趙 磊，張會敏，徐美利，鮑 璽，艾 欣，陳艷麟，王成濤*，連運河*

（1 北京工商大學(xué) 食品營養(yǎng)與人類健康北京高精尖創(chuàng)新中心 北京市食品添加劑工程技術(shù)研究中心 北京100048 2 晨光生物科技集團股份有限公司 河北邯鄲057250）

甜葉菊是原產(chǎn)于南美洲的一種菊科草本植物，自20世紀(jì)70年代引進(jìn)以來，中國成為全球最大的甜葉菊種植產(chǎn)地之一[1]。甜葉菊富含甜菊苷、萊鮑迪甙A 等甜菊糖苷，目前作為一種經(jīng)濟作物，主要制成甜味劑，在食品行業(yè)中得到廣泛應(yīng)用[2]。甜葉菊除含有甜菊糖苷外，還含有豐富的酚酸、黃酮等多種具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、降血糖和降血脂等作用的活性物質(zhì)[3-4]。在甜菊糖苷生產(chǎn)過程中會產(chǎn)生大量甜葉菊廢渣，這些廢渣主要處理方式是焚燒和堆肥，其中的酚酸、黃酮等生物活性成分沒有得到高效、合理地利用，反而對環(huán)境產(chǎn)生污染[5]。

Zhao 等[6]通過研究甜葉菊廢渣提取物發(fā)現(xiàn)，甜葉菊廢渣提取物含有綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、異綠原酸A（3，5-二咖啡酰奎寧酸）、異綠原酸B（3，4-二咖啡?？鼘幩幔?、異綠原酸C（4，5-二咖啡?？鼘幩幔㈤纹ぼ?、槲皮素等生物活性成分，具有較強的自由基清除能力，并有明顯的抗炎作用。其中，異綠原酸A 和異綠原酸C 是甜葉菊廢渣提取物的主要成分。付曉等[7]使用HPLC 法分析甜葉菊綠原酸類成分，其中主要為異綠原酸A、異綠原酸C 以及相對低含量的綠原酸。異綠原酸是綠原酸的二咖啡?；〈悩?gòu)體，在植物中廣泛存在，主要存在忍冬科忍冬屬、菊科蒿屬植物中，其中包括金銀花、杜仲等[8]。綠原酸類化合物具有抗氧化、抑菌、抗病毒、抗炎等生物活性[9]。本課題組在近年的研究中證實甜葉菊廢渣提取物具有較強的抗氧化、抗炎作用[10]，然而尚未確定其中發(fā)揮主要功能活性的物質(zhì)。異綠原酸作為甜葉菊廢渣提取物的主要成分，是否是其主要的抗炎活性物質(zhì)有待進(jìn)一步研究。異綠原酸A 與異綠原酸C 分子式相同，化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，兩者在功能活性上可能存在差異。目前對于甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸A 和異綠原酸C 的抗炎作用還鮮見報道。隨著研究方法和科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，對甜葉菊的研究開發(fā)和綜合利用將不斷深入。

為研究甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸的抗炎作用，本文通過建立RAW264.7 細(xì)胞炎癥模型，初步評價甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸的體外抗炎作用。通過建立角叉菜膠致小鼠足腫脹急性炎癥模型，通過測定小鼠足趾的腫脹程度，以及小鼠血清和肝臟中NO、SOD、MDA 和PGE2 水平，驗證甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸的體內(nèi)抗炎效果，為開發(fā)甜葉菊廢渣的經(jīng)濟價值提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑 甜葉菊廢渣提取物（主要成分：綠原酸4.65%，隱綠原酸2.78%，咖啡酸9.72%，異綠原酸A 4.14%，異綠原酸B 3.28%，異綠原酸C 12.67%，槲皮苷1.88%，槲皮素0.71%）、甜葉菊異綠原酸A 和異綠原酸C（>90%），河北晨光生物科技集團股份有限公司；地塞米松，MYM生物技術(shù)有限公司；NO、SOD、MDA 試劑盒，南京建成生物工程有限公司；BCA 蛋白濃度試劑盒、角叉菜膠、脂多糖（LPS）、DMEM 高糖無酚紅培養(yǎng)基，北京索萊寶科技有限公司；PGE2 試劑盒，北京方程生物科技有限公司；阿司匹林，沈陽奧吉那藥業(yè)有限公司；RAW264.7 細(xì)胞（ATCC No.TIB-71），國家實驗細(xì)胞資源共享平臺；噻唑藍(lán)（MTT），美國Sigma 試劑公司；其它試劑均為國產(chǎn)分析純級。

