李 靜

(西華師范大學化學化工學院，四川 南充 637002)

目前，全球每年殺蟲劑支出估計為400億美元[1]。殺蟲劑在農業(yè)生產中的作用不言而喻。但殺蟲劑大量廣泛的使用，對環(huán)境和人類生活造成許多負面影響[2]。除此之外，害蟲的抗藥性也顯著提高，致使殺蟲效果不明顯或使害蟲防治失敗。在此背景下，尋找較高活性的、環(huán)境友好的新型農藥被人們所重視。植物源農藥主要來自于植物次生代謝物[3]。植物次生代謝物是由植物次生代謝產生的非必需的小分子有機化合物，對植食性昆蟲起著毒殺、引誘、驅避、拒食等方面的作用[4]。因作用方式多元、特異性強，且對環(huán)境友好而成為綠色農藥的主要源泉。另外，自從發(fā)現(xiàn)天然產物控制著生物的生長和個體間的交流以來，人們就開始使用天然產物作為殺蟲劑進行蟲害控制[5]，這對我們尋找高活性的殺蟲化合物具有指導意義。我國植物資源豐富，從植物中獲取有較高活性的化合物一直是科學家的研究熱點，并具有廣闊的應用與開發(fā)前景。

大戟科 (Euphorbiaceae) 三寶木屬 (Trigonostemon) 植物為喬木或灌木，全球約有50種，主要分布在亞洲的熱帶和亞熱帶地區(qū)，其化學成分豐富，有二萜、三萜、生物堿、酚類和類固醇等化合物種類。據(jù)報道[6]，該屬植物具有顯著的殺蟲與拒食作用。唇形科 (Labiatae) 香茶菜屬 (Rabdosia) 植物為多年生草本灌木或半灌木[7]，約有150種，廣泛分布在我國各地[8]，有抗菌、抗腫瘤、抗病毒等多種生物活性[9-11]?；诖耍疚囊源箨迫龑毮緦僦参镩L梗三寶木 (TrigonostemonthyrsoideusStapf)，唇形科香茶菜屬植物紫萼香茶菜 (Rabdosiaforrestii(Diels) Hara) 和細毛香茶菜 (Rabdosiahirtella(Hand.-Mazz.) Hara) 為研究對象，用溶劑提取法對它們的化學成分進行提取，并采用非選擇性葉碟法測定了其提取物對甜菜夜蛾3齡幼蟲的拒食活性。以拒食活性為指導，以期為該屬植物的活性成分的提取分離奠定基礎，為尋找活性較高的殺蟲活性先導化合物提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑、儀器及材料

BSA224S型分析天平，來自賽多利斯公司。

丙酮(分析純)、95%乙醇，吐溫水。

細毛香茶菜、紫萼香茶菜莖葉、紫萼香茶菜根、長梗三寶木塊莖。

1.2 粗提物的提取

將細毛香茶菜 (545 g)、紫萼香茶菜莖葉 (476 g)、紫萼香茶菜根 (679 g)、長梗三寶木塊莖 (554 g)放置陰涼處晾至表面干燥，將其搗碎，每種植物平均分成兩份備用。

采用溶劑萃取法對其成分進行提取，取其中一份長梗三寶木塊莖碎塊，用95%乙醇冷浸提取6次，每次4 d。提取液合并減壓濃縮得長梗三寶木塊莖乙醇浸膏 (CGY，0.721 g)。另外一部分長梗三寶木塊莖放入燒杯中，加入丙酮浸泡，按照上述方法制取丙酮浸膏 (CGB，0.602 g)。

分別用上述方法，得到細毛香茶菜乙醇浸膏 (XMY，0.231 g)、細毛香茶菜丙酮浸膏 (XMB，0.138 g)，紫萼香茶菜莖葉乙醇浸膏 (ZEJY，0.292 g)、紫萼香茶菜莖葉丙酮浸膏 (ZEJB，0.118 g)，紫萼香茶菜根乙醇浸膏 (ZEGY，0.304 g)、紫萼香茶菜丙酮浸膏 (ZEGB，0.262 g)。

1.3 拒食活性測定

1)藥液配制

分別稱取所得浸膏用丙酮溶解配制成 1000 mg/L 的母液，再用0.2%的吐溫-80水溶液稀釋成梯度質量濃度 (1000 mg/L、500 mg/L、250 mg/L、125 mg/L)，用超聲儀充分乳化均勻備用。以印棟素A (Azadirachtin A) 為陽性對照，以丙酮吐溫水溶液為空白對照。

