白海軍，李志江*

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)體育教研部，黑龍江 大慶 163000；2.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 大慶 163000）

現(xiàn)今社會節(jié)奏的不斷加快，高負(fù)荷的腦力與體力勞動者易出現(xiàn)疲勞癥狀，致使工作效率降低乃至威脅身心健康，研究表明通過適當(dāng)補(bǔ)充抗疲勞外源活性物質(zhì)，是一種方便、靈活的延緩疲勞手段[1-2]。目前已發(fā)現(xiàn)大量具有抗疲勞活性的物質(zhì)，諸如多糖、多肽、植物多酚等，它們在具備抗氧化活性的同時還兼具抗疲勞作用，因而不斷有學(xué)者根據(jù)疲勞產(chǎn)生的“自由基理論”嘗試建立抗氧化能力與抗疲勞作用之間的聯(lián)系[3]，為抗疲勞功能產(chǎn)品的開發(fā)提供依據(jù)。?；撬嶙鳛楣δ苄燥嬈返某Ｒ娕淞?，已被大量研究證實(shí)能通過提高超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活力、降低肝組織丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，減輕活性氧自由基對機(jī)體產(chǎn)生的氧化損傷，從而達(dá)到緩解疲勞的功效[4]。隨著蛋白質(zhì)工業(yè)技術(shù)的不斷發(fā)展，水解蛋白日益成為國內(nèi)外功能性食品的重要配料，其生物利用率高并含有大量可調(diào)節(jié)機(jī)體生理功能的抗氧化活性肽[5-6]，能夠有效抑制生物大分子過氧化反應(yīng)并清除體內(nèi)自由基[7]，且能提高抗氧化酶活性、緩解疲勞[8]。張玉萍等[9]研究發(fā)現(xiàn)水解大豆蛋白在增強(qiáng)大鼠耐力的同時，還能夠降低疲勞小鼠的血乳酸含量，驗(yàn)證了其具有抗疲勞活性。此外，劉晶等[10]認(rèn)為具有抗疲勞作用的抗氧化物質(zhì)之間存在協(xié)同作用，這種協(xié)同作用有利于增強(qiáng)抗疲勞功效。楊曉等[11]也發(fā)現(xiàn)大豆肽和?；撬峄旌现髮π∈蟮目蛊谛Ч麅?yōu)于大豆肽單體。

活性物質(zhì)功效的評判通常需要建立動物學(xué)模型，目前水解大豆蛋白單體與?；撬釂误w的抗氧化活性與抗疲勞活性已被大量研究證實(shí)[12-13]，由于建立動物學(xué)模型實(shí)驗(yàn)周期長、操作繁瑣、成本較高，所以該方法不適用于兩種或多種活性物質(zhì)協(xié)同作用的功能性評價的初篩。因此，本實(shí)驗(yàn)擬選取商業(yè)水解蛋白以及牛磺酸單體復(fù)配?；撬?水解大豆蛋白（taurine-hydrolyzed soybean protein composite，TSPC），通過體外抗氧化實(shí)驗(yàn)對配方進(jìn)行初期篩分，并通過大鼠運(yùn)動性疲勞模型以及相關(guān)血液生化指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證，從而更好地為抗疲勞補(bǔ)充劑協(xié)同作用的后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究提供理論依據(jù)，以期為抗疲勞類產(chǎn)品的制備及活性評價提供思路。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

SPF級SD種8 周齡雄性健康大鼠50 只（使用許可證號： SYXK（黑）2016-004），個體質(zhì)量約（220±20）g， 購自東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心，飼養(yǎng)期間給予嚙齒類動物標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料及自由飲水，飼養(yǎng)環(huán)境條件：恒定相對濕度55%、室溫（25±1）℃。

