宋居杰

（玉林市婦幼保健院 檢驗科，廣西 玉林）

0 引言

絨毛染色體分析技術(shù)是近30年來國內(nèi)外使用較為廣泛的一項產(chǎn)前診斷技術(shù)，主要用于孕早期胎兒染色體分析和流產(chǎn)原因分析，是有效降低和杜絕先天出生缺陷患兒的有力手段[1]。早期流產(chǎn)的主要病因是染色體異常，相關(guān)研究表明55.4%的流產(chǎn)病因是染色體異常[2]。隨著超聲技術(shù)的提高，孕早期的產(chǎn)前篩查準確率越來越高。據(jù)國內(nèi)郭莉等[3]報道胎兒超聲異常行絨毛染色體產(chǎn)前診斷的異常率可達41.8%。染色體數(shù)目異常是最常見的絨毛染色體畸變類型。染色體數(shù)目異常通常會導(dǎo)致胚胎早期流產(chǎn)，這是因為染色體數(shù)目異常的胚胎，遺傳缺陷大，遺傳物質(zhì)不平衡，致死性高[4]。本研究通過分析132例孕早期胚胎停育和153例產(chǎn)前診斷絨毛染色體的數(shù)目異常情況，了解兩組樣本絨毛染色體數(shù)目異常的分布，為遺傳咨詢及產(chǎn)前診斷提供可靠的依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取因孕早期胚胎停育到我院就診且要求手術(shù)清宮婦女132例，孕周6～13周；選取在我院就診因孕早期超聲篩查異常要求產(chǎn)前診斷的婦女153例，孕周11～14周。

1.2 標本采集

胚胎停育組在清宮手術(shù)中無菌采集標本，置于50 mL無菌離心管并加入適量無菌生理鹽水保存，及時送至實驗室鏡下挑取絨毛組織；產(chǎn)前診斷組在超聲定位下經(jīng)腹部穿刺無菌抽取絨毛組織，置于15 mL無菌離心管并加入適量無菌生理鹽水保存，及時送檢。

1.3 實驗方法

1.3.1 絨毛細胞培養(yǎng)

①將絨毛組織取出并置于無菌培養(yǎng)皿中，用無菌注射器抽取生理鹽水，對標本進行沖洗2～3次；②在解剖顯微鏡下選取優(yōu)質(zhì)絨毛組織置于另一無菌培養(yǎng)皿中，用無菌手術(shù)刀片將絨毛組織切成糊狀；③加入1 mL 0.25%胰酶并移至15 mL無菌離心管中，同時加入3滴阿米卡星抗生素，混勻后置37℃水浴箱10 min；④加入2 mL培養(yǎng)基終止消化，1000 r/min離心2 min后棄上清液；⑤加入培養(yǎng)基5 mL，接種于培養(yǎng)瓶中，放入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d；⑥在倒置顯微鏡下觀察細胞的貼壁情況，觀察到細胞克隆后進行換液，繼續(xù)培養(yǎng)；⑦每天觀察，當觀察到大量圓形細胞時可收獲；⑧如形態(tài)不理想則選擇傳代培養(yǎng)后適時收獲。

1.3.2 細胞收獲和染色體制備

①在培養(yǎng)瓶中注入20 ng/mL秋水仙素3滴混勻，放入37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 h后收獲，將培養(yǎng)瓶內(nèi)的上清液棄之，加入胰蛋白酶消化5 min，加入培養(yǎng)液終止消化；②1500 r/min離心10 min后棄上清液，加入6 mL的0.075 mol/L KCl低滲6 min，再加入1 ml的甲醇:冰乙酸（3:1）固定液預(yù)固定5 min，離心棄上清液，再固定2次，再離心棄上清液；③用固定液將沉淀細胞制成細胞懸液，用潔凈濕玻片滴片，放入75 ℃烤箱中烤片3 h，常規(guī)G顯帶。

1.3.3 核型分析

每例標本至少計數(shù)20個分裂相，分析5個核型。

1.4 觀察指標

統(tǒng)計兩組染色體數(shù)目異常的染色體分布，分析孕早期胚胎停育和產(chǎn)前診斷絨毛染色體數(shù)目異常情況。

2 結(jié)果

2.1 132例孕早期胚胎停育絨毛染色體結(jié)果

正常61例（46.2%），異常71例（53.8%）。在71例染色體異常樣本中70例（98.6%）為數(shù)目異常，幾乎涉及所有染色體，主要有X單體14例（20.0%）、16-三體8例（11.4%），見表1。

