姜鳳婷，鄭眉 綜述，周旭，晏子厚 審校

上海生物制品研究所有限責(zé)任公司,上海200050

根據(jù)世界衛(wèi)生組織 ／ 國(guó)際癌癥研究署(World Health Organization ／ The International Agency for Research on Cancer,WHO ／ IARC)發(fā)表的最新全球癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,2018 年全球約有1 807 萬(wàn)新增癌癥病例,955 萬(wàn)死亡病例［1］。我國(guó)新發(fā)癌癥428.5萬(wàn)例,死亡病例286.5 萬(wàn)例,其中肺癌、結(jié)直腸癌、胃癌、肝癌及乳腺癌等常見(jiàn)實(shí)體瘤的發(fā)病率占我國(guó)新發(fā)癌癥病例數(shù)的58.6%［1］。肺癌仍居全球癌癥發(fā)病率和死亡率之首；乳腺癌是威脅女性健康的重要病因［2］；胰腺癌是預(yù)后最差的惡性腫瘤之一,5年生存率僅9%［3］。諸多腫瘤致病因素復(fù)雜多樣,治療方法不盡相同,臨床治療仍以手術(shù)切除為主,結(jié)合放、化療及其他治療方法(如癌癥疫苗、免疫檢查點(diǎn)抑制劑等),但目前并未找到攻克癌癥的最佳手段。近年來(lái),以嵌合抗原受體T 細(xì)胞(chimeric antigen receptor T cells,CAR-T)為代表的腫瘤細(xì)胞免疫療法為腫瘤治療帶來(lái)新的希望。

1 CAR-T 的簡(jiǎn)介

CAR-T 作為腫瘤免疫治療的新興手段之一,已成為近年來(lái)腫瘤治療研究領(lǐng)域的研究焦點(diǎn)和熱點(diǎn)。CAR-T 是利用基因工程技術(shù),將患者自身的T 細(xì)胞分離體外,并在其表面表達(dá)一個(gè)能特異性識(shí)別腫瘤表面抗原的單鏈抗體(single chain antibody fragment,ScFv)區(qū)域,實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)靶向殺傷癌細(xì)胞［4］?；蚓庉嫼蟮腡 細(xì)胞表達(dá)一個(gè)CAR 分子,主要由胞外ScFv 區(qū)、跨膜區(qū)及胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)區(qū)3 部分組成［5］。經(jīng)不斷優(yōu)化,產(chǎn)生了5 代CAR-T:1 代CAR-T 僅有單一的胞內(nèi)信號(hào)分子CD3ζ,T 細(xì)胞無(wú)法有效增殖,影響其殺傷腫瘤持久性,療效有限；2 代CAR-T 引入一種共刺激信號(hào)分子,如CD28、4-1BB,CAR-T 細(xì)胞抗腫瘤活性和持久性得到明顯提高；為進(jìn)一步增強(qiáng)CAR-T 細(xì)胞殺傷能力,3 代CAR-T 又增加了一個(gè)共刺激分子,即同時(shí)添加CD28 和4-1BB；4 代CAR-T 通過(guò)聯(lián)合趨化因子、細(xì)胞因子等改善腫瘤免疫微環(huán)境,進(jìn)一步增強(qiáng)了CAR-T 細(xì)胞的活性及穿透腫瘤細(xì)胞的能力,實(shí)現(xiàn)更加強(qiáng)大的殺傷作用；5 代CAR-T 又稱為“通用型CART”,通過(guò)敲除內(nèi)源性T 細(xì)胞受體(T cell receptor,TCR)和人類白細(xì)胞抗原I 類分子(human leukocyte antigen-I,HLA-I)降低異體移植的免疫排斥風(fēng)險(xiǎn)。

