張洪宇,芮雅寶,李 軍,陸 通,王燮辰,蒲艷軍,王旭垠,閆 蕾

原發(fā)性肝癌是常見的一種惡性腫瘤，發(fā)病率呈上升趨勢，且具有較高病死率，嚴重威脅患者生命健康、影響患者生活質(zhì)量[1]。原發(fā)性肝癌早期癥狀較為隱匿，潛伏時間長，發(fā)現(xiàn)時通常已屬中晚期，大部分失去最佳手術(shù)治療時機。而經(jīng)導管肝動脈化療栓塞術(shù)(TACE)成為中晚期肝癌主要治療方法，其在延長患者生存期、抑制腫瘤生長等方面有良好療效[2-3]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，長鏈非編碼RNA(lncRNA)與癌癥發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移關(guān)系緊密，而尚無有關(guān)長鏈反義非編碼RNA(lncRNA-ANRIL)與肝癌關(guān)系的報道[4]。本文通過分析中晚期肝癌患者TACE治療后外周血中l(wèi)ncRNA-ANRIL的表達與患者預后相關(guān)性，以期為改善患者預后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選擇我院于2015年1月-2019年1月收治的中晚期肝癌患者97例，符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2011版)》[5]診斷標準，且均行TACE術(shù)治療。納入標準：①經(jīng)臨床表現(xiàn)、影像學及病理學證實為原發(fā)性肝癌，且TNM分期為Ⅲb-Ⅳ期；②符合TACE術(shù)指征，且臨床資料完整；③獲得知情同意。排除標準：①轉(zhuǎn)移性肝癌、血管瘤及其他惡性腫瘤者；②TACE術(shù)禁忌者；③術(shù)前合并急慢性感染者或凝血功能障礙者；④精神疾病者；⑤妊娠或哺乳期婦女。納入的97例患者中，男性59例，女性38例；年齡31～78歲，平均年齡(56.73±8.97)歲；體質(zhì)指數(shù)(BMI)22.41±1.28 kg/m2；TNM分期：Ⅲb期56例，Ⅳa期28例，Ⅳb期13例。受試者均經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 方法:所有患者均行TACE術(shù)治療，具體方法：穿刺點選取患者右側(cè)腹股溝下方韌帶中點下1～2 cm處，以Selding穿刺及時，經(jīng)肝總動脈、腹主動脈及股動脈將5F導管超選擇至腫瘤供血動脈，固定導管頭端，注入700 mg 5-氟尿嘧啶、40 mg表阿霉素、80 mg順鉑與5～30 mL碘化油乳劑充分混合成化療藥碘化油乳劑，行腫瘤血管栓塞。術(shù)后進行常規(guī)營養(yǎng)支持、補液等治療。

1.3 預后評價:所有患者均隨訪至2020年1月31日，觀察患者總體生存時間和無進展生存時間，以死亡或隨訪末為終點，其中以復發(fā)、轉(zhuǎn)移和死亡為預后不良，反之為預后良好。

1.4 觀察指標:①觀察術(shù)前、術(shù)后7 d和術(shù)后1個月肝功能變化，分別于術(shù)前、術(shù)后7 d和術(shù)后1個月清晨空腹采集3 mL外周靜脈血，離心半徑10 cm，3 000 r/min，離心12 min，取上清液，采用Dxc 800TB全自動生化儀測定肝功能指標總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平。②觀察術(shù)前、術(shù)后7 d和術(shù)后1個月外周血lncRNA-ANRIL表達，分別于術(shù)前、術(shù)后7 d和術(shù)后1個月清晨空腹采集3 mL外周靜脈血，采用一步法總RNA提取試劑Trizol(美國Invitrogen公司)提取總RNA，且逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，進行實時熒光定量RCR(RT-PCR)。使用primer 6.0軟件設(shè)計引物，RT-PCR反應(yīng)，95 ℃反應(yīng)30 s，35個循環(huán)；設(shè)定95 ℃ 10 s、60 ℃ 30 s。采用2-△△Ct計算相對表達量。具體引物見表1。③觀察不同預后情況外周血中l(wèi)ncRNA-ANRIL表達水平。④GAPDH是糖酵解反應(yīng)中的一個酶，其在組織中一般都高水平表達且表達量相對恒定，被用作該實驗操作的標準化內(nèi)參。