1.1.2 儀器與設(shè)備SpectraMax13 連續(xù)波長多功能酶標(biāo)儀，美國Molecular Devices 公司；601-06游標(biāo)卡尺，哈爾濱量具刃具集團有限公司；TG178型微量離心機，德國HERMLE 公司；Axiovert 200型倒置顯微鏡，德國Zeiss 公司；TGL-10C 型高速臺式離心機，上海智城分析儀器制造有限公司；HH-4 型數(shù)顯恒溫水浴鍋，金壇市科興儀器廠；Galaxy S 型CO2 培養(yǎng)箱，英國RS Biotech 公司。

1.1.3 實驗動物SPF 級ICR 雄性小鼠（6～8 周齡），許可證號為SCXK（京）2012-0001，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司。試驗期間，動物飼養(yǎng)在溫度為（21 ±2）℃，相對濕度（40 ±5）%，晝夜明暗交替時間12 h/12 h 環(huán)境，動物自由采食和飲水。

1.2 試驗方法

1.2.1 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對RAW264.7 細(xì)胞存活率和NO 生成量的影響接種細(xì)胞密度為5×104 個/mL 的細(xì)胞懸浮液于96孔平板中，將平板放入37℃，5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，吸棄上清，加入混合有樣品的DMEM 完全培養(yǎng)液，使樣品的終質(zhì)量濃度為0.1，0.2，0.5，l，2 mg/mL。陽性對照組每孔加入LPS（20 μg/mL）。試驗孔被分為LPS 與異綠原酸A、異綠原酸C、甜葉菊廢渣提取物共同作用組和異綠原酸A、異綠原酸C、甜葉菊廢渣提取物單獨添加組2種，于37℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后收集上清液，選用NO 試劑盒測定NO 生成量。選用MTT 試劑盒測定各組細(xì)胞存活率。

1.2.2 動物分組給藥ICR 雄性小鼠（6～8 周齡）110 只，適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)1 周，正常喂食喂水，適應(yīng)期后隨機分為對照組、地塞米松組（10 mg/kg bw）、阿斯匹林組（10 mg/kg bw）、甜葉菊廢渣提取物、異綠原酸A 和異綠原酸C 組，其中樣品組分為低劑量（0.5 g/kg bw）、中劑量組（1.0 g/kg bw）、高劑量組（2.0 g/kg bw）。連續(xù)給藥7 d，每日灌喂藥品1 次，每3 d 稱量小鼠體重，并根據(jù)小鼠體重變化情況調(diào)節(jié)給藥劑量。

1.2.3 角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的測定 按照1.2.2 節(jié)對小鼠分組給藥，末次給藥30 min 后，給每只小鼠左側(cè)足趾皮下注射25 μL 1%角叉菜膠，右側(cè)足趾不作處理。4 h 后分別用游標(biāo)卡尺準(zhǔn)確測量每只小鼠2 只足趾的厚度，以左、右后肢足趾厚度之差表示炎癥腫脹度，計算各組腫脹度值及腫脹抑制率[11]。

1.2.4 小鼠血清中NO、SOD、MDA 和PGE2 的測定 完成足趾腫脹度測量后，摘取所有小鼠的眼球，取其血液于2 mL 離心管中。置37℃水浴中促其凝固，然后4℃，3 000 r/min 離心10 min，得到上清液即血清。依照試劑盒說明書測定小鼠血清中SOD、MDA、NO 和PGE2 含量，于24 h 內(nèi)完成全部測定，保證數(shù)據(jù)的可靠性。