2 CAR-T 在實(shí)體瘤中的應(yīng)用

CAR-T 應(yīng)用實(shí)體瘤的療效低于血液腫瘤。與B細(xì)胞表面的膜抗原CD19 不同,幾乎所有實(shí)體瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的抗原在多種正常組織中均有不同程度的表達(dá),目前仍未發(fā)現(xiàn)在腫瘤細(xì)胞表面特異性表達(dá)的抗原,導(dǎo)致CAR-T 細(xì)胞在用于實(shí)體瘤時(shí)會(huì)產(chǎn)生一系列問(wèn)題。目前認(rèn)為,限制CAR-T 細(xì)胞殺傷實(shí)體瘤活性的因素主要包括:腫瘤細(xì)胞表面缺乏特異性抗原、腫瘤抗原逃逸現(xiàn)象、脫靶效應(yīng)、腫瘤微環(huán)境抑制、CAR-T 細(xì)胞難以歸巢導(dǎo)致其無(wú)法到達(dá)腫瘤部位發(fā)揮作用(如實(shí)體瘤細(xì)胞分泌趨化因子CXCL12 和CXCL5,抑制CAR-T 細(xì)胞抵達(dá)腫瘤部位)、細(xì)胞因子風(fēng)暴、神經(jīng)毒性癥狀、腫瘤溶解綜合癥等［6-7］。

由于不同實(shí)體腫瘤組織來(lái)源各異,結(jié)構(gòu)復(fù)雜,發(fā)現(xiàn)針對(duì)某種實(shí)體瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的腫瘤特異性抗原(tumor specific antigen,TSA)成為難點(diǎn)。因此,尋找更多的腫瘤相關(guān)抗原(tumor-associated antigen,TAA)成為治療取得成功的重要突破口和亟待解決的問(wèn)題。近年,研究人員也發(fā)現(xiàn)了一些針對(duì)實(shí)體瘤的潛在靶點(diǎn)。

2.1 間皮素(mesothelin，MSLN) MSLN 是由糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)錨定的糖蛋白,相對(duì)分子質(zhì)量約40 000。在正常組織細(xì)胞中不表達(dá)或微量表達(dá)于間皮細(xì)胞。幾乎100%的胰腺癌均為MSLN 陽(yáng)性,其他腫瘤如肝外膽管癌(95%)、子宮內(nèi)膜癌(89%)、三陰性乳腺癌(66%)、食道癌(46%)、結(jié)直腸癌(30%)和宮頸癌(25%)等均有不同程度表達(dá)［8］。異常MSLN 高表達(dá)使腫瘤進(jìn)一步惡化,發(fā)生途徑主要有兩種:一是通過(guò)GPI 激活胞內(nèi)信號(hào)通路,并持續(xù)活化 NF-κB、MAPK 和 PI3-激酶信號(hào)通路,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖,并增強(qiáng)其抗凋亡能力；二是 MSLN 與受體 CA125 ／ MUC16 發(fā)生高親和力結(jié)合,促進(jìn)細(xì)胞間異型黏附,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生擴(kuò)散及轉(zhuǎn)移［9］。因此,根據(jù)MSLN 相對(duì)高表達(dá),可作為CAR-T 細(xì)胞治療的特異性靶點(diǎn)。

2.2 癌胚抗原(carcinoembryonicantigen，CEA) CEA為相對(duì)分子質(zhì)量為180 000 ～200 000 的糖蛋白,屬于免疫球蛋白超家族,其表達(dá)量與腫瘤發(fā)生率呈正相關(guān)［10］。在正常組織中,CEA 及其家族成員可表達(dá)于胃腸道上皮,健康人血清中CEA 水平極低；但在多種上皮細(xì)胞癌中過(guò)量表達(dá),通過(guò)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲及增殖能力,使其易于擴(kuò)散轉(zhuǎn)移,血清檢測(cè)CEA水平也明顯升高,一般超過(guò)20 μg ／ L,提示有消化道腫瘤,結(jié)直腸腺癌患者尤其顯著,術(shù)前血清CEA 陽(yáng)性率為44.07%［11］。約30% ～60%胰腺癌患者CEA表達(dá)陽(yáng)性,其血清檢測(cè)水平也明顯升高［12］。因此,CEA 可作為治療消化道腫瘤的理想靶點(diǎn)。