2)測試方法

采用A.González-Coloma 等人[12-13]推薦的非選擇性葉碟法對浸膏進行拒食活性測定。用打孔器將新鮮甘藍葉片裁成葉碟 (直徑為 4 cm), 在表面均勻涂上 (處理組) 或空白液 (對照組)藥液。將四片對照組和處理組葉碟分別放置于直徑為15 cm的不同培養(yǎng)皿中，待液體風干后，每皿放入四頭健康且饑餓 6 h 的甜菜夜蛾幼蟲，每個處理重復3次，36 h 后用方格紙片法測定取食面積，并用下列公式計算拒食率(KFR)：

KFR=(ACK-AT)/ACK×100%

其中:ACK為對照組葉碟取食面積，AT為藥劑處理組葉碟取食面積。

獲得相應的拒食率，并根據(jù)各濃度梯度相應拒食率的數(shù)值大小，進行線性回歸分析以獲得其EC50值 (引起50%個體有效的劑量)。

2 結果與分析

初步測定各植物粗提物在 1000 mg/L 劑量下的拒食率。紫萼香茶菜莖葉、紫萼香茶菜根、細毛香茶菜、長梗三寶木塊莖的乙醇、丙酮粗提物的拒食率測定結果如表1所示。在所有測試樣品中，發(fā)現(xiàn)長梗三寶木的乙醇、丙酮粗提物拒食率最高，分別達到了94.3%、88.9%，紫萼香茶菜莖葉的乙醇浸膏和細毛香茶菜的丙酮浸膏拒食率為68.4%、56.4%次之，而紫萼香茶菜根的粗提物活性最低，其丙酮浸膏和乙醇浸膏的拒食率僅為34.3%、27.1%。以上結果表明，不同物種其活性不同，且同一物種的不同部位 (紫萼香茶菜莖葉及紫萼香茶菜根)、不同溶劑提取物的拒食活性也有差異?？傮w來說，對甜菜夜蛾的拒食作用水平順序為：長梗三寶木 > 紫萼香茶菜莖葉 > 細毛香茶菜 > 紫萼香茶菜根。

表1 幾種植物材料粗提物的拒食率

依據(jù)初篩的結果，選取拒食活性較好的長梗三寶木乙醇浸膏和長梗三寶木丙酮浸膏，采用梯度稀釋法配制一系列質量濃度的藥液 (1000 mg/L、500 mg/L、250 mg/L、125 mg/L)，測定各個質量濃度下的拒食率(見表2)，并利用回歸曲線計算其EC50值(見表3)。

表2 長梗三寶木乙醇及丙酮浸膏對甜菜夜蛾3齡幼蟲的拒食率(n=3) %

表3 長梗三寶木乙醇及丙酮浸膏對甜菜夜蛾3齡幼蟲的拒食活性 (n=3)

結果顯示，長梗三寶木乙醇與丙酮浸膏表現(xiàn)出較強的拒食活性，利用回歸曲線計算得到有效中濃度EC50值分別為 0.0007 mg/cm3、0.0008 mg/cm3，二者具有幾乎相等的拒食活性，且拒食活性是陽性對照印楝素A的25倍左右。

3 結語

以三種藥用植物為研究對象，用乙醇、丙酮提取其有效成分，并測定了它們的乙醇浸膏、丙酮浸膏對甜菜夜蛾的拒食活性。初步結果顯示，兩種香茶菜屬植物 (紫萼香茶菜及細毛香茶菜) 的浸膏拒食活性較低，而長梗三寶木的浸膏拒食活性高達94.3%、88.9%。以該結果為基礎，測定了長梗三寶木乙醇和丙酮浸膏系列濃度對甜菜夜蛾的拒食活性，發(fā)現(xiàn)它的兩種溶劑浸膏對甜菜夜蛾有較好的拒食效果，且具有濃度依賴性 (隨著濃度降低，拒食活性變低)，這與一般農藥的作用特點相符合。并以此計算其有效中濃度 (EC50) 值，數(shù)據(jù)顯示，二者的活性為陽性對照的25倍左右。雖然對香茶菜屬植物和三寶木屬植物化學成分的研究很多，但其所含化學成分復雜，對長梗三寶木而言，其拒食活性較佳，具體哪一種成分或幾種成分起作用還未可知，但以此毒理實驗為基礎，可對其活性部分進一步分離，對尋找高活性的殺蟲單體化合物起一定的指導作用，并對植物資源的利用起到一定的促進作用。