1.2.5 小鼠肝臟中NO、SOD、MDA 和PGE2 的測定 將處死的小鼠解剖，取肝臟用4℃預(yù)冷的生理鹽水洗去血液，濾紙拭干后置于離心管內(nèi)，放入液氮速凍，待全部解剖完成后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保藏，備用。取相同部位肝臟0.1 mg 于勻漿管中，加入0.9 mL 預(yù)冷的生理鹽水。用組織搗碎機10 000 r/min 上、下研磨，每次10 s，間隔30 s，連續(xù)5 次，制成10%肝勻漿。將制備好的勻漿液在4℃，3 500 r/min 條件下離心15 min，吸取上清液，于-80℃保存?zhèn)溆?。依照試劑盒說明書測定小鼠肝臟勻漿中蛋白、SOD、MDA、NO 和PGE2 含量，于24 h 內(nèi)完成全部測定，保證數(shù)據(jù)的可靠性。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理與分析 試驗結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，采用SPSS 19.0 進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），多重比較采用Duncan 法，P＜0.05 為顯著差異，P＜0.01 為極顯著性差異。

2 試驗結(jié)果及分析

2.1 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對RAW264.7 細(xì)胞存活率的影響

有研究表明若樣品濃度超過細(xì)胞無毒性濃度范圍，則會對細(xì)胞造成毒害作用[12]。通過測定不同質(zhì)量濃度的樣品對細(xì)胞存活率的影響，確定適合后續(xù)研究的樣品質(zhì)量濃度范圍。由圖1a 可以得出，異綠原酸A 質(zhì)量濃度在0.1～2 mg/mL 范圍對細(xì)胞存活率無顯著性影響；異綠原酸C 質(zhì)量濃度在0.1～1 mg/mL 范圍對細(xì)胞存活率無顯著影響，然而當(dāng)樣品質(zhì)量濃度增到2 mg/mL 時，細(xì)胞存活率提高了27.80%；甜葉菊廢渣提取物質(zhì)量濃度在0.1～1 mg/mL 范圍對細(xì)胞存活率無顯著影響，當(dāng)樣品質(zhì)量濃度達(dá)2 mg/mL 時，細(xì)胞存活率提高18.73%。這說明較高質(zhì)量濃度的異綠原酸C 和甜葉菊廢渣提取物可促進(jìn)細(xì)胞的增殖。本試驗樣品無毒質(zhì)量濃度范圍可選擇0.1～2 mg/mL。

如圖1b所示，加入LPS 誘導(dǎo)的RAW264.7 炎癥細(xì)胞與正常細(xì)胞相比，存活率下降19.46%。當(dāng)異綠原酸C 質(zhì)量濃度為1 mg/mL 時，對LPS 誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞的存活率有促進(jìn)作用，RAW264.7細(xì)胞存活率提高23.32%；當(dāng)異綠原酸A 和異綠原酸C 質(zhì)量濃度2 mg/mL 時，RAW264.7 細(xì)胞存活率分別提高25.92%和43.22%。而甜葉菊廢渣提取物質(zhì)量濃度在0.1～2 mg/mL 范圍內(nèi)對RAW264.7細(xì)胞的存活率均無顯著性作用。綜上可以得出，3種樣品對RAW264.7 細(xì)胞存活率的促進(jìn)效果為異綠原酸C＞異綠原酸A＞甜葉菊廢渣提取物。

圖1 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對正常RAW264.7 細(xì)胞（a）和LPS 誘導(dǎo)的炎癥RAW264.7 細(xì)胞（b）存活率的影響Fig.1 Effects of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on the survival rate of normal RAW264.7 cells（a）and LPS-induced inflammation RAW264.7 cells（b）

