魏東升， 段廣東， 錢江潮

（華東理工大學生物反應器國家重點實驗室，上海 200237）

葡萄糖氧化酶（GOD，EC 1.1.3.4）是一種氧化還原酶，由兩個亞基組成同源二聚體，不同來源的GOD理化性質存在差異[1]，分子量在130～175 kDa范圍內的GOD可催化β-D-葡萄糖發(fā)生氧化反應生成葡萄糖酸和過氧化氫[2]。GOD被廣泛應用于食品、化工、生物醫(yī)療等領域。在食品行業(yè)，GOD可被用于催化葡萄糖耗盡真空袋中氧氣，抑制微生物生長和繁殖，延長食品保質期[3]，還可提升面制品的口感[4]。在化工領域，GOD不僅常被應用于漂白脫色工藝[5]，還是葡萄糖酸及其衍生物生產中的關鍵酶。醫(yī)療領域中，GOD是葡萄糖檢測試劑盒的關鍵原料[6]，也被加入牙膏中用于降低口腔疾病發(fā)生率[7]，還能作為生物電池的電極，為生物傳感器和人造器官提供持續(xù)的能源[8]。因此，大規(guī)模高效生產GOD具有重要的經(jīng)濟價值。

目前工業(yè)水平的GOD生產，主要以黑曲霉和青霉作為生產菌株，但存在酶活水平低、分離純化復雜的問題。為了實現(xiàn)GOD的高效生產，研究者已利用不同宿主嘗試了GOD的高效異源表達。但是，大腸桿菌（Escherichia coli）異源表達GOD時，容易形成無活性的包涵體[9]。釀酒酵母表達的GOD，由于過糖基化的原因，會降低重組GOD與葡萄糖的親和力和催化效率[10]。而畢赤酵母（Pichia pastoris）表達的GOD并不會產生過糖基化修飾的現(xiàn)象。Yamaguchi等[11]在P. pastoris中實現(xiàn)了GOD的分泌表達，但酶活只有1.23 U/mL。Gao等[12]通過密碼子優(yōu)化，使GOD酶活達到了615 U/mL。顧磊等[13]通過對GOD進行定點突變以及改造P. pastoris的翻譯加工和轉運的過程，提高了GOD的表達能力，在3 L發(fā)酵罐中，GOD分泌產量達到1 972 U/mL，為目前文獻報道的最高水平。

P. pastoris遺傳背景清楚，易于進行遺傳操作，分泌的蛋白糖基化適中，是一種進行外源蛋白表達的常用宿主。尤其是利用P. pastoris進行蛋白分泌表達，可大大簡化分離純化的過程，具有重要的應用價值。但是，外源蛋白的高效表達會對重組菌的內質網(wǎng)產生脅迫壓力，影響外源蛋白的折疊和轉運。因此，共表達輔助折疊因子，提高內質網(wǎng)處理蛋白的能力成為促進外源蛋白分泌表達的常用策略。例如，HAC1是由HAC1基因編碼的一個參與未折疊蛋白反應（Unfolded Protein Response, UPR）的轉錄因子，共表達HAC1可提高GOD和白介素等不同外源蛋白在P. pastoris中的分泌表達水平[13-14]。此外，外源蛋白的表達也會對宿主的碳代謝產生影響，Nocon等[15]通過強化磷酸戊糖途徑的SOL3和三羧酸循環(huán)的MDH1基因，使得重組超氧化物歧化酶產量提高了40%。