水解大豆蛋白（hydrolyzed soybean protein，HSP）、大豆分離蛋白（soy protein isolate，SPI） 山東禹王集團(tuán)有限公司；牛磺酸、鄰苯三酚 北京百靈 威科技有限公司；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH） 美國Sigma 公司；生化指標(biāo)檢測試劑盒 上海碧云天生物技術(shù)有限公司；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-2600紫外-可見分光光度計(jì) 日本島津公司；FC酶標(biāo)儀 美國賽默飛世爾科技公司；磁力攪拌器 德國IKA公司；大鼠跑臺 北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司。

1.3 方法

1.3.1 HSP的水解度測定

HSP的水解度采用三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）沉淀法進(jìn)行分析[14]，根據(jù)TCA沉淀蛋白的特性，以可溶性氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)表征水解度，將1 mg/mL HSP或SPI溶液與質(zhì)量分?jǐn)?shù)10% TCA等體積充分混合后，在6000×g條件下離心15 min，并用凱氏定氮法測定沉淀中的氮質(zhì)量?？扇苄缘|(zhì)量分?jǐn)?shù)按公式（1）計(jì)算。

式中：m0表示SPI中TCA-沉淀氮質(zhì)量/mg；m1表示HSP中TCA-沉淀氮質(zhì)量/mg；mT為SPI中的總氮質(zhì)量/mg。

1.3.2 TSPC的制備

在室溫下準(zhǔn)確稱取?；撬岷虷S P并用去離子水稀釋，控制HSP的質(zhì)量濃度為0.5 g/L，并使?；撬崤cHSP的質(zhì)量濃度比分別為1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50，以0.5 g/L HSP和0.5 g/L SPI溶液為對照組，在200 r/min下磁力攪拌20 min使樣品充分混合，最后在3000 r/min條件下均質(zhì)2 min。

1.3.3 TSPC、SPI體外抗氧化性的測定

1.3.3.1 DPPH自由基清除能力的測定

參考蔡俊等[15]的方法并稍加修改，用無水乙醇配制質(zhì)量濃度為50 μg/mL的DPPH溶液，用移液槍吸取DPPH溶液1.5 mL、TSPC或SPI 25 μL置于96 孔平板，充分 振蕩混勻后于25 ℃恒溫暗箱中孵育30 min，以無水乙醇代替DPPH溶液作為對照，測定517 nm波長處的吸光度， 按公式（2）計(jì)算DPPH自由基清除率。

1.3.3.2 超氧陰離子自由基清除能力的測定

參考馬詩文等[16]的方法，取TSPC或SPI 200 μL與5.76 mL的Tris-HCl緩沖液（50 mmol/L、pH 8.2）充分振蕩混勻，于25 ℃孵育10 min后加入40 μL鄰苯三酚（25 mmol/L），隨后每隔1 min測定320 nm波長處的吸光度，作吸光度隨時間變化的回歸方程，方程斜率即為自氧化速率（ΔA1），以蒸餾水為對空白對照（回歸方程斜率ΔA0），超氧陰離子自由基清除率按公式（3）計(jì)算。

1.3.3.3 抗脂質(zhì)過氧化能力的測定

參照吳瑕等[17]的方法并稍作修改。將1 mL TSPC或SPI、3 mL 0.02 mol/L硫代巴比妥酸溶液和17 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)7.5%三氯乙酸-鹽酸溶液充分混合并沸水浴30 min，冷卻至室溫后取樣并與20 mL氯仿混合，3000 r/min離心15 min后取上清液，測定其在532 nm波長處的吸光度（A532nm），以每升脂質(zhì)氧化樣品溶液中丙二醛的質(zhì)量表示硫代巴比妥酸反應(yīng)物（thiobarbituric acid reactive species，TBARS）值，具體按式（4）計(jì)算。