2.3 人類表皮生長(zhǎng)因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2) HER2 又稱 ErbB-2 ／neu,位于17 號(hào)染色體長(zhǎng)臂(17q12-21.32),可編碼相對(duì)分子質(zhì)量為185 000 的具有酪氨酸激酶活性的跨膜受體蛋白。生理情況下,通過(guò)受體與配體相結(jié)合,促使HER2 二聚化,激活下游MAPK、PI3K 等信號(hào)通路,促進(jìn)細(xì)胞增殖、防止細(xì)胞凋亡［13］。當(dāng)細(xì)胞表面HER2過(guò)表達(dá),細(xì)胞會(huì)發(fā)生過(guò)度增殖及惡性轉(zhuǎn)移。因此,通過(guò)阻斷活化的HER2 信號(hào)通路,抑制腫瘤細(xì)胞增殖及啟動(dòng)凋亡途徑,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞程序性死亡。約20%的原發(fā)性乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌有HER2 過(guò)表達(dá)［14］；雄激素非依賴性前列腺癌(androgen independent prostate cancer,AIPC)患者HER2 表達(dá)陽(yáng)性率高于良性前列腺增生和雄激素依賴性前列腺癌患者［15］；20%～60%的胰腺導(dǎo)管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)患者中也有陽(yáng)性表達(dá)［16］。因此,HER2 可作為治療表達(dá)陽(yáng)性率較高腫瘤的理想靶點(diǎn)。

2.4 前列腺干細(xì)胞抗原(prostate stem cell antigen，PSCA) PSCA 是一種前列腺特異性基因,可編碼123個(gè)氨基酸,通過(guò)GPI 錨定在細(xì)胞表面,與Thy-1 ／ Ly-6家族中干細(xì)胞抗原-2 具有30%同源性［17］。生理?xiàng)l件下,PSCA 在前列腺中表達(dá)；病理情況下,PSCA 可過(guò)表達(dá)于多種癌癥組織,包括前列腺癌、胃癌、胰腺癌、膀胱癌等。其可激活PI3K ／ AKT 信號(hào)通路,促進(jìn)癌細(xì)胞增殖分化；而沉默其表達(dá)可抑制細(xì)胞增殖［18］。有研究顯示,超過(guò)80%的前列腺癌中PSCA 呈過(guò)表達(dá)；胰腺癌中PSCA 陽(yáng)性率約77.1%；慢性胰腺炎組織中PSCA 陽(yáng)性表達(dá)率為31.3%［19-20］。因此,PSCA的高表達(dá)可作為一個(gè)新的治療靶點(diǎn)和評(píng)價(jià)腫瘤發(fā)生發(fā)展預(yù)后的指標(biāo)。

2.5 黏蛋白(mucin-1，MUC-1) MUC-1 是一種相對(duì)分子質(zhì)量大于200 000 的Ⅰ型跨膜糖蛋白。生理?xiàng)l件下,MUC-1 極性分布于呼吸道、胃腸道、泌尿生殖道、乳腺等組織的上皮細(xì)胞近管或腺腔面,有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、信號(hào)傳導(dǎo)及保護(hù)和潤(rùn)滑上皮細(xì)胞等功能。但在多種上皮細(xì)胞瘤中,MUC-1 高表達(dá)且非極性分布于整個(gè)胞膜甚至胞質(zhì)中。其中胰腺癌陽(yáng)性率約 90%［21］,胃癌陽(yáng)性表達(dá)率約 65%［22］。其致病機(jī)制主要包括:MUC-1 與細(xì)胞間黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)或 E-選擇素(e-selectin)受體結(jié)合,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附,癌細(xì)胞可穿過(guò)血管內(nèi)皮發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；過(guò)表達(dá)MUC-1 可抑制E-鈣黏蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞間相互作用,降低循環(huán)腫瘤細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮的黏附,因此易發(fā)生脫落并隨血液循環(huán)向遠(yuǎn)處侵襲轉(zhuǎn)移；MUC-1細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域可維持腫瘤失巢凋亡細(xì)胞的表面完整性、阻止失巢起始分子活化及防止腫瘤細(xì)胞凋亡等［23-24］。因此,MUC-1 是一種高表達(dá)且在癌癥的發(fā)生、發(fā)展、擴(kuò)散及抗凋亡中發(fā)揮重要作用的蛋白,可作為癌癥新型免疫療法的靶點(diǎn)。

