謝春芳 于瑞嵩 董世娟 陳冰清

摘? 要：非洲豬瘟病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）主要感染豬單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等免疫淋巴細(xì)胞，通常會(huì)導(dǎo)致豬出現(xiàn)急性出血癥狀，體溫升高，死亡率達(dá)100%。豬在人類食物鏈中的地位不可替代，而且豬的生理結(jié)構(gòu)、免疫特性與人類相似，因此非洲豬瘟的免疫防控問題與人類社會(huì)環(huán)境和疾病控制密切相關(guān)。本文綜述了宿主細(xì)胞對(duì)ASFV侵染做出的免疫應(yīng)答，以及ASFV如何抑制宿主細(xì)胞的免疫應(yīng)答，希望對(duì)非洲豬瘟的免疫防控提供一些理論參考。

關(guān)鍵詞：非洲豬瘟病毒;免疫應(yīng)答;免疫逃逸;細(xì)胞凋亡;自噬抑制

中圖分類號(hào)：S855 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：C 文章編號(hào)：1001-0769（2021）01-0031-04

非洲豬瘟病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）侵染細(xì)胞后，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)泡小體，內(nèi)泡小體內(nèi)的酸性環(huán)境可以破壞ASFV的外膜和蛋白衣殼，暴露內(nèi)膜，使ASFV內(nèi)膜上的跨膜肽得以與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，待病毒內(nèi)膜與細(xì)胞膜融合后，病毒核質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，從而感染宿主細(xì)胞，啟動(dòng)病毒復(fù)制周期[1-4]。

被ASFV感染的細(xì)胞通過模式識(shí)別受體（Pattern Recognition Receptors，PRRs）檢測(cè)病原體相關(guān)分子模式（Pathogen-associated Molecular Patterns，PAMPs），啟動(dòng)先天性免疫，分泌細(xì)胞免疫因子。為了逃避宿主細(xì)胞的免疫應(yīng)答，ASFV編碼相應(yīng)的病毒蛋白用于免疫逃逸或抑制[5-6]。

ASFV很難清除，目前非洲豬瘟的滅活苗、亞單位苗和弱毒苗都不能誘導(dǎo)豬產(chǎn)生足夠安全且有效的抗體來控制非洲豬瘟[7-8]。

1? 宿主細(xì)胞感染ASFV后的免疫應(yīng)答

ASFV主要侵染單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等免疫細(xì)胞。免疫細(xì)胞感染ASFV后，迅速產(chǎn)生免疫應(yīng)答，在被ASFV刺激的免疫細(xì)胞外周血單核細(xì)胞（ Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMC）中，干擾素（Interferon，IFN）陽性淋巴細(xì)胞群以CD4+/CD8+ T細(xì)胞表型為主，還有一部分為記憶輔助性T細(xì)胞。體外試驗(yàn)證明，豬IFN可降低豬巨噬細(xì)胞中ASFV的復(fù)制，在病毒感染早期IFN可能直接影響感染ASFV宿主細(xì)胞的相互作用[9-10]。

細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（Cytotoxic T Lymphocytes，CTL）對(duì)抵御細(xì)胞內(nèi)病原體，特別是病毒起重要作用。ASFV強(qiáng)毒株與弱毒株或無毒株的發(fā)病機(jī)制和免疫誘導(dǎo)不同。感染弱毒或無毒的ASFV時(shí)，被感染豬體內(nèi)T細(xì)胞、自然殺傷（Natural Killer，NK）細(xì)胞的活性增強(qiáng)，NK細(xì)胞可以通過直接與被病毒感染的細(xì)胞結(jié)合殺死病毒，也可以通過分泌細(xì)胞因子如干擾素和趨化因子等抵抗病毒感染，感染細(xì)胞分泌的干擾素還可以增強(qiáng)NK細(xì)胞的活性;弱毒或無毒的ASFV會(huì)誘導(dǎo)表達(dá)穿孔素的T細(xì)胞分化增殖為CD4+ T細(xì)胞或CD4+/CD8+ T細(xì)胞。弱毒或無毒的ASFV感染能誘導(dǎo)記憶性T細(xì)胞的增殖，抵抗再次感染同源性病毒株[11-15]。

