文/黃曉玲，石麗萍，張帝開，曾秀華，周明

1 研究背景

卵巢癌是婦科第二常見和致命的惡性腫瘤[1]。在卵巢癌中，上皮性卵巢癌幾乎占90%，由于缺乏早期診斷的有效方法，常常在發(fā)現(xiàn)時已是廣泛的腫瘤浸潤、腹膜轉移，導致治療效果欠佳。Sema4D 又稱 CD100，是一個跨膜糖蛋白，Sema4D 在腫瘤引起的血管生成中扮演類似血管內皮生長因子（VEGF）的角色，血管內皮生長因子是一種蛋白質，已被作為某些癌癥治療的一部分，而Sema4D 促進血管生成的具體機制如何，是否可以作為癌癥診斷及治療的一部分，尚不明確。

血管生成擬態(tài)（VM）是Maniotis 等提出的由腫瘤細胞本身形成的類血管樣管道。VM 的存在使惡性腫瘤細胞與機體血循環(huán)直接接觸,造成腫瘤細胞的侵襲能力增大，從而耐藥性增強,最后會導致傳統(tǒng)的抗腫瘤血管生成治療難以徹底阻斷腫瘤血供,影響患者生存率。

本研究主要希望通過檢測Sema4D 及VM、MCV 在卵巢惡性腫瘤、卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織中的表達情況，并結合臨床病理因素分析其意義，探討Sema4D 在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程起怎樣的作用，其影響是否與VM 及MCV 相關，Sema4D 蛋白與VM及MCV 的表達與臨床因素間有何關系。

2 研究方法

本研究收集2014 年1 月—2019 年1 月羅湖區(qū)人民醫(yī)院經(jīng)手術和病理證實的33 例卵巢惡性上皮性腫瘤患者的腫瘤組織、38 例卵巢良性上皮性腫瘤組織。納入標準：①均經(jīng)病理學確診為卵巢上皮性腫瘤者；②初次治療及臨床病理資料保存完整者；③無其他腫瘤者；④術前未做放化療者。惡性腫瘤組患者年齡21 ～70 歲，其中＜50 歲者18 例，≥50 歲者15 例。病理分型：漿液性腺癌20 例，黏液性腺癌8 例，子宮內膜樣癌5 例。根據(jù)2014年FIGO手術病理分期對惡性腫瘤患者進行分期：Ⅰ期23例，Ⅱ期2 例，Ⅲ期6 例，Ⅳ期2 例；良性腫瘤組患者年齡19~80 歲，＜50 歲者32 例，≥50 歲者6 例，病理分型：漿液性腺瘤20 例，黏液性腺瘤18 例。所使用標本均經(jīng)患者知情并同意，研究經(jīng)羅湖區(qū)人民醫(yī)院倫理委員會批準。

通過免疫組織化學染色（法）檢測卵巢組織包括惡性腫瘤、良性腫瘤及正常卵巢組織中Sema4D 蛋白表達，由兩位經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)師，采用雙盲法在高倍視野下（400X）對免疫組織化學染色結果進行判斷，研究因子的陽性表達水平由染色強度評分和陽性細胞數(shù)百分比評分的乘積表示。染色強度為無色、淡黃色、棕黃色和棕褐色，分別取0~3 分；高倍視野下觀察到的目的因子陽性表達細胞數(shù)占總細胞數(shù)的百分比：10%取0 分、10%~50%取1 分、50%~75%取2 分、＞75%取3 分。本實驗陽性表達水平標準為：0~3 分為免疫反應陰性，＞3 分為免疫反應陽性。

對所有標本組織進行PAS 糖原染色和CD31 免疫組織化學染色雙重染色，判斷血管生成擬態(tài)。由兩位研究者，采用雙盲法判斷結果。在腫瘤組織中，CD31 染色陽性的管道樣結構為內皮血管；PAS 染色陽性但CD31 染色陰性的管道樣結構為血管生成擬態(tài)管道，其內可含有血細胞，有相關結構為陽性，未見相關結構為陰性。

微血管密度（Microvessel Density，MVD）的測定：以CD31標記血管內皮細胞計數(shù)微血管數(shù)，每一標本低倍鏡（100×）下選3 個微血管數(shù)最多的區(qū)域，在每一個區(qū)域中計數(shù)1 個高倍鏡（400×）下的微血管數(shù)，取3 個視野的均值。

3 統(tǒng)計

采用SPSS13.0 軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，采用Fisher精確檢驗或卡方檢驗及t 檢驗比較臨床病理變量與Sema4D、VM 或MVD 的相關性。用卡方檢驗分析Sema4D 與VM 之間的相關性，用t 檢驗及點雙列分析Sema4D 與MVD 之間的相關性。

4 結果

Sema4D 在良性腫瘤組及惡性腫瘤組中的表達有明顯差異，在惡性腫瘤組中有明顯表達；VM 出現(xiàn)在良性腫瘤組及惡性腫瘤組之間的差異有統(tǒng)計學意義；惡性腫瘤組的MVD 較良性腫瘤組的MVD 明顯較高，結果有統(tǒng)計學意義。（見表1）。在所有病例中分析，Sema4D 與VM 之間有相關性（見表2），考慮Sema4D 對VM 的形成有影響。Sema4D、VM 均與MVD 呈正相關關系（見表3），考慮Sema4D 有血管生成作用，符合既往研究結果，而VM陽性的病例中的MVD 較高，具體兩者相關的原因仍需進一步研究。在惡性腫瘤內分析（見表4），Sema4D、VM 及MVD 均與腫瘤分化程度有關，3 者均與年齡及、是否淋巴結轉移、腫瘤分期之間均無明顯關系。

表1 良性腫瘤+惡性腫瘤

表2 良性腫瘤+惡性腫瘤

表3 良性腫瘤+惡性腫瘤

表4 惡性腫瘤組

5 討論

Chen 等的研究提示Sema4D 可能是早期準確預測EOC 預后不良的可靠工具，對促進EOC 微環(huán)境中腫瘤的擴散和轉移具有重要作用[2-3]。VM 是惡性腫瘤中一種特殊的血管形態(tài)，由高度侵襲性的腫瘤細胞構成。這種腫瘤細胞介導的血供模式與癌癥患者預后不良密切相關?？梢猿醪秸J為，Sema4D 的促進腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用可能與VM 相關，其具體機制有待進一步研究證實。結合既往研究，對于VM 陽性病例，可能存在對抗血管生成不敏感或療效不佳情況，具體情況如何有待進一步研究分析證實。本研究同時檢測了腫瘤中的微血管數(shù)，提示Sema4D 與MVD 呈正相關關系，與既往結果相似。然而有趣的是，VM 與MVD 也呈正相關，3 者均與惡性腫瘤的分化程度有關，可見三者之間相關密切。Sema4D 可促血管生成早已證實，而Sema4D 可能同時存在有促VM 生成作用。