為了構建高效分泌表達GOD的P. pastoris，在本文中，黑曲霉來源的GOD序列被優(yōu)化后用于構建分泌表達GOD的P. pastoris重組菌，通過增加抗生素濃度，篩選得到GOD高拷貝重組菌株。在此基礎上，進一步共表達多個輔助折疊因子以及強化碳代謝途徑，探索多種組合策略組合對GOD分泌表達影響，獲得了第2代GOD高產菌，并在5 L和50 L發(fā)酵罐中對高產菌的工業(yè)應用前景進行考察和驗證。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株和質粒 大腸桿菌DH5α購自TaKaRa公司，畢赤酵母GS115購自Invitrogen公司；pPIC9K：購自Invitrogen，含有α-MF信號肽，以AOX1為啟動子，并能通過同源基因his整合到P. pastoris基因組上的表達載體（AmpR）；pPIC9K-GOD：本課題構建，以pPIC9K為載體，分泌表達GOD的重組質粒（AmpR）;T-GAPDH：本課題構建，將GAPDH基因片段整合到pUCm-T載體（含有LacZ基因，用于克隆含有A末端的線性載體）上；pAOX-SSN：本實驗室保存，包含P.pastoris染色體ADRH和DDKC基因同源序列，以AOX1調控基因表達的載體（ZeocinR）[16]; pAOX-PDI1：本實驗室保存，以pAOX-SSN為載體所構建AOX1調控PDI1表達的載體（ZeocinR）[16]; pAOX-MPD1：本實驗室保存，以pAOX-SSN為載體所構建AOX1調控MPD1表達的載體（ZeocinR）[16]; pAOX-PDI2:本實驗室保存， 以pAOX-SSN為載體所構建AOX1調控PDI2表達的載體（ZeocinR）[16]; pAOX-BIP:本實驗室保存，以pAOX-SSN為載體所構建AOX1調控Bip表達的載體（ZeocinR）[16]; pAOX-SIL1: 本實驗室保存，以pAOX-SSN為載體所構建AOX1調控SIL1表達的載體（ZeocinR）[16]; pAOX-HAC1:本實驗室保存，以pAOX-SSN為載體所構建AOX1調控HAC1基因表達的載體（ZeocinR）[16]; pAOX-ZWF1: 本實驗室保存，以pAOX-SSN為載體所構建AOX1調控ZWF1表達的載體（ZeocinR）[17]; pAOX-SOL3: 本實驗室保存，以pAOX-SSN為載體所構建AOX1調控SOL3表達的載體（ZeocinR）[17]; pAOX-MDH1: 本實驗室保存，以pAOX-SSN為載體所構建AOX1調控MDH1表達的載體（ZeocinR）[17]; pAOX-GDH3: 本實驗室保存，以pAOX-SSN為載體所構建AOX1調控GDH3表達的載體（ZeocinR）[17]。

1.1.2 酶和試劑 工具酶，包括T4連接酶、限制性內切酶（BamH I、EcoR I、XhoI、NotI、SalI等）、標準蛋白分子量Marker、標準核酸分子量Marker均購自大連TaKaRa生物技術有限公司；PCR所用的rTaqPCR聚合酶和pfuPCR 聚合酶均購自北京天根生化科技有限公司。

所用分子克隆試劑盒，包括質粒抽提試劑盒、DNA凝膠回收試劑盒、核酸純化試劑盒以及酵母基因組DNA提取試劑盒，均購自杭州愛思進生物技術有限公司。

1.2 方法

1.2.1 表達載體的構建 文中所用的引物見表1（劃線部分為限制性酶切位點）。構建AOX1啟動子調控GOD表達的質粒pPIC9K-GOD時，根據(jù)黑曲霉的GOD蛋白序列（UniProt: P13006），按照畢赤酵母的密碼子偏好性進行優(yōu)化后，合成Pgod基因，使用引物GODF和GODR擴增GOD序列，通過EcoR I和NotI酶切位點連接到pPIC9K載體上，構建GOD分泌表達載體pPIC9K-GOD。

表1 本研究中所使用的引物Table 1 Primers used in this study

1.2.2 重組菌的構建和篩選 用限制性內切酶SalI線性化質粒pPIC9K-GOD，純化后通過電擊畢赤酵母GS115感受態(tài)細胞，利用GS115的組氨酸缺陷型特征，在MD（Minimal Dextrose）固體培養(yǎng)基上篩選重組菌，并經(jīng)PCR和測序驗證。

使用無菌水洗滌收集MD培養(yǎng)皿中的重組菌，涂布在含有不同質量濃度（0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、1.75、2.0 mg/mL）遺傳霉素G418的YPD（Yeast Peptone Dextrose）培養(yǎng)皿上。挑取耐高抗生素濃度的重組菌，考察GOD產量并測定高產菌的拷貝子數(shù)。