2.2 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對炎癥細(xì)胞NO 生成量的影響

檢測細(xì)胞NO 生成量是抗炎活性研究中常用的手段之一[13]。細(xì)胞在正常情況下生成少量NO，在炎癥狀態(tài)下大量產(chǎn)生NO，并釋放到細(xì)胞培養(yǎng)液中，通過檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中NO 含量可以反映細(xì)胞炎癥狀態(tài)及樣品的抗炎效果[14-16]。由圖2可知，RAW264.7 細(xì)胞加入LPS 誘導(dǎo)后NO 釋放量顯著增至18.87 μmol/L，約為正常RAW264.7 細(xì)胞NO生成量（5.73 μmol/L）的3.3 倍。當(dāng)樣品質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL 時，異綠原酸A、異綠原酸C 和甜葉菊廢渣提取物對炎癥細(xì)胞NO 生成量無顯著影響；質(zhì)量濃度在0.5～2.0 mg/mL 范圍的異綠原酸A、異綠原酸C 和甜葉菊廢渣提取物對RAW264.7 細(xì)胞NO 生成量有明顯的抑制作用，且隨樣品質(zhì)量濃度的增加抑制效果增強。當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到2.0 mg/mL時，與LPS 組相比，異綠原酸A、異綠原酸C 和甜葉菊廢渣提取物組中RAW264.7 細(xì)胞NO 的生成量分別減少43.60%，65.62%和57.59%。該結(jié)果表明，異綠原酸A、異綠原酸C 和甜葉菊廢渣提取物均可抑制炎癥環(huán)境下NO 的產(chǎn)生，進(jìn)而減輕炎癥，發(fā)揮抗炎作用，且在樣品質(zhì)量濃度為2.0 mg/mL 時甜葉菊廢渣提取物與異綠原酸C 和異綠原酸A抗炎效果均無顯著性差異。由此推測，異綠原酸C的抗炎效果高于異綠原酸A，可能與二者分子結(jié)構(gòu)不同有關(guān)，同時甜葉菊廢渣提取物的抗炎作用也可能與甜葉菊廢渣提取物中其它黃酮類和酚酸類的物質(zhì)有關(guān)。Zhao 等[6]研究顯示甜葉菊廢渣提取物中除含有異綠原酸外，還含有豐富的綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、槲皮苷和槲皮素。Gao 等[17]研究結(jié)果顯示綠原酸對脂多糖誘導(dǎo)的乳上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)有一定的保護作用。宋亞玲等[18]研究金銀花中酚酸類成分及其抗炎活性，發(fā)現(xiàn)綠原酸、隱綠原酸和咖啡酸對LPS 刺激的巨噬細(xì)胞炎癥因子均有不同程度的抑制作用。Hou 等[19]研究表明槲皮素對MC903 誘導(dǎo)的特應(yīng)性皮炎小鼠模型有很好的抗炎作用。袁雯雯等[20]研究結(jié)果顯示不同濃度的咖啡酸對經(jīng)LPS 刺激后的HUVECs 細(xì)胞的存活率有一定的促進(jìn)作用。

圖2 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對炎癥細(xì)胞NO 生成量的影響Fig.2 Effects of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on NO production in inflammatory cells

2.3 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的影響

角叉菜膠作為誘導(dǎo)劑的致炎模型，常用于抗炎藥物的藥效評價等領(lǐng)域，其根據(jù)注射后小鼠足部的腫脹度差異來分析樣品的抗炎效果[21]。由表1可知，阿司匹林與地塞米松陽性對照組均對小鼠足趾腫脹度有顯著的抑制作用，其中地塞米松抑制效果最好，抑制率39.47%。在低劑量與中劑量組中，異綠原酸C 對小鼠足趾腫脹均有明顯的抑制作用，異綠原酸A 與甜葉菊廢渣提取物對其無顯著作用；在高劑量時，異綠原酸A、異綠原酸C和甜葉菊廢渣提取物均對小鼠足趾腫脹有明顯的抑制作用，抑制率分別為32.71%，34.65%和21.80%，抗炎效果排序依次為異綠原酸C＞異綠原酸A≈甜葉菊廢渣提取物。推測甜葉菊廢渣提取物中的抗炎成分可能是異綠原酸A 和異綠原酸C。有研究表明，異綠原酸A 和異綠原酸C 可以抑制白細(xì)胞遷移和炎癥過程超氧陰離子的產(chǎn)生，具有良好的抗炎活性[8]。異綠原酸C 的抗炎效果比異綠原酸A 的抗炎效果好，可能與二者的化學(xué)結(jié)構(gòu)差異有關(guān)。

表1 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對小鼠足趾腫脹度的影響（±s，n=10）Table 1 Effect of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on paw edemain mice（±s，n=10）

表1 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對小鼠足趾腫脹度的影響（±s，n=10）Table 1 Effect of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on paw edemain mice（±s，n=10）

注：阿司匹林（10 mg/kg bw）、地塞米松（10 mg/kg bw）、樣品低劑量組（0.5 g/kg bw）、中劑量組（1.0 g/kg bw）、高劑量組（2.0 g/kg bw）；a～b 表示同列中標(biāo)有不同字母的數(shù)值存在顯著性差異（P＜0.05）。