式中：V為樣品溶液的體積（1 mL）。

1.3.4 TSPC抗疲勞實(shí)驗(yàn)

1.3.4.1 運(yùn)動性疲勞大鼠模型的建立

參考陳艷華等[18]的方法，選取健康雄性SD種大鼠50 只并隨機(jī)分為5 組，設(shè)立對照組以及疲勞模型組，再根據(jù)TSPC體外抗氧化活性的差異設(shè)立牛磺酸高（A組，1∶10）、中（B組，1∶20）、低（C組，1∶30）劑量組。除正常對照組外，其余大鼠進(jìn)行持續(xù)20 min的跑臺適應(yīng)性訓(xùn)練5 d，跑臺速率由12 m/min逐漸提升至24 m/min。從第6天起，跑臺速率控制在24 m/min持續(xù)40 min，運(yùn)動負(fù)荷強(qiáng)度相當(dāng)于60%～70%的最大攝氧量，每6 d休息1 d，7 d為一個周期，約21 d后大鼠出現(xiàn)行典型運(yùn)動性疲勞行為學(xué)異常狀況，如動作遲緩、鼠毛稀疏、食欲減退等，視為造模成功，采取灌胃法給予大鼠TSPC溶液，正常組及模型組給予生理鹽水，每次灌胃3 mL/只，持續(xù)訓(xùn)練15 d直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

1.3.4.2 跑臺耐力實(shí)驗(yàn)

跑臺耐力實(shí)驗(yàn)實(shí)施胃飼的最后一天，跑臺速率控制在32 m/min，使其運(yùn)動負(fù)荷強(qiáng)度高于90%的最大攝氧量。在大鼠跑步過程中采用電刺激以保持其持續(xù)的運(yùn)動強(qiáng)度，當(dāng)大鼠不能維持跑步狀態(tài)時，允許其休息2 min，控制累計(jì) 休息時間10 min，在累計(jì)休息時間超過10 min后，連續(xù)刺激仍無法保持強(qiáng)度的狀態(tài)記為力竭，并記錄總運(yùn)動時間。

1.3.4.3 生化指標(biāo)檢測方法

最后一組跑臺耐力實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立即處死大鼠，眼球取血并將采集到的新鮮血液于4 ℃靜置1 h后，在3000 r/min 條件下分離15 min取上層血清，乳酸（lactic acid，LA）濃度、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）濃度、SOD活力、GSH-Px活力、過氧化氫酶（catalase，CAT）活力和丙二醛（malondialdehyde，MDA）濃度嚴(yán)格按照試劑盒操作說明測定，剩余血清保存于-70 ℃超低溫冰箱中備用。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

應(yīng)用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，多樣本平均值間比較采用單因素方差分析檢驗(yàn)，各組間多重比較采用最小顯著性差異（least significant difference，LSD）法，水迷宮數(shù)據(jù)采用重復(fù)設(shè)計(jì)性方差分析，P＜0.05為差異有顯著性。采用Origin 2017軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同配比對TSPC體外抗氧化活性的影響

本實(shí)驗(yàn)通過DPPH自由基清除能力、超氧自由基清除能力以及抗脂質(zhì)過氧化能力對TSPC進(jìn)行綜合評判。根據(jù)TCA法測定HSP水解度為（35.32±1.23）%，并可以發(fā)現(xiàn)HSP的體外抗氧化指標(biāo)均高于未處理的SPI。

圖 1 TSPC對DPPH自由基清除作用Fig. 1 Scavenging effect of TSPC on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical

DPPH自由基清除能力是一種被用于評判物質(zhì)是抗氧化活性的指標(biāo)，DPPH的乙醇溶液呈藍(lán)紫色，在517 nm波長處具有最大吸收峰，具有自由基清除能力的物質(zhì)所提供的電子會與DPPH結(jié)合從而使其褪色。如圖1所示，5 種配比的TSPC均具有DPPH自由基清除能力，并與?；撬嵩谌芤褐兴嫉谋壤收嚓P(guān)，SPI的DPPH自由基清除能力相對較低。當(dāng)?；撬崤cHSP質(zhì)量濃度比為1∶10時，復(fù)合體系對DPPH自由基的清除能力最大（75.8%）。

