蔣鳳蓮 楊偉洪 黃文宇

乳腺癌是女性中最常見(jiàn)的癌癥類型,得益于目前先進(jìn)的檢查方法及治療手段,近年來(lái)死亡率已大大降低；但是,它仍然是許多國(guó)家婦女死于癌癥的第二大主要原因,僅次于肺癌。臨床發(fā)現(xiàn)癌癥和高凝狀態(tài)之間存在相關(guān)性,體現(xiàn)在腫瘤細(xì)胞的血管生成、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移性擴(kuò)散中,晚期癌癥D-二聚體水平升高,這是由于交聯(lián)纖維蛋白降解引起的；表明纖維蛋白溶解和止血的整體激活［1］。腫瘤細(xì)胞的異常增殖和遷移是腫瘤進(jìn)展期間腫瘤病理學(xué)的標(biāo)志,有關(guān)腫瘤細(xì)胞增殖活性和遷移的研究促進(jìn)了對(duì)腫瘤生物學(xué)行為的理解,并為腫瘤的診斷,治療和預(yù)后提供了臨床證據(jù)［2］,Ki-67 是位于10 號(hào)染色體上的一個(gè)基因,可以檢測(cè)到增殖細(xì)胞核基質(zhì)中的核蛋白,其功能已證明與有絲分裂有關(guān),特別是與腫瘤細(xì)胞的增殖密切相關(guān)［3］,本研究探討乳腺癌患者血漿D-二聚體水平與乳腺癌組織中 Ki-67 表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系,希望在臨床工作中對(duì)乳腺癌患者的病情與預(yù)后評(píng)估提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年10月～2019年10月50例就診于中山市博愛(ài)醫(yī)院的乳腺癌患者,均為女性且臨床資料完整,年齡30～78 歲,平均年齡(50.35± 12.86)歲,所有患者均依據(jù)臨床、病理檢查結(jié)果進(jìn)行確診。收集所有患者臨床資料,包括：絕經(jīng)狀態(tài)、年齡、TNM、T,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,組織學(xué)分級(jí)、Ki-67 表達(dá)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并存在有其他惡性腫瘤疾??；②在3 個(gè)月 內(nèi)有改變了凝血因子情況,例如華法林治療,血栓發(fā)作,凝血障礙,肝病,妊娠,重大創(chuàng)傷,嚴(yán)重感染；③在 近3 個(gè)月內(nèi)進(jìn)行了手術(shù)。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 D-二聚體檢測(cè)方法 所有研究對(duì)象抽取靜脈血3 ml 放于抗凝管中,檢測(cè)血漿D-二聚體水平,血漿D-二聚體水平正常參考值為＜0.5 mg/L。

1.2.2 Ki-67 檢測(cè)方法 將乳腺癌標(biāo)本在10%福爾馬林中固定48 h,石蠟包埋,并使用Ki-67 抗體切成4 μm薄片用于SP 免疫組化法(IHC)染色,磷酸鹽緩沖鹽水用作陰性對(duì)照。在光學(xué)顯微鏡下分析Ki-67 染色,基于腫瘤細(xì)胞的染色程度和染色反應(yīng)的強(qiáng)度來(lái)評(píng)估IHC染色結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 血漿D-二聚體水平與臨床病理特征的關(guān)系 比較不同絕經(jīng)狀態(tài)、TNM、T、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)、Ki-67 表達(dá)患者的血漿D-二聚體水平。

1.3.2 Ki-67 表達(dá)情況與臨床病理特征的相關(guān)性 比較不同絕經(jīng)狀態(tài)、TNM、T、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)患者Ki-67 表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性。

1.3.3 判定標(biāo)準(zhǔn) 按切片中細(xì)胞有無(wú)黃棕色區(qū)域判定為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn),Ki-67 的細(xì)胞染色陽(yáng)性表達(dá)率≥14%視為 Ki-67 高表達(dá),低于此標(biāo)準(zhǔn)視為低表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,多組間比較采用單因素方差分析,兩組間比較采用t 檢驗(yàn)；Ki-67 與臨床特征間的相關(guān)性應(yīng)用Spearman 相關(guān)分析。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌患者中血漿D-二聚體水平與臨床病理特征的關(guān)系 絕經(jīng)前后患者的血漿D-二聚體水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；患者TNM 越高血漿D-二聚體水平越高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；患者T越高D-二聚體水平越高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血漿D-二聚體水平高于無(wú)轉(zhuǎn)移患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；患者組織學(xué)分級(jí)越高D-二聚體水平越高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；Ki-67 高表達(dá)患者D-二聚體水平高于低表達(dá)患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 乳腺癌患者組織中Ki-67 表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析 50 例患者中Ki-67 低表達(dá)23 例,高表達(dá)27 例,經(jīng)Spearman 相關(guān)分析顯示,乳腺癌組織中Ki-67 表達(dá)情況與患者絕經(jīng)狀態(tài)無(wú)相關(guān)性(r=0.171,P＜0.05),與TNM、T、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)呈正相關(guān)(r=0.364、0.411、0.395、0.556,P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 50 例乳腺癌患者血漿D-二聚體水平、Ki-67 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(,n)

表1 50 例乳腺癌患者血漿D-二聚體水平、Ki-67 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(,n)

注：不同絕經(jīng)狀態(tài)、TNM、T、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)、Ki-67 患者的血漿D-二聚體水平比較,P＜0.05