?抑制率/%模型組 0.38 ±0.08a -阿司匹林 0.29 ±0.06b 22.56地塞米松 0.23 ±0.06d 39.47異綠原酸A 低劑量 0.31 ±0.06a 18.42異綠原酸A 中劑量 0.32 ±0.04a 16.67異綠原酸A 高劑量 0.26 ±0.07b 32.71異綠原酸C 低劑量 0.28 ±0.05b 25.88異綠原酸C 中劑量 0.27 ±0.08c 29.70異綠原酸C 高劑量 0.25 ±0.09c 34.65甜葉菊廢渣提取物低劑量 0.37 ±0.07a 3.51甜葉菊廢渣提取物中劑量 0.33 ±0.09a 7.89甜葉菊廢渣提取物高劑量 0.30 ±0.08b 21.80組別 足趾腫脹度/mm

2.4 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對小鼠血清中NO、SOD、MDA 和PEG2 的影響

利用小鼠足趾腫脹炎癥模型，研究小鼠血清中NO、SOD、MDA 和PGE2 含量的變化，根據(jù)文獻(xiàn)報道[22]，NO 通常用來評價樣品的抗炎活性，PGE2是一種二十碳不飽和脂肪酸，一種重要的細(xì)胞因子，具有增高血流量，降血壓，免疫活性，抗炎等作用。本研究測定NO 和PGE2 水平，評價樣品的抗炎活性。SOD 和MDA 共同作為測定樣品抗氧化能力的指標(biāo)[23]。

由表2可知，阿司匹林與模型組相比，血清中NO 和MDA 水平分別降低10.05%和34.72%，SOD活力明顯升高6.59%，PGE2 水平無顯著變化。地塞米松與模型組相比，小鼠血清中NO、PGE2 和MDA 水平明顯降低，分別降低10.07%，22.06%和22.89%，SOD 活力明顯升高6%。在低劑量組中，異綠原酸A、異綠原酸C 和甜葉菊廢渣提取物與模型組相比，NO、SOD、MDA 和PGE2 均無顯著性變化。在中劑量組中，與小鼠模型組相比，異綠原酸A 和異綠原酸C 均可明顯提高SOD 活力，分別提高5.12%和5.52%，且異綠原酸C 使PGE2 含量降低30.25%，而甜葉菊廢渣提取物對4 個指標(biāo)均未產(chǎn)生明顯影響，中劑量組中抗炎作用效果排序為異綠原酸C＞異綠原酸A＞甜葉菊廢渣提取物。在高劑量組中，異綠原酸A 使SOD 活力顯著提高5.95%，使MDA 水平下降33.95%，異綠原酸C 和甜葉菊廢渣提取物均能明顯改變4 個指標(biāo)的水平，異綠原酸C 組比模型組中的NO、PGE2 和MDA 含量分別下降8.26%，28.4%和27.34%，SOD活力提高6.76%，甜葉菊廢渣提取物組比模型組的NO、PGE2 和MDA 含量分別下降6.25%，27.84%和27.34%，SOD 活力提高6.25%，這說明異綠原酸A、異綠原酸C 和甜葉菊廢渣提取物高劑量組的抗炎效果均強于低劑量組，高劑量組中抗炎作用排序為異綠原酸C≈甜葉菊廢渣提取物＞異綠原酸A，這與體外RAW264.7 細(xì)胞的抗炎活性研究結(jié)果基本一致。甜葉菊廢渣提取物與異綠原酸C 抗炎效果相當(dāng)，推測甜葉菊廢渣提取物中除異綠原酸A 和異綠原酸C 外，其它多酚黃酮類物質(zhì)也具有抗炎活性。劉明月[24]報道槲皮素能顯著抑制RAW264.7 細(xì)胞分泌促炎介質(zhì)TNF-α、PGE2 和NO 的含量達(dá)到抗炎作用。Fikry 等[25]研究顯示咖啡酸能使關(guān)節(jié)炎大鼠模型中MDA 含量顯著降低30%，NO 含量顯著降低33%，對大鼠關(guān)節(jié)炎有一定抑制作用。

表2 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對小鼠血清中NO、SOD、MDA、PGE2 的影響（±s，n=10）Table 2 Effects of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on NO，SOD，MDAand PGE2 in serum of mice（±s，n=10）