超氧陰離子自由基具有極強(qiáng)的生物毒性，清除超氧陰離子自由基的能力可用來判斷被測物的抗氧化能力，在本實(shí)驗(yàn)中鄰苯三酚自氧化形成的超氧陰離子自由基 有色產(chǎn)物的濃度與320 nm波長處的吸光度呈線性關(guān)系。如圖2所示，當(dāng)?；撬崤cHSP質(zhì)量濃度比低于1∶20時，超氧陰離子自由基清除率隨HSP比例增加呈上升趨勢；當(dāng)質(zhì)量濃度比超過1∶20后呈平穩(wěn)趨勢，質(zhì)量濃度比達(dá)到1∶20時超氧陰離子自由基清除率最大，達(dá)到71.4%。

圖 2 TSPC對超氧陰離子自由基清除作用Fig. 2 Scavenging effect of TSPC on superoxide anion radical

圖 3 TSPC抗脂質(zhì)過氧化能力Fig. 3 Anti-lipid peroxidation capacity of TSPC

抗脂質(zhì)過氧化能力可以通過TBARS法測定，其原理是脂質(zhì)氧化的重要終產(chǎn)物MDA可與硫代巴比妥酸發(fā)生顏色反應(yīng)，并在532 nm波長處具有最大吸收，吸光度越低說明抗脂質(zhì)過氧化能力越強(qiáng)。如圖3所示，SPI與水解SPI的抗脂質(zhì)過氧化能力相對較弱，隨著?；撬崤cHSP質(zhì)量濃度比增加，TBARS值逐漸降低，質(zhì)量濃度比低于1∶30時TBARS值與對照HSP組無顯著差異（P＞0.05），當(dāng)質(zhì)量濃度比超過1∶30后TBARS值顯著降低（P＜0.05），質(zhì)量濃度比達(dá)到1∶10時抗脂質(zhì)過氧化能力最強(qiáng)。

根據(jù)上述體外抗氧化指標(biāo)的綜合分析，最終選取1∶10（A組）、1∶20（B組）、1∶30（C組）3 種質(zhì)量濃度比對TSPC進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)，從耐力跑臺以及體內(nèi)生化指標(biāo)共同探究TSPC抗氧化活性與抗疲勞功能的關(guān)系。

2.2 TSPC抗疲勞實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 大鼠力竭跑臺運(yùn)動時間

運(yùn)動耐力的時間能客觀機(jī)體的疲勞程度，是評判實(shí)驗(yàn)樣本抗疲勞功效最直觀的指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，與對照組相比，模型組的運(yùn)動時間顯著縮短（P＜0.05），說明模型組出現(xiàn)了疲勞癥狀，經(jīng)過15 d胃飼后，A、B、C組的運(yùn)動時間與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P＜0.05），分別提升了61.2%、55.8%、37.4%，A組運(yùn)動時間最長，C組運(yùn)動時間最短，但A、B兩組間無顯著性差異（P＞0.05）。

表 1 TSPC對大鼠運(yùn)動時間及血清LA、BUN濃度的影響Table 1 Effect of TSPC on exercise endurance time and serum LA and BUN concentrations in rats

2.2.2 大鼠血清LA、BUN濃度

通過對血清中LA和BUN濃度可判斷大鼠在運(yùn)動后的疲勞程度及恢復(fù)狀況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。經(jīng)各劑量組飼喂后，與模型組相比，C、B、A組使大鼠體內(nèi)LA濃度分別降低了4.07%、7.94%、15.39%，C組與模型組相比不能使LA濃度顯著降低，A、B組能夠顯著降低LA濃度 （P＜0.05），且A組降低LA濃度的能力最佳，但仍與對照組具有差異。模型組的BUN濃度與對照組相比具有顯著差異（P＜0.05），與模型組相比劑量組均能顯著降低BUN濃度（P＜0.05），A組效果最佳，降低了20.79%，