2.6 CD24 CD24 是通過(guò)GPI 錨定的膜蛋白,編碼27 ～30 個(gè)氨基酸,人的CD24 基因位于染色體6q21上［25］。生理?xiàng)l件下,CD24 多分布于祖細(xì)胞和代謝活躍的細(xì)胞上,在終末分化細(xì)胞中表達(dá)較低。通過(guò)傳導(dǎo)細(xì)胞間信號(hào)來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖分化、機(jī)體自身免疫及誘導(dǎo)成熟細(xì)胞凋亡等。病理情況下,其在多種腫瘤組織中廣泛表達(dá),可加速腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn),174 例卵巢癌中,漿液性腺癌(87.5%)和漿液性乳頭狀癌(84.6%)患者的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于其他組織學(xué)亞型,87.9%的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中發(fā)現(xiàn)有CD24 的表達(dá),無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中有60.7%呈CD24 的陽(yáng)性表達(dá)［26］。因此,作為陽(yáng)性表達(dá)率較高的腫瘤抗原,CD24 可作為表達(dá)陽(yáng)性腫瘤的理想靶點(diǎn)。

2.7 Claudin18.2(CLDN18.2) CLDN18.2 是一種跨膜蛋白,其正常表達(dá)對(duì)維持細(xì)胞間緊密連接起重要作用［27］。CLDNs 蛋白的生理功能有:維持細(xì)胞極性和上皮細(xì)胞滲透壓、參與細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及形成天然屏障防御病原體入侵等［28］。CLDN18.2 在正常組織中表達(dá)受限,僅表達(dá)于分化的胃黏膜膜上皮細(xì)胞。但在多種惡性腫瘤中,CLDN18.2 呈高表達(dá),尤其是消化道腫瘤:77%原發(fā)性胃腺癌表達(dá)陽(yáng)性；78%原發(fā)性食管腺癌表達(dá)陽(yáng)性；80%胰腺癌表達(dá)陽(yáng)性［29］。根據(jù)其相對(duì)較高的特異性表達(dá),CLDN18.2 可作為治療消化道腫瘤的理想靶點(diǎn)。

3 實(shí)體瘤CAR-T 治療方案的設(shè)計(jì)

由于實(shí)體瘤細(xì)胞具有高異質(zhì)性且缺乏TSAs,導(dǎo)致患有同種腫瘤的不同患者體內(nèi)抗原表達(dá)有差異,且腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的抗原在正常組織也有少量或微量表達(dá),造成CAR-T 細(xì)胞療法用于實(shí)體瘤時(shí)產(chǎn)生嚴(yán)重的抗原逃逸現(xiàn)象和脫靶效應(yīng)。如MORGAN等［30］研究將HER2 作為靶點(diǎn)治療患有結(jié)腸癌合并肝肺部轉(zhuǎn)移的患者時(shí),在輸注1 × 1010個(gè)CAR-T 細(xì)胞后15 min 內(nèi),患者出現(xiàn)呼吸窘迫,胸部X 線顯示肺部浸潤(rùn)明顯,于治療后第5 天死亡,其血清樣本顯示,IFNγ、TNF-α、GM-CSF、IL-6 和 IL-10 等細(xì)胞因子水平顯著增加,證明患者在接受治療后,由于CAR-T細(xì)胞識(shí)別正常肺上皮細(xì)胞上低水平表達(dá)的HER2 抗原,誘發(fā)了強(qiáng)烈的細(xì)胞因子風(fēng)暴。因此,針對(duì)CAR-T用于實(shí)體瘤時(shí)產(chǎn)生的嚴(yán)重不良反應(yīng),應(yīng)針對(duì)不同的患者設(shè)計(jì)不同的方案,以降低副反應(yīng)的發(fā)生。