獲得高拷貝高產菌G/GODM后，為了進一步共表達折疊因子或碳代謝途徑基因，將pAOX-PDI1、pAOX-MPD1、pAOX-PDI2、pAOX-BIP、pAOX-SIL1、pAOX-HAC1、pAOX-ZWF1、pAOX-SOL3、pAOXMDH1和pAOX-GDH3經(jīng)XhoⅠ/EcoRⅠ雙酶切后得到線性化片段，電擊轉化G/GODM，利用共表達基因兩端所插入的ADRH基因和DDKC基因同源序列，通過同源重組的方式分別整合到菌株G/GODM的基因組上。經(jīng)過博來霉素抗性篩選得到陽性克隆，經(jīng)PCR驗證及測序后篩選到正確的重組菌。

1.2.3 拷貝子數(shù)目測定 按照文獻已報道的方法[18]測定重組菌中GOD基因拷貝數(shù)。將參比質粒T-GAPDH、pPIC9K-GOD分別稀釋至每微升中有109、108、107、106、105、104、103個質粒、分別取1 μL上述質粒稀釋液作為模版進行熒光定量PCR，以Ct值（循環(huán)次數(shù)）為縱坐標、起始模版質粒濃度的對數(shù)值為橫坐標，繪制標準曲線。

以重組菌的基因組DNA為模板，以引物gapdhF、gapdhR、qGODF和qGODR進行熒光定量PCR。根據(jù)測得的Ct值和標準曲線確定重組菌GAPDH和GOD的起始模版量，計算兩者起始模版數(shù)量的比值，得到重組菌中GOD基因的拷貝子數(shù)。

1.2.4 重組菌的培養(yǎng)方法 在搖瓶中進行培養(yǎng)時，將重組菌接種到含25 mL的BMGY（Buffered Glycerol-Complex Medium）培養(yǎng)基中，于30 ℃、220 r/min培養(yǎng)約18 h至OD600在4～6之間，收集菌液至無菌的50 mL離心管中，于4 ℃、4 000 r/min離心5 min，用BMMY（Buffered Methanol-Complex Medium）培養(yǎng)基重懸菌體，并調節(jié)OD600在1左右，后轉移至裝有50 mL BMMY培養(yǎng)基的500 mL搖瓶中進行誘導培養(yǎng)，每隔24 h取樣，并補充1%（體積分數(shù)）的甲醇。

發(fā)酵罐中的培養(yǎng)分為3個階段：分批發(fā)酵階段、甘油流加階段和甲醇誘導階段。在分批發(fā)酵階段，控制通氣比約為1.5 VVM，攪拌轉速為600 r/min，待分批發(fā)酵結束、溶氧（Dissolved oxygen, DO）開始反彈時，開始補加甘油，通過控制甘油流加速率，使DO維持在5%～10%之間，當OD600達到400時，停止補加甘油，待DO反彈至100%，饑餓培養(yǎng)30～60 min后，開始緩慢流加甲醇，通過調整甲醇流加速率、攪拌轉速、通氣量等操作變量，控制DO在0～5%之間。整個培養(yǎng)過程中，通過補加氨水維持pH值在5.5，批發(fā)酵和甘油流加階段溫度設定在30 ℃，誘導階段溫度設定在22 ℃。

1.2.5 GOD活性測定 GOD酶活定義：在37 ℃下，每分鐘催化1 μmol的β-D-葡萄糖生成葡萄糖酸的酶量定義為1個單位酶活U。采用終點法測定GOD酶活：在10 mL離心管中依次加入2.5 mL的0.21 mmol/L的鄰聯(lián)茴香胺、0.3 mL的0.18 g/mL葡萄糖、0.1 mL的90 U/mL的辣根過氧化物酶，37 ℃保溫5 min后，向離心管中加入酶液，反應3 min后，加入2 mol/L硫酸終止反應，取出離心管，測定OD500的吸光值。

將GOD標準品稀釋至0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 U/mL，按照GOD酶活測定方法，測定反應3 min后的OD500值，以OD500值為橫坐標，以GOD酶活為縱坐標，繪制標準曲線用于計算酶活（Activity）：Activity=（0.157 8×OD500?0.003 3）×V/V0，其中V為反應總體積，V0為加入酶液的體積。