綜上，表明TSPC能夠一定程度上通過減少LA積累、降低BUN濃度，達(dá)到相應(yīng)的緩解疲勞作用。

2.2.3 大鼠體內(nèi)抗氧化活性

?；撬岷虷SP都能參與機(jī)體的抗氧化生物進(jìn)程，一般可通過增強(qiáng)SOD、GSH-Px和CAT活性，減少因機(jī)體由自由基的過量堆積和清除過緩而誘發(fā)的加速衰老、癌癥等一系列疾病的可能，由于測定血液和組織中自由基水平比較困難，而檢測血液和組織中抗氧化酶則比較容易，可由此來間接反映機(jī)體內(nèi)自由基累積水平[19-23]。

表 2 TSPC對大鼠血清SOD、GSH-Px、CAT活力和MDA濃度的影響Table 2 Effect of TSPC on serum SOD, GSH-Px and CAT activity and MDA concentration in rats

SOD廣泛存在于機(jī)體細(xì)胞中，是超氧陰離子自由基的唯一底酶，主要通過催化超氧陰離子自由基產(chǎn)生歧化反應(yīng)，從而清除體內(nèi)產(chǎn)生的活性氧自由基并保護(hù)細(xì)胞膜系統(tǒng)結(jié)構(gòu)與功能的完整性[24]。由表2可知，模型組中SOD的活力顯著低于對照組（P＜0.05），C組未能對SOD的活力產(chǎn)生顯著影響（P＞0.05），A、B組的SOD活力與模型組相比差異顯著（P＜0.05），分別提高了30.23%、22.76%。

由表2可知，模型組中GSH-Px的活力顯著低于對照組（P＜0.05），與模型組相比，3 組TSPC均能夠顯著提高GSH-Px活力（P＜0.05），B、C兩組間GSH-Px活力無顯著性差異（P＞0.05），A、B兩組與對照組相比GSH-Px活力無顯著差異（P＞0.05），說明A、B兩組均能使大鼠機(jī)體內(nèi)GSH-Px活力達(dá)到正常水平，與模型組相比，A組的提高效果最為明顯，約提高了17.97%。由表2可知，CAT活力在運(yùn)動性疲勞造模后顯著降低（P＜0.05）， C組的TSPC可使CAT活力恢復(fù)至對照組水平，且A、B組能將CAT活力顯著高于對照組（P＜0.05）。

當(dāng)體內(nèi)MDA濃度超過機(jī)體代謝能力時，自由基便會誘導(dǎo)不飽和脂肪酸形成脂質(zhì)過氧化物，并導(dǎo)致細(xì)胞與組織的氧化損傷，因此MDA濃度也是一種用以評估由自由基導(dǎo)致體內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度的有效指標(biāo)[25]。由表2可知，模型組大鼠血清中MDA濃度顯著高于對照組 （P＜0.05），在飼喂TSPC后，A、B、C組均能夠使大鼠血清中MDA的濃度顯著低于模型組（P＜0.05）。

2.3 TSPC抗氧化活性與抗疲勞能力的相關(guān)性

圖 4 大鼠TSPC抗氧化活性與抗疲勞能力的相關(guān)性Fig. 4 Correlation between antioxidant activity and anti-fatigue capacity of TSPC in rats

為確立TSPC抗氧化活性與抗疲勞能力間的聯(lián)系，分別以對照組、模型組、A組、B組、C組的SOD活力為縱坐標(biāo)，耐力運(yùn)動時間為橫坐標(biāo)繪制散點(diǎn)圖。如圖4所示，通過線性回歸方程擬合計(jì)算，體內(nèi)抗氧化活性與抗疲勞能力決定系數(shù)R2為0.8205，顯著水平經(jīng)F檢驗(yàn)為0.01，證明在該運(yùn)動模型下大鼠的抗氧化活性與抗疲勞能力呈正相關(guān)。

