柯月，張杰，梁燦燦，紀(jì)文靜

1新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院，烏魯木齊830000；2新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院

隨著社會經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展、飲食結(jié)構(gòu)的改變、生活節(jié)奏的逐漸加快以及工作壓力的提高，世界范圍內(nèi)第一大慢性肝病及肝酶異常的首要病因隨之發(fā)生了巨大的變化，在我國由于逐年加強(qiáng)的慢性乙型肝炎防治力度，而導(dǎo)致非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）已取代其成為第一大慢性肝?。?-2］。NAFLD患者中有10%～15%為非酒精性脂肪性肝炎（NASH），15%～25%的患者在其發(fā)病后10年內(nèi)發(fā)生肝硬化，而脂肪性肝硬化患者發(fā)生原發(fā)性肝細(xì)胞癌、肝衰竭和移植肝復(fù)發(fā)的概率高達(dá)40%［3］，對患者、家庭及社會造成巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，已成為嚴(yán)重的社會公共衛(wèi)生問題。目前較多研究表明，NAFLD的發(fā)病機(jī)制不僅與傳統(tǒng)危險因素相關(guān)（飲食、生活飲食習(xí)慣等），而且涉及胰島素抵抗、氧化應(yīng)激、遺傳易感性等方面。NAFLD發(fā)病機(jī)制的研究日益成為肝病學(xué)的臨床研究熱點，越來越多的研究揭示了基因多態(tài)性與NAFLD發(fā)病的關(guān)系。乙醛脫氫酶2（ALDH2）是醛類物質(zhì)代謝的關(guān)鍵作用酶，研究發(fā)現(xiàn)其可能通過調(diào)控氧化應(yīng)激、線粒體功能、細(xì)胞凋亡以及代謝清除毒性醛類物質(zhì)等多種途徑影響NAFLD及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展［4-5］。但ALDH2與NAFLD的發(fā)生是否有關(guān)仍無定論，ALDH2與NAFLD傳統(tǒng)危險因素間是否存在相關(guān)性也少見報道。2019年5月—2020年11月，本研究通過對新疆地區(qū)NAFLD和健康體檢人群ALDH2基因多態(tài)性進(jìn)行分析，觀察NAFLD ALDH2基因多態(tài)性的變化，并進(jìn)一步分析ALDH2基因多態(tài)性與NAFLD發(fā)生的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料納入NAFLD患者130例（NAFLD組），符合《非酒精性脂肪性肝病診療指南（2010年修訂版）》中NAFLD的診斷標(biāo)準(zhǔn)。男72例、女48例，年齡55～75歲，漢族60例、維吾爾族60例，糖尿病史68例、高血壓病史56例，BMI（27.50±1.69）kg/m2、空腹血糖（5.62±0.72）mmol/L、糖化血紅蛋白（6.21±0.75）mmol/L、膽固醇（4.61±0.62）mmol/L、尿酸350.35（282.00～414.00）μmol/L，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）26.70（19.45～35.21）U/L、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）水平28.36（20.45～36.34）U/L、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）24.45（18.69～29.36）IU/L，總膽紅素、直接膽紅素及間接膽紅素分別為10.55（7.98～13.87）、4.04（2.71～5.52）、7.54（4.75～11.25）μmol/L。選取同期非NAFLD的健康體檢者作為對照組，年齡48～65歲，漢族30例、維吾爾族30例，糖尿病史17例、高血壓病史15例，BMI（25.87±1.67）kg/m2、空腹血糖（4.28±0.64）mmol/L、糖化血紅蛋白（5.75±0.80）mmol/L、膽固醇（3.98±0.82）mmol/L、尿酸324.97（262.00～383.00）μmol/L，ALT、AST、GGT分別 為25.18（18.02～32.45）U/L、26.23（19.78～34.16）U/L、22.70（17.78～28.23）IU/L，總膽紅素、直接膽紅素及間接膽紅素分別為10.52（7.72～13.68）、4.10（2.83～5.26）、7.11（4.62～11.08）μmol/L。除總膽紅素、直接膽紅素及間接膽紅素外，兩組其余指標(biāo)比較，P均＜0.05。

