品溶液進(jìn)行了濾膜吸附的檢查。方法如下：用對(duì)照品溶液規(guī)定的方法測(cè)定吸光度，然后用濾膜濾過(guò)后再測(cè)定吸光度，濾膜吸附應(yīng)在2%以下［9-10］。對(duì)照品溶液在最大吸收238 nm 處測(cè)定吸光度，數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

表3 濾膜過(guò)濾后對(duì)照品數(shù)據(jù)及誤差

由表3 可見(jiàn)，濾膜的孔徑、材質(zhì)對(duì)結(jié)果影響很大，其中尼龍材質(zhì)的濾膜對(duì)結(jié)果影響較小，在規(guī)定的2%范圍以內(nèi)，因此選擇使用津騰0.8 μm 尼龍濾膜做為樣品過(guò)濾時(shí)使用的濾膜。在進(jìn)行樣品實(shí)驗(yàn)前，先進(jìn)一步對(duì)津騰0.8 μm 尼龍濾膜進(jìn)行對(duì)照品吸附驗(yàn)證，防止表3 數(shù)據(jù)為偶然現(xiàn)象。數(shù)據(jù)見(jiàn)表4。

表4 津騰0.8 μm尼龍濾膜過(guò)濾后吸光度

由表4可見(jiàn)，津騰0.8 μm尼龍濾膜符合實(shí)驗(yàn)要求。

下面對(duì)6 個(gè)廠家8 個(gè)批次的樣品，根據(jù)WS1-（X-056）-2004Z 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行2 h 的釋放度測(cè)定，采用手動(dòng)取樣，分別使用溶出儀自帶的濾膜過(guò)濾和使用津騰0.8 μm 尼龍濾膜過(guò)濾，比較吸光度的誤差。數(shù)據(jù)見(jiàn)表5。

由表5 可見(jiàn)，使用不同的濾膜過(guò)濾對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果影響是很大的，誤差范圍5.1%～9.4%。在標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X-056）-2004Z 中，對(duì)2 h 釋放度規(guī)定的范圍為30%～55%，其中陜西A 公司3 個(gè)批號(hào)的產(chǎn)品在用儀器濾膜過(guò)濾時(shí)，檢驗(yàn)結(jié)果是不合格的，在用津騰濾膜過(guò)濾后，檢驗(yàn)結(jié)果為合格，由此可見(jiàn)，在檢驗(yàn)工作中需要手動(dòng)取樣后選擇合適的濾膜過(guò)濾，尤其是對(duì)一些檢驗(yàn)結(jié)果在邊緣的藥品。

表5 樣品2 h吸光度數(shù)據(jù)

下面對(duì)2 個(gè)廠家4 個(gè)批次的樣品，根據(jù)WS1-（X-056）-2004Z 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行4 h、8 h 的釋放度測(cè)定，采用手動(dòng)取樣，分別使用溶出儀自帶的濾膜過(guò)濾和使用津騰0.8 μm 尼龍濾膜過(guò)濾，比較吸光度的誤差。數(shù)據(jù)見(jiàn)表6。

由表6 可見(jiàn)，使用不同的濾膜過(guò)濾時(shí)，兩者在4 h 的誤差為3.5%～4.7%，在8 h 的誤差為2.4%～3.7%，由此可見(jiàn)，使用不同的濾膜對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響隨時(shí)間的變長(zhǎng)是逐漸降低的。

表6 樣品4 h、8 h吸光度數(shù)據(jù)

2.3 溫度的影響因素

《中國(guó)藥典》2015 年版四部通則0931 規(guī)定溶出介質(zhì)溫度為37.0±0.5 ℃，而在實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)，溶出介質(zhì)溫度分別為36.5 ℃和37.5 ℃時(shí)，也會(huì)對(duì)釋放度結(jié)果產(chǎn)生一定影響。選擇陜西A 公司，批號(hào)191111 的產(chǎn)品，在36.5 ℃和37.5 ℃時(shí)，在2 h 各進(jìn)行3 次測(cè)定。36.5 ℃測(cè)得吸光度的平均值為0.313 8，37.5 ℃測(cè)得吸光度的平均值為0.321 1，兩者差值為2.3%。由于樣本的數(shù)量較少以及樣本之間的不均一性，差值2.3%并不能完全反映出溫度對(duì)釋放度的影響，但也說(shuō)明當(dāng)溫度不夠準(zhǔn)確或波動(dòng)較大時(shí)會(huì)對(duì)釋放度結(jié)果產(chǎn)生一定影響。

3 討論

在測(cè)定對(duì)照品吸光度時(shí)，當(dāng)儀器狀態(tài)正常時(shí)，在不同時(shí)間不同儀器上測(cè)定的吸光度和濃度的比值基本上是恒定的，對(duì)照品對(duì)釋放度結(jié)果的影響很小，因此在測(cè)定時(shí)可以不考慮對(duì)照品的因素。溫度對(duì)釋放度結(jié)果影響較小，在正常測(cè)定時(shí)可以不考慮溫度的影響，只有當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果在規(guī)定限度的邊緣時(shí)需要考慮溫度因素。

濾膜是影響釋放度結(jié)果的主要因素，已經(jīng)影響到了檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，在檢驗(yàn)時(shí)必須考慮濾膜的影響。另外在使用津騰濾膜過(guò)濾樣品時(shí)，應(yīng)該棄去4 mL 左右的初濾液，使濾膜達(dá)到飽和，不影響吸光度的測(cè)定。