表2 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對小鼠血清中NO、SOD、MDA、PGE2 的影響（±s，n=10）Table 2 Effects of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on NO，SOD，MDAand PGE2 in serum of mice（±s，n=10）

注：阿司匹林（10 mg/kg bw）、地塞米松（10 mg/kg bw）、樣品低劑量組（0.5 g/kg bw）、中劑量組（1.0 g/kg bw）、高劑量組（2.0 g/kg bw）；a～b 表示同列中標(biāo)有不同字母的數(shù)值存在顯著性差異（P＜0.05）。

?組 別 NO/μmol·L-1 PGE2/pg·mL-1 SOD/U·mL-1 MDA/nmol·mL-1模型組 39.22 ±1.38a 34.05 ±5.52a 158.26 ±7.06a 6.51 ±0.96a阿司匹林 35.28 ±2.56b 34.40 ±5.04a 168.69 ±9.75b 4.25 ±1.27b地塞米松 35.27 ±1.8b 26.54 ±6.73b 167.76 ±7.71b 5.02 ±0.74b異綠原酸A 低劑量 38.77 ±2.62a 36.22 ±2.47a 163.49 ±4.51a 6.22 ±2.27a異綠原酸A 中劑量 37.89 ±1.28a 36.57 ±8.38a 166.37 ±7.20b 5.02 ±1.39a異綠原酸A 高劑量 36.68 ±0.77a 36.61 ±5.76a 167.68 ±6.93b 4.30 ±0.88b異綠原酸C 低劑量 37.51 ±2.79a 27.44 ±2.29a 160.16 ±5.18a 5.91 ±0.60a異綠原酸C 中劑量 37.69 ±3.37a 23.75 ±5.42b 167.00 ±5.70b 5.69 ±1.12a異綠原酸C 高劑量 35.98 ±1.19b 24.38 ±9.85b 168.96 ±5.42b 4.73 ±0.77b甜葉菊廢渣提取物低劑量 38.87 ±3.44a 32.35 ±2.82a 162.00 ±6.24a 5.91 ±0.60a甜葉菊廢渣提取物中劑量 37.69 ±1.66a 31.87 ±8.27a 163.64 ±6.37a 5.69 ±1.12a甜葉菊廢渣提取物高劑量 36.77 ±2.63b 24.57 ±5.54b 166.79 ±6.39b 4.73 ±0.77b

2.5 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對小鼠肝臟中NO、SOD、MDA 和PGE2 的影響

利用小鼠足趾腫脹炎癥模型，研究小鼠肝臟中NO、SOD、MDA 和PGE2 的含量。由表3可知，阿司匹林組與模型組相比NO、MDA 和PGE2 含量分別降低54.39%，14.32%和28.57%，SOD 活力比模型組提高24.43%；地塞米松組NO 和MDA水平分別比模型組降低52.63%和47.62%，PGE2含量和SOD 活力分別比模型組提高18.01%和17.67%，有很好的抗炎作用。在低劑量樣品組中，異綠原酸A 和異綠原酸C 與模型組相比SOD 活力分別提高12.35%和10.73%，且異綠原酸C 組比模型組的NO 含量降低35.09%，甜葉菊廢渣提取物對4 個指標(biāo)含量均無顯著作用。在中劑量樣品組中，異綠原酸A 和異綠原酸C 與模型組相比，可顯著降低NO 和MDA 的水平，提高SOD 活力，其中異綠原酸A 組比模型組NO 和MDA 含量分別降低40.35%和34.52%，SOD 活力提高24.79%；異綠原酸C 組比模型組NO 和MDA 含量分別降低42.11%和30.95%，SOD 活力提高24.80%，甜葉菊廢渣提取物組對4 個指標(biāo)含量均無顯著性影響，中劑量樣品組抗炎效果為：異綠原酸A≈異綠原酸C＞甜葉菊廢渣提取物。在高劑量樣品組中，異綠原酸A 組比模型組NO 和MDA 含量分別降低50.88%和47.62%，SOD 活力提高36.66%，PGE2 含量與模型組無顯著性差異。異綠原酸C 組比模型組NO 和MDA 含量分別降低57.89%和42.86%，SOD 活力提高14.27%，PGE2含量與模型組無顯著性差異。甜葉菊廢渣提取組僅NO 含量比模型組降低40.35%，而SOD、MDA和PGE2 水平與模型組相比均無顯著性差異。高劑量樣品組抗炎效果為：異綠原酸A≈異綠原酸C＞甜葉菊廢渣提取物。綜上，異綠原酸A 和異綠原酸C 具有較強的體內(nèi)抗炎作用，且二者在肝臟中的抗炎效果無顯著性差異，而甜葉菊廢渣提取物的抗炎效果弱于異綠原酸A 和異綠原酸C，推測異綠原酸A 和異綠原酸C 可能是甜葉菊廢渣提取物在肝臟中發(fā)揮抗炎作用的主要成分。