表1 具體引物

2 結(jié)果

2.1 術(shù)前、術(shù)后7 d和術(shù)后1個月肝功能變化比較:術(shù)前血清TBIL、DBIL、AST和ALT水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；術(shù)后7 d和術(shù)后1個月血清TBIL、DBIL、AST和ALT水平較術(shù)前升高，而術(shù)后1個月低于術(shù)后7 d(P<0.05)，見表2。

表2 術(shù)前、術(shù)后7 d和術(shù)后1個月肝功能變化比較

2.2 術(shù)前、術(shù)后7 d和術(shù)后1個月外周血lncRNA-ANRIL表達比較:術(shù)前外周血lncRNA-ANRIL表達比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；術(shù)后7 d和術(shù)后1個月外周血lncRNA-ANRIL表達較術(shù)前降低，且術(shù)后1個月低于術(shù)后7 d(P<0.05)。見表3。

表3 術(shù)前、術(shù)后7d和術(shù)后1個月外周血lncRNA-ANRIL表達比較

2.3 預后情況:所有患者均隨訪至2020年1月31日，隨訪12～60個月。平均總生存期為38.83個月(見圖1，目錄后)。根據(jù)預后情況分為預后良好組52例(53.61%)與預后不良組45例(46.39%)。

2.4 不同預后情況外周血lncRNA-ANRIL表達比較:預后良好組外周血lncRNA-ANRIL表達低于預后不良組(P<0.05)，見表4。

表4 不同預后情況外周血lncRNA-ANRIL表達比較

3 討論

正常肝臟組織主要由門靜脈供血，占75%以上；肝癌主要由其所在的肝葉動脈供血，占95%左右。因此，選擇性阻斷肝動脈可使腫瘤組織缺血、壞死。腫瘤生長過大或多發(fā)、跨葉時通常需接受多支供血，有時也會由于主要供血動脈被栓塞而通過側(cè)支循環(huán)供血。故而，臨床上采用經(jīng)肝動脈治療能夠在區(qū)域范圍內(nèi)將肝癌細胞有效殺滅且對非瘤肝組織影響較小[6]。TACE作為一種介入姑息治療手段，將化療藥物主要通過介入方法直接注入腫瘤供血動脈中，并應(yīng)用碘化油乳化進行栓塞，使肝動脈供血阻斷，維持腫瘤病灶局部較高藥物濃度，從而促進腫瘤病灶縮小和腫瘤細胞壞死[7]。本文研究表明，術(shù)后7d和術(shù)后1個月血清TBIL、DBIL、AST和ALT水平較術(shù)前升高而術(shù)后1個月低于術(shù)后7d，提示TACE治療后，可短暫導致患者肝功能損害，且逐漸出現(xiàn)好轉(zhuǎn)，認為TACE導致肝功能損害的機制可能是由于TACE治療腫瘤同時造成非腫瘤組織缺血缺氧及缺血后再灌注損傷，導致自由基介導的肝細胞損傷；且應(yīng)用大劑量化療藥物灌注入肝臟中，從而使部分化療藥物進入癌變組織旁的非癌區(qū)難以避免，不同程度殺傷正常肝細胞。隨著近年來臨床上微導管的使用，TACE對肝功能損傷明顯減輕。

lncRNA成為近年來研究熱點，主要是長度200個堿基且不具備編碼蛋白功能的一類RNA分子。研究表明，許多l(xiāng)ncRNA在多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮作用[8-10]。lncRNA已被證實在肝癌、胃癌等消化系統(tǒng)腫瘤中診斷價值較大。Ma等[11]學者研究報道顯示，ANRIL能夠通過街道上皮細胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生，促進肝癌轉(zhuǎn)移。Lan等[12]學者研究報道顯示，ANRIL能夠通過表皮生長因子受體依賴性信號通過，促進胃癌侵襲-轉(zhuǎn)移級聯(lián)反應(yīng)及促進胃癌細胞生長，且胃癌組織中ANRIL表達高于正常組織。本文研究表明，術(shù)后7d和術(shù)后1個月外周血lncRNA-ANRIL表達較術(shù)前降低，且術(shù)后1個月低于術(shù)后7d，預后良好組外周血lncRNA-ANRIL表達低于預后不良組，提示TACE治療后可下調(diào)外周血lncRNA-ANRIL表達，且與預后密切相關(guān)。

綜上所述，中晚期肝癌患者TACE治療后外周血lncRNA-ANRIL表達降低，且與預后密切相關(guān)，預后越差lncRNA-ANRIL表達越高。