2 實驗結果

2.1 構建GOD高產菌G/GODM

為了實現(xiàn)GOD在P. pastoris中的分泌表達，選擇了pPIC9K載體，在EcoRI和NotI酶切位點插入Pgod基因，構建GOD分泌表達載體pPIC9K-GOD（圖1(a)），經(jīng)SalI酶切線性化后電擊轉化畢赤酵母GS115，在MD固體培養(yǎng)基上挑取陽性單菌落，使用引物GODF/GODR進行菌落PCR驗證重組菌，并經(jīng)測序驗證重組菌G/GOD構建成功（圖1(b)）。

圖1 酶切驗證質粒pPIC9K-GOD（a）和重組菌G/GOD、G/GODM的PCR驗證（b）Fig. 1 Enzyme digestion to confirm plasmid pPIC9K-GOD (a)and verification of recombinant strain G/GOD and G/GODM by PCR analysis (b)

在線性化pPIC9K-GOD轉化P.pastorisGS115的MD培養(yǎng)板上，用無菌水洗滌收集陽性重組菌，涂布在含有不同質量濃度（0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、1.75、2.0 mg/mL）遺傳霉素G418的YPD培養(yǎng)皿上，獲得多株耐G418質量濃度達到2.0 mg/mL的重組菌，在搖瓶中初步篩選后，挑選得到產量最高的菌株G/GODM（圖1(b)）。測定G/GOD和G/GODM的拷貝子數(shù)目分別為1和7。

在搖瓶中培養(yǎng)重組菌G/GOD和G/GODM，并與整合了空載質粒pPIC9K的對照菌G/9K相比，重組菌G/GOD和G/GODM的生長速率未發(fā)生改變（圖2(a) ），表明外源蛋白GOD表達并沒有影響重組菌生長，拷貝子數(shù)目的增加也對菌株生長沒有影響。在對照菌G/9K中無法檢測到GOD酶活，而兩株重組菌中的酶活在加入甲醇誘導后開始升高，但多拷貝重組菌G/GODM胞外產酶遠高于單拷貝菌G/GOD。G/GOD的胞外GOD產量在144 h達到最高，單位細胞干重酶活為714.2 U/g。G/GODM的胞外單位菌體酶活在120 h達到最高，為5 843.2 U/g（圖2(b)），是G/GOD最高產量的8.2倍。因此，在P. pastoris中整合高拷貝Pgod基因可得到GOD高產菌G/GODM。

圖2 不同拷貝重組菌在搖瓶中的生長（a）和胞外GOD比活（b）曲線Fig. 2 Growth (a) and extracellular GOD specific activity (b) curve of the recombinant strains containing different copy of Pgod gene in shake flask

2.2 強化蛋白折疊分泌和碳代謝途徑提高G/GODM的GOD產量

在得到GOD高產菌G/GODM后，為了進一步提高GOD的產量，通過強化G/GODM的蛋白折疊分泌碳和碳代謝途徑，嘗試構建第2代高產重組菌,結果如圖3所示?；诒緦嶒炇业那捌诠ぷ鱗16-17]，選擇了P. pastoris分泌折疊途徑的基因PDI1、MPD1、PDI2、Bip、SIL1、HAC1，以及碳代謝途徑基因ZWF1、SOL3、MDH1、GDH3，并利用前期構建的相應表達載體pAOX-X（X代表以上各基因），通過同源重組的方式整合到重組菌G/GODM基因組的RH-DDKC位點，即兩個相鄰基因ADRH（PAS_chr1-4_0191）和DDKC（PAS_chr1-4_0192）處。

挑取轉化得到的重組菌，分別用引物RHF/AOXR和CYCTTF/DDKCR驗證目的片段在上下同源臂位點的整合（如圖4），分別獲得了強化PDI1、MPD1、PDI2、Bip、SIL1、HAC1、ZWF1、SOL3、MDH1、GDH3基因的重組菌G/GMP1、G/GMMP1、G/GMP2、G/GMB、G/GMS1、G/GMH1、G/GMZ1、G/GMS3、G/GMMD1和G/GMG3。