3 討論

血漿D-二聚體是通過(guò)血纖蛋白溶酶降解血纖蛋白而產(chǎn)生的,其水平隨著血纖蛋白溶解的增強(qiáng)而增加,在許多臨床情況下,例如吸煙、感染、懷孕、老年、外傷、腫瘤等,血漿D-二聚體水平升高［4］,D-二聚體升高可能由癌癥中的組織因子(TF)表達(dá)介導(dǎo)［5］,TF 表達(dá)增加會(huì)誘導(dǎo)過(guò)量的纖維蛋白形成,并導(dǎo)致靜脈血栓栓塞癥(VTE)和癌癥患者的D-二聚體水平升高。Diao 等［6］觀察到,遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的胃癌患者,尤其是內(nèi)臟轉(zhuǎn)移的患者血漿D-二聚體水平顯著升高。實(shí)際上,其建議D-二聚體是胃癌患者TNM 的有前途的預(yù)測(cè)指標(biāo)。Lee等［7］報(bào)道,大腸癌患者血漿D-二聚體和纖維蛋白原降解產(chǎn)物水平的升高與臨床TNM 顯著相關(guān)。此外,在大腸癌患者中,術(shù)前血漿D-二聚體水平與更大的T 和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)［8］。

Dirix 等［9］進(jìn)行的類似研究,在比利時(shí)的30 例乳腺癌患者中,發(fā)現(xiàn)D-二聚體水平與腫瘤負(fù)荷和進(jìn)展動(dòng)力學(xué)相關(guān),并得出結(jié)論,D-二聚體水平與腫瘤負(fù)荷呈正相關(guān)(P=0.001)；Révillion 等［10］在印度尼西亞對(duì)79 例 乳腺癌患者進(jìn)行的另一項(xiàng)研究得出的結(jié)論是癌癥血漿D-二聚體水平與患者的TNM 呈正相關(guān)；在印度,Dent等［11］對(duì)90 例乳腺癌患者進(jìn)行的一項(xiàng)類似研究得出的結(jié)論是,D-二聚體水平升高標(biāo)志存在淋巴管浸潤(rùn)、腫瘤轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示,乳腺癌患者隨著腫瘤TNM的升高、原發(fā)腫瘤分期越高腫瘤負(fù)荷越大、腫瘤組織學(xué)分化越差,D-二聚體的水平在升高,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者D-二聚體的水平高于無(wú)轉(zhuǎn)移者,提示隨著腫瘤的增殖、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移,D-二聚體的水平也升高,根據(jù)上述研究,本研究證實(shí)了D-二聚體水平與乳腺癌發(fā)生之間存在關(guān)系。

自從1991 年Gerdes 等［12］首次將其作為一種非組蛋白以來(lái),Ki-67 作為一種重要的腫瘤增殖標(biāo)記就受到了越來(lái)越多的關(guān)注,并且與腫瘤的發(fā)展、進(jìn)展、侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后高度相關(guān)。它僅在細(xì)胞周期的增殖和合成階段在增殖細(xì)胞核中表達(dá),可以從G1 到M 期檢測(cè)到,而在靜止G0 期則不能檢測(cè)到,它已被用作癌癥的增殖標(biāo)記［13］。鄭克文等［14］已經(jīng)揭示了在腎癌細(xì)胞中敲低Ki-67 可以顯著抑制癌細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡,表明Ki-67 可能通過(guò)影響癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和凋亡而參與腎癌的進(jìn)展。此外,已證明在膀胱癌細(xì)胞中敲除Ki-67可抑制腫瘤生長(zhǎng)［15］。本研究結(jié)果表明,乳腺癌組織Ki-67 表達(dá)水平與癌癥TNM 呈正相關(guān)。此外,Ki-67表達(dá)水平與T 和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),同時(shí)Ki-67 與腫瘤組織學(xué)分化之間也發(fā)現(xiàn)了顯著的關(guān)系,因?yàn)榉旨?jí)更高的腫瘤具有更高水平的細(xì)胞增殖,因此比其他分級(jí)的腫瘤更具侵襲性,表明Ki-67 可能影響乳腺癌細(xì)胞的惡性程度,可能Ki-67 高表達(dá)影響癌細(xì)胞的增殖和遷移,可見(jiàn)Ki-67 高表達(dá)在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中很重要。

腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程涉及多種腫瘤-宿主相互作用［16］,為了生存,轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞必須離開(kāi)原發(fā)性腫瘤,遷移到淋巴系統(tǒng)中,在轉(zhuǎn)移部位建立新的血供。纖維蛋白重塑參與大部分轉(zhuǎn)移步驟,在惡性疾病中纖維蛋白溶解活性上調(diào),而在轉(zhuǎn)移性疾病中纖維蛋白溶解活性升高。纖維蛋白被纖溶酶原激活劑系統(tǒng)降解為D-二聚體,這是一種酶促級(jí)聯(lián)反應(yīng),對(duì)于降解侵入淋巴管腔所需的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白至關(guān)重要。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中升高的D-二聚體可能反映了在存在淋巴管浸潤(rùn)的情況下系統(tǒng)性或腫瘤性凝血激活和纖維蛋白溶解。本研究中,Ki-67 高表達(dá)患者D-二聚體水平高于低表達(dá)者,兩者存在相關(guān)性,本研究的結(jié)果與以上發(fā)現(xiàn)得到了證實(shí),這表明Ki-67 可能通過(guò)影響癌細(xì)胞的增殖和遷移而參與了乳腺癌的發(fā)展,而腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中由于交聯(lián)纖維蛋白降解引起的D-二聚體水平升高。

綜上所述,D-二聚體水平升高與TNM、T、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)、Ki-67 表達(dá)相關(guān),Ki-67 表達(dá)與TNM、T、淋巴結(jié)相關(guān),D-二聚體水平與Ki-67 表達(dá)相關(guān),臨床工作中監(jiān)測(cè)乳腺 D-二聚體和Ki-67 表達(dá)有助于對(duì)患者病情與預(yù)后的評(píng)估。