3.1 通過(guò)串聯(lián)結(jié)構(gòu)減輕抗原逃逸現(xiàn)象 HEGDE等［31］將膠質(zhì)母細(xì)胞瘤作為研究對(duì)象,設(shè)計(jì)出串聯(lián)HER2-scFv 和IL13Rα2-IL13 突變蛋白的二代CART(TanCAR-T)細(xì)胞,結(jié)果表明,當(dāng)TanCAR-T 細(xì)胞同時(shí)靶向HER2 和IL13Rα2 這兩種抗原時(shí),T 細(xì)胞會(huì)發(fā)生超強(qiáng)活化,與對(duì)照組相比,T 細(xì)胞的活性更持久且不易耗竭,顯示出了更有優(yōu)勢(shì)的抗腫瘤效果。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn),TanCAR-T 細(xì)胞治療后小鼠壽命明顯延長(zhǎng)。同時(shí)還發(fā)現(xiàn),復(fù)發(fā)的腫瘤細(xì)胞表面這兩種靶抗原缺失,證明串聯(lián)的CAR-T 結(jié)構(gòu)可減輕腫瘤抗原逃逸現(xiàn)象,防止腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視。有研究針對(duì)卵巢癌細(xì)胞表面FOLR1 和MSLN 的兩種抗原,成功構(gòu)建了四代CAR-T 細(xì)胞,同時(shí)與單靶點(diǎn)CAR-T 細(xì)胞相比,發(fā)現(xiàn)串聯(lián)CAR-T 的體內(nèi)外殺傷效能均強(qiáng)于單靶點(diǎn)組,能分泌更高水平的細(xì)胞因子,進(jìn)一步為串聯(lián)CAR-T減輕抗原逃逸等現(xiàn)象提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)［32］。

3.2 通過(guò)并聯(lián)結(jié)構(gòu)減輕脫靶效應(yīng) ZHANG 等［33］選擇胰腺癌作為研究對(duì)象,將T 細(xì)胞表面同時(shí)表達(dá)CEA-scFv 和MSLN-scFv 雙嵌合抗原受體,即并聯(lián)CAR-T(dCAR-T)。T 細(xì)胞僅在同時(shí)靶向CEA 和MSLN 兩種腫瘤抗原情況下被完全激活。通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明,dCAR-T 細(xì)胞可精確定位于腫瘤部位,并對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生高細(xì)胞毒性,同時(shí)不損傷相鄰組織。dCAR-T 細(xì)胞提高了其精準(zhǔn)殺傷癌細(xì)胞的作用和治療安全性,在較大程度避免了CAR-T 治療中“脫靶效應(yīng)”的發(fā)生。KLOSS 等［34］選用前列腺癌細(xì)胞表面特異性較高的靶點(diǎn),前列腺特異性膜抗原(prostrate specific membrane antigen,PSMA)和PSCA,設(shè)計(jì)了同樣的并聯(lián)結(jié)構(gòu)。通過(guò)前列腺癌小鼠模型中證明,dCAR-T 細(xì)胞能根除PSCA+PSMA+腫瘤細(xì)胞,發(fā)揮強(qiáng)大且有效的殺傷作用,但對(duì)任一抗原陰性的腫瘤細(xì)胞則無(wú)治療效果。因此,并聯(lián)設(shè)計(jì)不僅提高了靶向腫瘤細(xì)胞的精準(zhǔn)性,減輕脫靶效應(yīng)的發(fā)生,還提高了抗腫瘤活性。上述研究表明,基于腫瘤免疫療法,用兩種不同的TAA 來(lái)調(diào)節(jié)dCAR-T 細(xì)胞活性的組合療法具有較強(qiáng)的應(yīng)用前景。