圖3 二代重組菌的構建Fig. 3 Construction of second-generation recombinant strains

圖4 二代重組菌的驗證Fig. 4 Verification of second-generation recombinant strains

在搖瓶中培養(yǎng)重組菌，測定不同重組菌的胞內外酶活，結果如圖5所示。由圖可見，各重組菌都可有效將GOD分泌至胞外，誘導120 h、強化HAC1和PDI1后，與出發(fā)菌G/GODM相比，重組菌G/GMH1和G/GMP1的胞外單位菌體酶活分別提高了54.4%和32.7%，達到9 022.1 U/g和7 753.6 U/g；強化PDI2、SOL3和MDH1表達后重組菌胞外單位菌體酶活分別提高了8.9%、6.3%和11.6%。其余基因的共表達均未促進GOD胞外產量，其中共表達MPD1對產量的影響最大，G/GMMP1胞外單位菌體酶活只有2 330.6 U/g，比G/GODM下降了60%。從各重組菌的胞內酶產量來看，共表達這些基因的影響不大。

選擇GOD分泌產量提高的5個重組菌，考察它們的生長（圖6(a)）和胞外酶活（圖6(b)）。在這5個菌中，只有G/GMH1的生長速度低于出發(fā)菌G/GODM。從胞外GOD產量來看，除G/GMS3外，其他重組菌均明顯高于G/GODM，其中G/GMH1的胞外酶活最高，在120 h達到最高（9 022.1 U/g），比G/GODM的最高酶活提高了54.4%。

圖5 誘導120 h時二代重組菌胞內外酶活Fig. 5 Extracellular and intracellular GOD specific activity of the second-generation recombinant strains after 120 h of induction

2.3 反應器中考察高產重組菌的特性

根據(jù)搖瓶培養(yǎng)得到的結果，挑選高產重組菌G/GODM以及兩株第2代高產菌G/GMP1和G/GMH1，以單拷貝菌G/GOD為對照，在5 L反應罐中比較它們的生長曲線和產酶能力，結果如圖7所示。如圖7(a)所示，在甲醇誘導階段，G/GMH1的產菌量略低于其余3株重組菌，與搖瓶結果一致。各重組菌在誘導階段持續(xù)分泌GOD，隨著誘導培養(yǎng)的進行，胞外酶產量不斷升高（圖7(b)），誘導144 h后，單拷貝菌G/GOD胞外酶產量最低，重組菌G/GMH1的胞外酶產量最高，單位菌體酶活最高達到7 030.4 U/g，是G/GOD的6.6倍。除了G/GOD外，其余3株重組菌的胞外酶產量均低于搖瓶水平，G/GODM和G/GMP1尤其顯著。誘導結束時，G/GODM、G/GMP1、G/GMH1的酶活分別達到377.7、490.9、1 010.5 U/mL，分別是單拷貝菌G/GOD的2.2、2.8、5.8倍。

圖6 二代高產重組菌的生長（a）和胞外酶活（b）Fig. 6 Growth (a) and extracellular GOD specific activity (b) of the second-generation recombinant strains

圖7 5 L發(fā)酵罐中重組菌的生長（a）和胞外酶活（b）Fig. 7 Cell growth (a) and extracellular GOD specific activity (b) of recombinant strains in the 5 L bioreactor

對于胞外酶產量最高的G/GMH1，進一步在50 L發(fā)酵罐考察其特性。培養(yǎng)24 h時開始流加甲醇誘導，此后DO一直保持較低水平，而攝氧率（Oxygen Uptake Rate，OUR）和二氧化碳釋放率（Carbon Dioxide Evolution Rate，CER）都在快速上升至48 h后基本穩(wěn)定，此后呼吸熵（Respiratory Quotient，RQ）也相對穩(wěn)定（圖8(a)）。隨著甲醇誘導的開始，重組菌持續(xù)向胞外分泌GOD（圖7(b)），至發(fā)酵結束時，單位菌體和體積酶活均達到最高，分別為6 656.6 U/g和1 150.5 U/mL。這一結果表明，G/GMH1可在50 L發(fā)酵罐中實現(xiàn)較高的GOD分泌表達，具有良好的工業(yè)應用前景。

圖8 G/GMH1在50 L發(fā)酵罐中分批發(fā)酵的胞外GOD酶活、細胞干重、DO、OUR、CER、RQ時間曲線（a）和培養(yǎng)上清液的蛋白電泳（b）Fig. 8 Time courses of extracellular GOD specific activity, Dry cell weight, DO, OUR, CER, RQ (a) and protein electrophoresis of supernatant solution (b) in the 50 L fedbatch fermentation using the strain G/GMH1