1.2 ALDH2基因多態(tài)性分析采用離心柱法提取和純化DNA，將所獲取的基因片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，條件如下：反應(yīng)體系25 μL，50℃、5min；90℃、5 min；94℃、25 s，60℃、25 s，72℃、30 s，35個循環(huán)；72℃、5 min。取5μL擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳（濃度1.5%），紫外線下觀察擴(kuò)增產(chǎn)物為360 bp。取10 μL擴(kuò)增產(chǎn)物，與芯片上檢測探針雜交并酶促顯色，經(jīng)過BE-2.0生物芯片識讀儀掃描分析得出樣本的ALDH2基因型。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件。計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗或Mann-WhitneyU檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗；采用Logistic回歸模型分析各指標(biāo)對NAFLD的影響及NAFLD患者ALDH2基因多態(tài)性與NAFLD傳統(tǒng)影響因素的關(guān)系。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組ALDH2基因型頻率及分布比較ALDH2基因型產(chǎn)物為288 bp片段。經(jīng)測序檢測發(fā)現(xiàn)AL‐DH2基因表型共3種，分別為野生型GG、突變雜合型GA、雜合型AA（即ALDH2*1/1、ALDH2*1/2和ALDH2*2/2）。GG、GA和AA基因型分布頻率分別為56.1%、37.8%和6.1%，NAFLD組及對照組AL‐DH2基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡，說明各樣本具有群體代表性。

NAFLD組野生型GG、突變雜合型GA、雜合型AA所占比例分別為49.2%（59/120）、43.3%（52/120）、7.5%（9/120）；對照組所占比例分別為70.0%（42/60）、26.7%（16/60）、3.3%（2/60），兩組ALDH2基因型分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-2.664，P＜0.01）。NAFLD組中漢族人群野生型GG、突變雜合型GA、雜合型AA所占比例分別為33.9%（20/60）、56.7%（34/60）、10.0%（6/60），維吾爾族人群所占比例分別為66.1%（39/60）、30.0%（18/60）、5.0%（3/60），不同民族ALDH2基因型分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-3.364，P＜0.01）。

2.2 ALDH2基因多態(tài)性與NAFLD患病風(fēng)險及傳統(tǒng)危險因素的關(guān)系 以NAFLD為因變量，ALDH2基因型為自變量，同時將年齡、糖尿病史、高血壓病史、BMI、空腹血糖、GHb、TG、TC、UA、ALT、AST、GGT等指標(biāo)均納入自變量。結(jié)果顯示，GA/AA基因型79例，其中NAFLD患者61例，占77.2%，GG基因型101例，其中NAFLD患者59例，占58.4%，GA/AA基因型患NAFLD率明顯高于GG型（P＜0.05）。經(jīng)單因素分析后將上述入選相關(guān)因素進(jìn)行Logistic回歸分析，ALDH2基因多態(tài)性仍是NAFLD患病的獨立影響因素（OR=5.984，95CI%=1.016～35.237，P=0.048）。

通過無序多分類反應(yīng)變量的Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，NAFLD患者傳統(tǒng)影響因素與ALDH2基因多態(tài)性無關(guān)，詳見表1。

表1 NAFLD患者ALDH2基因多態(tài)性無序多分類反應(yīng)變量的Logistic回歸分析結(jié)果

3 討論

NAFLD是代謝綜合征累及肝臟的臨床病理表現(xiàn)，由于其臨床缺乏特征性表現(xiàn)及針對性治療，近年其相關(guān)診治一直是臨床研究的熱點。鑒于肥胖及2型糖尿病的流行以及慢性病毒性肝炎的有效控制，NAFLD現(xiàn)已成為慢性肝病的主要原因［6-8］。國外有研究表明，遺傳基因多態(tài)性可作為NAFLD進(jìn)展為肝硬化的危險因素，其中可確定一些基因突變與NAFLD疾病發(fā)展相關(guān)，在鑒定的相關(guān)位點中PNPLA3的非同義單核苷酸多態(tài)性證實存在多個患者群中［9-12］。