表3 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對小鼠肝臟中NO、SOD、MDA、PGE2 的影響（±s，n=10）Table 3 Effects of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on NO，SOD，MDA and PGE2 in liver of mice（±s，n=10）

表3 甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸對小鼠肝臟中NO、SOD、MDA、PGE2 的影響（±s，n=10）Table 3 Effects of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on NO，SOD，MDA and PGE2 in liver of mice（±s，n=10）

注：阿司匹林（10 mg/kg bw）、地塞米松（10 mg/kg bw）、樣品低劑量組（0.5 g/kg bw）、中劑量組（1.0 g/kg bw）、高劑量組（2.0 g/kg bw）；a～c 表示同列中標(biāo)有不同字母的數(shù)值存在顯著性差異（P＜0.05）。

組別 NO/μmol·g-1 蛋白 PGE2/pg·g-1 蛋白 SOD/U·g-1 蛋白 MDA/nmol·g-1 蛋白空白 0.57 ±0.29a 34.63 ±3.37a 192.98 ±17.30a 0.84 ±0.11a阿司匹林松0.26 ±0.11c 43.09 ±1.40b 165.35 ±30.02d 0.60 ±0.03b地塞米0.27 ±0.18c 40.868 ±5.48b 227.07 ±13.64b 0.44 ±0.09c異綠原酸A 低劑量 0.47 ±0.11a 32.06 ±3.35a 216.81 ±16.72bc 0.81 ±0.16a異綠原酸A 中劑量 0.34 ±0.14bc 29.76 ±4.87a 240.82 ±9.74c 0.55 ±0.24c異綠原酸A 高劑量 0.28 ±0.05c 39.66 ±5.59a 263.73 ±19.64c 0.44 ±0.19c異綠原酸C 低劑量 0.37 ±0.08ab 38.68 ±7.54a 213.69 ±26.94ab 0.84 ±0.07a異綠原酸C 中劑量 0.33 ±0.15bc 37.28 ±4.15a 240.84 ±20.20bc 0.58 ±0.23bc異綠原酸C 高劑量 0.24 ±0.05c 38.69 ±1.22a 220.51 ±16.59bc 0.48 ±0.09c甜葉菊廢渣提取物低劑量 0.47 ±0.20a 36.10 ±2.14a 206.31 ±33.40a 0.66 ±0.16ab甜葉菊廢渣提取物中劑量 0.40 ±0.25ab 41.37 ±5.89ab 197.77 ±11.14a 0.70 ±0.13a甜葉菊廢渣提取物高劑量 0.34 ±0.18bc 36.91 ±4.33a 208.77 ±13.85ab 0.66 ±0.26ab

3 結(jié)論

本文通過建立LPS 誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞炎癥模型和角叉菜膠致小鼠足部腫脹模型，以NO、PGE2、SOD 和MDA 等為檢測指標(biāo)，研究甜葉菊廢渣提取物及其主要成分異綠原酸的體內(nèi)外抗炎作用。結(jié)果表明，甜葉菊廢渣提取物及其主要組分異綠原酸的抗炎效果排序為異綠原酸C＞異綠原酸A≈甜葉菊廢渣提取物。樣品通過降低NO 和MDA 含量，提高SOD 活力，發(fā)揮抗炎作用。推測甜葉菊廢渣提取物的抗炎成分主要為異綠原酸C，其它多酚和黃酮類化合物也有一定的抗炎效果，異綠原酸C 的抗炎作用大于異綠原酸A，推測與二者的分子結(jié)構(gòu)有關(guān)，具體抗炎機制差異有待研究。