3.3 通過(guò)逃避免疫抑制檢查點(diǎn)增強(qiáng)體內(nèi)抗腫瘤功效RAFIQ 等［35］設(shè)計(jì)的 CAR-T 細(xì)胞靶向遞送 PD-1 阻斷性scFv,并驗(yàn)證體內(nèi)抗腫瘤功效。通過(guò)自分泌或旁分泌釋放的PD-1 scFv 與腫瘤細(xì)胞表面PD-L1 結(jié)合,保護(hù)T 細(xì)胞表面PD-1 信號(hào)分子免受腫瘤細(xì)胞的抑制,提高CAR-T 細(xì)胞抗腫瘤活性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,分泌PD-1scFv 的CAR-T 細(xì)胞可使荷瘤小鼠長(zhǎng)期存活,并發(fā)現(xiàn)小鼠骨髓中有長(zhǎng)期存活的CAR-T 細(xì)胞,當(dāng)腫瘤復(fù)發(fā)時(shí)可再次啟動(dòng)抗腫瘤免疫應(yīng)答；用PD-1scFv 和PD-1mAb 分別處理腹膜癌小鼠模型發(fā)現(xiàn),PD-1scFv 僅在腹膜腔分布,證明其可準(zhǔn)確定位于TME 來(lái)增強(qiáng)CAR-T 細(xì)胞的抗腫瘤活性,在外周血清中未檢測(cè)到其表達(dá),在小鼠全身均可檢測(cè)到PD-1mAb。因此,阻斷PD-1 或其受體可防止T 細(xì)胞的活性被抑制,增強(qiáng)其殺傷能力,串聯(lián)PD-1scFv 的CAR-T治療可能是代替PD-1 抗體藥物更安全有效的治療方案。CHEN 等［36］設(shè)計(jì)了CAR-T 細(xì)胞表面過(guò)表達(dá)PD-1 DNR(PD-1 dominant negative receptor),可充當(dāng)“誘餌受體”以結(jié)合和阻斷PD-L1／2 的抑制信號(hào),與抗PD-1 抗體比較發(fā)現(xiàn),通過(guò)基因改造的CAR-T 細(xì)胞提供的PD-1 阻斷信號(hào)是一種可持續(xù)抑制效果,而抗PD-1 抗體的功效則受腫瘤滲透率低,半衰期短以及非特異性毒性限制。RABELLO 等［37］針對(duì)轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌,設(shè)計(jì)了以人抗碳酸酐酶Ⅸ(carbo-nic anhydrase Ⅸ,CAⅨ)為靶點(diǎn)的CAR-T 細(xì)胞,并將其設(shè)計(jì)為分泌人抗PD-L1 的抗體。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與單獨(dú)的抗CAIX CAR-T 細(xì)胞相比,腫瘤的生長(zhǎng)減少了5 倍,腫瘤重量減少了50% ～80%。上述研究結(jié)果表明,這些創(chuàng)新點(diǎn)具有較大潛力。

3.4 改變腫瘤微環(huán)境增強(qiáng)T 細(xì)胞的抗腫瘤活性ADACHI 等［38］通過(guò)兩個(gè) 2A 肽將 IL-7 和 CCL19 串聯(lián),并與CAR-T 細(xì)胞連接,形成可分泌IL-7 和CCL19的CAR-T 細(xì)胞,用以模擬T 細(xì)胞區(qū)網(wǎng)狀細(xì)胞的功能。T 細(xì)胞區(qū)的成纖維網(wǎng)狀細(xì)胞所產(chǎn)生的IL-7 和CCL 19 對(duì)淋巴器官中T 細(xì)胞區(qū)的形成和維持至關(guān)重要。通過(guò)兩者共同作用,將T 細(xì)胞和DC 細(xì)胞募集至腫瘤區(qū)域。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,1 × 106個(gè)串聯(lián)CAR-T 細(xì)胞的療效相當(dāng)于4 × 106個(gè)傳統(tǒng)的CAR-T 細(xì)胞,抗腫瘤能力有明顯提高,證明IL-7 和CCL19 具有可增強(qiáng) CAR-T 細(xì)胞抗腫瘤的能力。HOMBACH 等［39］將CD30-scFv 與抗CEA CAR-T 細(xì)胞相串聯(lián),證明C15A3癌細(xì)胞與抗CD30／CEA CAR-T 細(xì)胞和抗CEA CAR-T細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí),前者的抗腫瘤作用更顯著,進(jìn)一步證明串聯(lián)CD30-scFv 的CAR-T 細(xì)胞在靶向其他TAAs 時(shí),均可提高CAR-T 細(xì)胞消除癌細(xì)胞的效率。KONERU 等［40］設(shè)計(jì)了針對(duì)卵巢癌細(xì)胞表面MUC-16ecto 抗原為靶點(diǎn)且同時(shí)分泌IL-12 的CAR-T 細(xì)胞,通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均證明IL-12 的分泌可增強(qiáng)IFNγ 分泌能力和抗腫瘤功效。