3 討 論

為了獲得具有工業(yè)生產價值的GOD高產菌，我們采用黑曲霉的葡萄糖氧化酶蛋白序列，經(jīng)過密碼子優(yōu)化，構建分泌表達GOD的P. pastoris重組菌G/GOD，并通過提高抗生素濃度，篩選得到高產量重組菌G/GODM，在搖瓶中GOD分泌產量可達5 843.2 U/g，為G/GOD最高產量的8.2倍。在此基礎上，進一步構建了多個共表達輔助折疊因子和強化碳代謝途徑的第2代高產菌（表2），其中，共表達HAC1的重組菌G/GMH1單位菌體酶活最高，為9 022.1 U/g。在5 L和50 L反應器中，重組菌G/GMH1的胞外GOD產量可達到了7 030.4 U/g和6 656.6 U/g。與已報道GOD表達水平比較，重組菌G/GMH1胞外單位菌體酶活為目前報道搖瓶培養(yǎng)和反應器水平最大值，顯示了工業(yè)應用的潛力。

圍繞提高GOD在P. pastoris的分泌表達，我們嘗試了增加基因拷貝數(shù)、共表達輔助折疊因子和強化碳代謝途徑的策略，其中，增加GOD基因的拷貝數(shù)和共表達UPR靶基因的轉錄因子HAC1取得了最顯著的促進作用。這一結果表明，增加基因劑量可有效促進外源蛋白的表達，但過量的外源蛋白表達有可能導致蛋白無法及時進行正確折疊和轉運，此時共表達HAC1不僅能夠刺激蛋白酶的表達，降解折疊錯誤的蛋白，而且可以調控UPR響應下游基因的表達，促進蛋白的正確折疊和轉運。此外，共表達PDI1和PDI2蛋白也可增強GOD的分泌表達，可能是因為GOD蛋白的186和228位點存在二硫鍵，這兩種二硫鍵異構酶蛋白有助于二硫鍵形成，促進了蛋白的正確折疊和分泌。

表2 所構建重組菌的胞外單位菌體GOD酶活Table 2 Extracellular GOD specific activity of the recombinant strains

對碳代謝途徑進行改造時，強化三羧酸循環(huán)循環(huán)的蘋果酸脫氫酶基因MDH1和磷酸戊糖途徑的6-磷酸葡萄糖酸內酯酶基因SOL3均能提高GOD的胞外產量。MDH1催化蘋果酸向草酰乙酸的轉化，并伴隨NAD+向NADH的還原，可增強細胞的能量代謝，為蛋白合成提供ATP[19]。SOL3是磷酸戊糖途徑途徑中第二步關鍵酶，強化SOL3的表達有可能提高磷酸戊糖途徑途徑的通量，為蛋白質合成提供更充足的還原性輔因子NADPH。強化SOL3和MDH1基因有利于外源蛋白的表達，這與Nocon等[15]通過模型預測得到的結果一致，也說明在外源蛋白高效表達時，需要對P. pastoris的胞內碳代謝進行改造以適應蛋白合成的需求并促進其表達。在我們分別強化輔助折疊因子和碳代謝途徑取得正效應的基礎上，后續(xù)可嘗試多基因組合的優(yōu)化策略，或通過蛋白質改造提高GOD的催化活性，來構建下一代的高產菌。

在得到GOD高產菌后，我們進一步在反應器規(guī)模驗證G/GMH1的性能。雖然共表達HAC1基因后，重組菌的生長稍低于出發(fā)菌G/GODM，但其單位菌體產量遠高于出發(fā)菌，在50 L規(guī)模的反應器中最高體積產量達到1 150.5 U/mL。但是，隨著發(fā)酵規(guī)模的擴大，G/GMH1單位菌體酶活出現(xiàn)下降的趨勢，在50 L反應器中，GOD的最高胞外單位菌體酶活為6 656.6 U/g，僅為搖瓶最高水平（9 022.1 U/g）的73.4%。這一現(xiàn)象表明，G/GMH1的高產性能并沒有在發(fā)酵罐中得以實現(xiàn)，重組菌在反應器中的發(fā)酵過程還需進行優(yōu)化。后續(xù)可通過優(yōu)化培養(yǎng)基配方，調整和優(yōu)化過程控制參數(shù)，為重組菌的生長和蛋白表達提供更適宜的環(huán)境，充分發(fā)揮G/GMH1的高產性能。