3 討 論

疲勞是機(jī)體的一種自我保護(hù)反應(yīng)，它被描述為“機(jī)體在生理過程中不能持續(xù)維持其在特定水平上運(yùn)動強(qiáng)度的生理現(xiàn)象”[26]，“自由基理論”是對其產(chǎn)生的較為統(tǒng)一學(xué)說，其原理是機(jī)體高強(qiáng)度運(yùn)動會導(dǎo)致體內(nèi)活性氧自由基的生成和清除速率失衡，致使活性氧積累機(jī)體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，當(dāng)體內(nèi)自由基濃度升高，體內(nèi)消除自由基抗氧化酶活性提高，但所積累的自由基一旦超出酶的清除能力范圍，就會對生物膜系統(tǒng)造成氧化損傷，引發(fā)副反應(yīng)并最終導(dǎo)致運(yùn)動性疲勞的產(chǎn)生、機(jī)體工作能力下降[27]。

在體外抗氧化活性研究中所篩選3 個TSPC劑量組，其體內(nèi)抗氧化活性與體外抗氧化活性強(qiáng)弱的趨勢基本保持一致，抗氧化物酶的活性增加以及MDA含量降低直接證明了TSPC能夠通過清除自由基緩解運(yùn)動性疲勞所導(dǎo)致的氧化損傷。

在本實(shí)驗(yàn)的力竭跑臺實(shí)驗(yàn)中，大鼠在劇烈的運(yùn)動過程中，為了滿足機(jī)體能量代謝的需求，體內(nèi)無氧環(huán)境下通過糖酵解途徑供給能量并產(chǎn)生代謝產(chǎn)物L(fēng)A[28]，與此同時肝臟也會消耗部分氨基酸與蛋白質(zhì)參與能量的供給并產(chǎn)生代謝產(chǎn)物BUN[29]，它們二者均會通過血液進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)中，因而通過對二者濃度進(jìn)行分析以及力竭運(yùn)動時長的比對，能有效評判大鼠的疲勞程度以及TSPC的抗疲勞效果。結(jié)果顯示在運(yùn)動性疲勞模型下，TSPC中牛磺酸占比越高，LA、BUN濃度越低、耐力運(yùn)動時長越長，表明TSPC具有良好的抗疲勞效果，且與?；撬岢蕜┝?效應(yīng)關(guān)系。

最后本實(shí)驗(yàn)根據(jù)SOD活力與運(yùn)動時長的相關(guān)系數(shù)證實(shí)，TSPC的抗氧化活性與抗疲勞能力呈正相關(guān)，陳園園等[30]在對大豆低聚肽的研究中與得到本實(shí)驗(yàn)一致的結(jié)論。因此，可以根據(jù)體外抗氧化實(shí)驗(yàn)對多種原料復(fù)配的抗疲勞效果進(jìn)行初篩。

4 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)采用了體外抗氧化實(shí)驗(yàn)對?；撬崤cHSP的質(zhì)量濃度比進(jìn)行了篩選，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果最終選取了1∶10、1∶20、1∶303 種比例進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)，通過運(yùn)動性疲勞大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ桶l(fā)現(xiàn)各組均表現(xiàn)出一定的體內(nèi)抗氧化活性，可提高SOD、GSH-Px、CAT活力，降低MDA濃度，從而減輕過氧化損傷程度，并通過LA、BUN濃度降低以及運(yùn)動時間延長的結(jié)果驗(yàn)證了TSPC具有一定的抗疲勞能力，其中質(zhì)量濃度比為1∶10時效果最佳。最后通過計(jì)算體內(nèi)抗氧化活性與抗疲勞能力相關(guān)性，確立了TSPC體內(nèi)抗氧化活性在本實(shí)驗(yàn)中運(yùn)動性疲勞模型下與抗疲勞能力正相關(guān)，表明可以根據(jù)體外抗氧化實(shí)驗(yàn)對抗疲勞產(chǎn)品的配比進(jìn)行初篩，從而為進(jìn)一步開發(fā)以水解蛋白和牛磺酸為基礎(chǔ)原料的復(fù)合功能抗疲勞產(chǎn)品提供了理論依據(jù)。