4 臨床研究進(jìn)展

由于實(shí)體腫瘤靶點(diǎn)多樣且具有高度異質(zhì)性,因此,在治療實(shí)體瘤時(shí)需要選取陽(yáng)性表達(dá)率相對(duì)較高的抗原作為靶點(diǎn)。有臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示,經(jīng)臨床Ⅰ期CAR-T 治療,10 例CEA 陽(yáng)性難治復(fù)發(fā)性結(jié)直腸癌患者,治療后有7 例療效評(píng)價(jià)為病情穩(wěn)定,其中2 例病情穩(wěn)定保持時(shí)間超過(guò)30 周,另有2 例影像學(xué)報(bào)告顯示,腫瘤病灶及代謝均減小,大部分患者血清CEA含量明顯降低［41］。BEATTY 等［42］對(duì) 6 名難治性轉(zhuǎn)移性PDAC 患者進(jìn)行靶向間皮素的CAR-T 治療,結(jié)果顯示,2 例患者病情穩(wěn)定,無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間分別為3.8 和5.4 個(gè)月；3 例患者腫瘤病變的代謝活性體積保持穩(wěn)定；1 例患者活檢證實(shí)MESO 表達(dá)率下降69.2%；接受治療的患者血液中均檢測(cè)到瞬時(shí)CAR表達(dá),產(chǎn)生了新的免疫球蛋白IgG。

通過(guò)國(guó)際臨床試驗(yàn)注冊(cè)網(wǎng)站(ClinicalTrials.gov)檢索發(fā)現(xiàn),有413 項(xiàng)已注冊(cè)的CAR-T 相關(guān)臨床試驗(yàn)。其中實(shí)體瘤共29 項(xiàng),主要靶點(diǎn)包括EGFR、HER2、Claudin18.2、Mesothelin、PSCA、MUC-1 等。正在開(kāi)展的實(shí)體瘤CAR-T 療法臨床試驗(yàn)情況見(jiàn)表1。

表1 CAR-T 靶向?qū)嶓w瘤抗原治療在國(guó)際臨床試驗(yàn)注冊(cè)網(wǎng)站的注冊(cè)情況Tab.1 License of CAR-T therapy in international websites of clinical trials

5 小結(jié)與展望

盡管CAR-T 細(xì)胞治療血液瘤效果顯著,由于實(shí)體瘤缺乏特異性靶點(diǎn)、腫瘤抗原逃逸及TME 抑制等復(fù)雜因素,使其療效受限。因此,通過(guò)尋找特異性較高的抗原作為治療靶點(diǎn)、優(yōu)化CAR-T 結(jié)構(gòu)及改善TME 抑制等方式來(lái)提高T 細(xì)胞靶向腫瘤的精準(zhǔn)性、增強(qiáng)抗腫瘤療效。另外,CAR-T 細(xì)胞聯(lián)合溶瘤病毒的組合治療策略、聯(lián)合PD-1 ／ PD-L1 單抗用藥及聯(lián)合放化療等治療手段臨床試驗(yàn)也在相繼開(kāi)展。隨著對(duì)腫瘤免疫逃逸機(jī)制的深入研究及CAR-T 治療策略不斷完善,有望進(jìn)一步提高CAR-T 細(xì)胞遷移浸潤(rùn)并殺傷腫瘤組織的能力,進(jìn)而研發(fā)出更加安全有效及高效的實(shí)體瘤臨床治療策略。