哺乳動(dòng)物巨噬細(xì)胞至少有13種不同的Toll樣受體（Toll-like Receptor，TLR），病毒的脂類或糖蛋白與TLR的胞外域結(jié)合后會(huì)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子、趨化因子的共同效應(yīng)，還能誘導(dǎo)產(chǎn)生具有增強(qiáng)抗病毒作用的IFN-β，并參與細(xì)胞先天性免疫應(yīng)答中TLR依賴和非依賴途徑，誘導(dǎo)抗病毒作用[16-18]。

2? ASFV抑制細(xì)胞免疫應(yīng)答

當(dāng)ASFV侵染細(xì)胞后，為了避免被細(xì)胞的免疫因子降解，ASFV會(huì)編碼多種病毒蛋白用于逃避宿主細(xì)胞的免疫應(yīng)答。ASFV主要通過抑制TLR、干擾素調(diào)節(jié)因子3 （Interferon Regulation Factor 3，IRF3）和核因子?B （Nuclear Factor ?B，NF-?B）等細(xì)胞免疫因子逃避細(xì)胞免疫，從而在細(xì)胞內(nèi)環(huán)境中生存。

ASFV抑制TLR免疫信號(hào)途徑的蛋白目前只發(fā)現(xiàn)一種，即ASFV pI329L。該蛋白高度糖基化，是一種跨膜蛋白，具有與TLR3-Toll/Interleukin-1受體（TLR3-TIR）結(jié)構(gòu)域同源的區(qū)域，通過作用于β-干擾素TIR結(jié)構(gòu)域銜接蛋白（TIR-domain-containing Adaptor Inducing Interferon-β，TRIF）抑制TLR3信號(hào)途徑，抑制雙鏈RNA刺激的NF-?B和IRF3的激活，從而抑制細(xì)胞免疫反應(yīng)[19-20]。

ASFV多基因家族蛋白（Multiogenes Family，MGF）中的MGF360和MGF505/530也可以通過抑制IRF3和NF-?B轉(zhuǎn)錄因子抑制誘導(dǎo)和影響Ⅰ型干擾素的作用，阻斷感染細(xì)胞Ⅰ型干擾素的免疫應(yīng)答。ASFV pDP96R有4段10個(gè)氨基酸串聯(lián)重復(fù)序列（10-amino acid tandem repeats），C-末端有結(jié)構(gòu)域，可以抑制TANK結(jié)合酶1（TANK Binding Kinase 1，TBK1）的磷酸化，從而抑制下游干擾素調(diào)節(jié)因子3（Interferon Regulation Factor 3，IRF3）的活性，阻斷干擾素刺激基因（Stimulator of Interferon Gene，STING）參與的STING-TBK1-IRF3或STING-TBK1-IKKβ信號(hào)途徑，抑制干擾素的表達(dá)，而干擾素是恒定自然殺傷T? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?（Invariant Nature Killer T，iNKT）細(xì)胞激活的有效電感器，干擾素的阻斷可能會(huì)影響iNKT細(xì)胞的活化[21-24]。

ASFV pA238L可以抑制NF-?B和活化T細(xì)胞核因子（Nuclear Factor of Activated T Cells，NFAT）免疫途徑。pA238L與細(xì)胞組氨酸酰基轉(zhuǎn)移酶p300/CBP共作用，通過直接結(jié)合鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶抑制NF-?B轉(zhuǎn)錄因子，從而抑制宿主鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶依賴途徑，抑制宿主免疫調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄活性[6]。