ALDH2基因位于人類第12染色體上，存在300多個單核苷酸多態(tài)位點（SNP）。研究顯示，ALDH2存在84個SNP位點，只有少數(shù)位點突變具有功能［13］，黃辰宇等［14］研究通過基因型檢測，發(fā)現(xiàn)總共有5個SNP位點與飲酒行為相關(guān)，其中相關(guān)性最強(qiáng)的是外顯子上的突變位點rs671。rs671在12號外顯子上，人群中有三種基因型組成，分別為ALDH2*1/ALDH2*1（野生型G/G），ALDH2*1/ALDH2*2（雜合型G/A），有10%～45%的催化活性，ALDH2*2/ALDH2*2（突變型A/A）幾乎失去活性［15］。ALDH2不僅為乙醇代謝的關(guān)鍵酶，并且為醛類物質(zhì)代謝的重要代謝酶。近年不斷有新的假設(shè)被提出，指出NAFLD可能是內(nèi)源性的酒精性脂肪性肝?。ˋFLD），內(nèi)源性乙醇（EE）或許是造成肝臟細(xì)胞脂肪變性，引起氧化應(yīng)激損傷的病因之一［16-17］。相關(guān)動物實驗和臨床研究均支持新的觀點，即乙醇代謝在NAFLD發(fā)展中扮演了重要的角色，乙醇代謝相關(guān)酶譜可能參與NAFLD的發(fā)病機(jī)制。國內(nèi)外多項研究表明，ALDH2基因多態(tài)性與心腦血管疾病、糖尿病、酒精性脂肪肝、癌癥（胃癌、食道癌、腎癌）的發(fā)生具有相關(guān)性［18-19］，但針對ALDH2與NAFLD的相關(guān)性研究較為少見。同時較多國內(nèi)學(xué)者對NAFLD相關(guān)危險因素進(jìn)行報道，影響NAFLD發(fā)生、發(fā)展的傳統(tǒng)危險因素包括遺傳易感性、性別、生活方式、BMI、胰島素抵抗、尿酸、腸道微生態(tài)等。

本研究調(diào)查結(jié)果顯示，NAFLD組中ALDH2野生型GG、突變雜合型GA、雜合型AA所占比例分別為50.8%、41.7%、7.5%，對照組野生型GG、突變雜合型GA、雜合型AA所占比例分別為68.3%、28.3%、3.3%，兩組基因型分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義。NAFLD組中不同民族ALDH2基因型分布亦存在差異，NAFLD漢族人群中，ALDH2 GA/AA型比例高于維吾爾族人群，國內(nèi)外學(xué)者經(jīng)研究提出ALDH2基因型分布在不同地域、種族間存在差異，全球范圍內(nèi)ALDH2基因突變約占8%，主要集中在東亞地區(qū)，亞洲人群包括中國人中的突變率可達(dá)50%，明顯高于歐美白種人群［20-22］。國內(nèi)有較多研究檢測各地區(qū)ALDH2基因型分布情況，結(jié)果可見ALDH2基因型分布在南北方人群中存在差異，但考慮本研究納入樣本量較少，且研究對象資料的代表性有所局限，今后可進(jìn)一步在不同區(qū)域的人群中開展大樣本臨床研究。對NAFLD組及對照組的一般資料進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)NAFLD組合并高血壓、糖尿病、年齡、BMI、血脂、血糖、UA、GHb、TG、TC、ALT、AST及GGT水平明顯高于對照組。故將ALDH2基因多態(tài)性與上述指標(biāo)一同作為自變量，進(jìn)行多元Logistic回歸分析，研究結(jié)果顯示GA/AA基因型NAFLD患病率明顯高于GG型，ALDH2基因多態(tài)性是NAFLD患病的影響因素。為了解ALDH2基因多態(tài)性與NAFLD傳統(tǒng)危險因素間是否存在聯(lián)系，以NAFLD患者的ALDH2基因不同表型作為因變量，進(jìn)行無序多分類反應(yīng)變量的Logistic回歸分析，發(fā)現(xiàn)NAFLD患者傳統(tǒng)危險因素對ALDH2基因多態(tài)性無影響，提示兩者間無內(nèi)在關(guān)系，與既往部分研究報道相符，說明ALDH2基因多態(tài)性為NAFLD發(fā)生、發(fā)展的獨立影響因素，與其他危險因素間不存在協(xié)同效應(yīng)。

綜上所述，ALDH2基因GA/AA型在NAFLD患者中比例高，且不同民族間ALDH2基因突變的發(fā)生率存在差異；ALDH2基因突變與NAFLD具有相關(guān)性，且為NAFLD發(fā)生的危險因素，但與NAFLD傳統(tǒng)危險因素間無明顯關(guān)系。針對攜帶GA/AA型的高危人群，可考慮動態(tài)隨訪腹部超聲、血脂、肝功能等相關(guān)指標(biāo)，進(jìn)行飲食、生活方式干預(yù)，以便降低NAFLD患病風(fēng)險。同時ALDH2基因表達(dá)在NAFLD的發(fā)病機(jī)制中可能扮演著重要角色，有待于進(jìn)一步深入探索。