表1 70例孕早期流產(chǎn)絨毛染色體數(shù)目異常情況（n, %）

2.2 153例早期產(chǎn)前診斷絨毛染色體結(jié)果

正常 87例（56.9%），異常 66例（43.1%）。在 66例染色體異常樣本中59例（89.4%）為數(shù)目異常，7例（10.6%）為結(jié)構(gòu)異常，59例數(shù)目異常樣本中主要有21-三體23例（39.0%）、18-三體 14例（23.7%）、13-三體 11例（18.6%），X單體9例（15.3%），見表2。

表2 59例孕早期產(chǎn)前診斷絨毛染色體數(shù)目異常情況（n, %）

3 討論

本研究提示，在早期胚胎停育及早期產(chǎn)前診斷中，絨毛染色體異常均較為常見，其中流產(chǎn)胚胎異常率53.8%，與王珺等[5]報道的53.2%相近；產(chǎn)前診斷異常率43.1%，明顯高于凌穎聰?shù)萚6]報道的10%，可能與本組數(shù)據(jù)產(chǎn)前診斷指征均為B超異常有關(guān)。由此可見，胚胎停育絨毛染色體異常率高于產(chǎn)前診斷絨毛染色體異常率，可能是由于兩組病例的臨床指征本身差異較大。

在本研究中，流產(chǎn)胚胎及產(chǎn)前診斷絨毛均以染色體數(shù)目異常為主，流產(chǎn)胚胎數(shù)目異常占異常病例數(shù)98.6%，稍高于曾秋伊等[7]報道的96.5%。產(chǎn)前診斷絨毛染色體數(shù)目異常占異常病例數(shù)89.4%?？梢娙旧w數(shù)目異常在絨毛染色體檢查中是最主要的畸變類型。染色體數(shù)目異常會導(dǎo)致胚胎在孕早期發(fā)生停育，由于額外增加或缺失的一條染色體嚴重破壞了胚胎正常的發(fā)育過程而導(dǎo)致流產(chǎn)[8]。因此，通過早期絨毛染色體數(shù)目的檢測，可以為胚胎停育患者盡早找到病因，降低病因查找的成本，并提供更科學(xué)的遺傳咨詢；由于染色體數(shù)目異常，阻礙了胚胎的正常發(fā)育，大多數(shù)遭遇自然淘汰而流產(chǎn)，然而少數(shù)染色體異?；純嚎梢宰阍路置?，且常常表現(xiàn)出智力障礙等缺陷[9]，孕早期絨毛染色體產(chǎn)前診斷技術(shù)能更早地檢測出這些先天缺陷的胎兒，讓臨床進行有效的干預(yù)，從而提高人口出生質(zhì)量，減輕家庭和社會的經(jīng)濟負擔(dān)。

本研究發(fā)現(xiàn)流產(chǎn)胚胎和產(chǎn)前診斷絨毛染色體數(shù)目異常所涉及的染色體范圍有所差異，流產(chǎn)胚胎絨毛染色體數(shù)目異常涉及幾乎所有染色體，主要有X單體（20.0%）、16-三體（11.4%）；產(chǎn)前診斷絨毛染色體數(shù)目異常則主要有21-三體（39.0%）、18-三 體（23.7%）、13-三 體（18.6%），X 單 體（15.3%）。因此，筆者認為流產(chǎn)絨毛和產(chǎn)前診斷絨毛可以采取不同的檢測策略，由于流產(chǎn)絨毛的數(shù)目異常涉及幾乎所有的染色體，所以并不適合選擇快速的分子檢測方法；而產(chǎn)前診斷絨毛的數(shù)目異常主要涉及三大染色體和性染色體，因此可以選擇快速產(chǎn)前檢測加上常規(guī)染色體檢查，縮短診斷周期。實際檢查中應(yīng)綜合各技術(shù)的優(yōu)缺點，必要時多種技術(shù)結(jié)合檢測，以提高檢測成功率與異常核型檢出率[10]。

綜上所述，絨毛染色體檢查在孕早期胚胎停育及產(chǎn)前診斷中具有重要的診斷價值，染色體數(shù)目異常是最常見的病因。雖然絨毛的培養(yǎng)難度大、周期長，但隨著臨床取材質(zhì)量的提高及實驗室的不斷探索和優(yōu)化培養(yǎng)技術(shù)，胚胎停育采集的絨毛和產(chǎn)前診斷采集的絨毛培養(yǎng)成功率都在不斷提高。因此，絨毛染色體檢查在孕早期胚胎停育及產(chǎn)前診斷中的優(yōu)勢仍無法被取代。