3? ASFV抑制細(xì)胞凋亡和自噬

自噬和凋亡是細(xì)胞重要的生物學(xué)特征，破壞程序性細(xì)胞死亡的宿主防御系統(tǒng)是大DNA病毒感染的一個(gè)顯著特征。為了在宿主細(xì)胞中有足夠的時(shí)間復(fù)制增殖，ASFV會(huì)抑制細(xì)胞的過早凋亡。

ASFV pA179L定位于細(xì)胞線粒體或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，能夠與B細(xì)胞淋巴瘤2 （B-cell Lymphoma-2，Bcl-2）或Bcl-2同源物包括促凋亡的Bcl-2蛋白家族成員和自噬調(diào)節(jié)因子Beclin相結(jié)合。pA179L與Beclin結(jié)合時(shí)使用的是與促凋亡Bcl-2結(jié)合的同一典型配體結(jié)合槽，pA179L具有與促凋亡的Bcl-2蛋白相似的α螺旋結(jié)構(gòu)配體結(jié)合槽，Beclin BH3肽與pA179L的α螺旋2～5形成的表面凹槽結(jié)合，Beclin BH3基序與pA179L配體結(jié)合槽的結(jié)合模式和Bid BH3基序與pA179L配體結(jié)合槽的結(jié)合模式非常相似，Beclin利用3個(gè)典型的疏水殘基L110、L114和F121以及T117來結(jié)合pA179L配體結(jié)合槽，pA179L配體結(jié)合槽與Bcl-2促凋亡蛋白家族成員及自噬調(diào)節(jié)因子Beclin BH3基序結(jié)合：pA179L D80和pA179L與Beclin K115之間的離子相互作用以及pA179L N83與Beclin D119之間的氫鍵、pA179L G85與Beclin D122之間的氫鍵和pA179L Y46與Beclin L114主鏈之間的氫鍵相互作用，抑制細(xì)胞自噬;pA179L的α螺旋2～5形成配體結(jié)合槽，與Bcl-2 BH3基序配體結(jié)合，從而與促凋亡蛋白Bcl-2競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合促凋亡蛋白，抑制細(xì)胞凋亡[25-27]。

DP71L作用于宿主蛋白磷酸化酶1 （Protein Phosphatase 1，PP1）的去磷酸化，從而防止通過雙鏈RNA依賴性蛋白激酶R （Double-stranded RNA-dependent Protein Kinase，PKR）或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（Protein Kinase R-like ER Kinase，PERK）磷酸化誘導(dǎo)的蛋白合成關(guān)閉[28]。

入侵的ASFV可以抑制細(xì)胞自噬和凋亡的發(fā)生或過早發(fā)生，從而為ASFV的復(fù)制和表達(dá)裝配爭(zhēng)取足夠的時(shí)間，傳播并繁殖下一代病毒。

4? 小結(jié)

ASFV抗原多樣性是阻礙ASFV疫苗發(fā)展的關(guān)鍵因素，天然和基因缺失的減毒活毒株可抵御同源的毒株，誘導(dǎo)抗體起保護(hù)作用。誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（Cytotoxic T Lymphocyte，CTL）可能是完全保護(hù)的關(guān)鍵，依賴于CTL靶點(diǎn)識(shí)別的亞單位疫苗可誘導(dǎo)商品豬ASFV抗原特異性CTL反應(yīng)，但仍需要進(jìn)一步的評(píng)估[29-30]。

ASFV在家豬上可引起致命的出血病，死亡率高達(dá)100%。ASFV可以在蜱蟲體內(nèi)存活，在環(huán)境中的耐受力強(qiáng)，一系列預(yù)防和控制非洲豬瘟的措施是提高飼養(yǎng)技術(shù)、改善飼養(yǎng)環(huán)境、改善生態(tài)環(huán)境和控制豬肉安全的首要條件。同時(shí)，研究ASFV與細(xì)胞的相互作用可以為人類相似病毒的免疫防控提供一些啟示，但是關(guān)于非洲豬瘟疫苗的研究仍然存在許多問題，需要去克服、去完善。

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