黃 璨，楊 莉，劉奠忠

西南醫(yī)科大學口頜面修復重建和再生實驗室/西南醫(yī)科大學附屬口腔醫(yī)院檢驗科,四川瀘州 646000

臨床檢驗在疾病的診斷、治療、預防中發(fā)揮越來越重要的作用，血液常規(guī)檢驗通常包括白細胞計數(WBC)、紅細胞計數(RBC)、血小板計數(PLT)及形態(tài)等相關參數分析，是醫(yī)生診斷疾病的常用輔助檢查手段之一[1-2]。隨著血細胞計數自動化程度不斷提高，不僅為臨床提供了更可靠的指標，同時也大大提高了工作效率。為保證檢驗結果的準確度、可靠性、真實性，每日室內質控是必不可少的[3]。《醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則CNAS-CL02》要求“實驗室應設計質量控制程序以驗證達到預期的結果質量”，“同樣的檢驗項目應用不同程序或設備，應有確切機制以驗證在整個臨床適合區(qū)間內檢驗結果的可比性”，是指通過開展室內質控，建立完善的測評體系和方法，保障醫(yī)療質量安全。Sysmex XS-500i 全自動五分類血液分析儀具有全血細胞計數(CBC)和全血細胞計數及分類(CBC+DIFF)兩種檢測模式，進行血細胞五分類時需配套試劑Sysmex MK-CELLPACK血細胞分析用稀釋液、SYS-4DS血細胞分類染色液、SYS-SLS血細胞分析用溶血劑和SYS-4DL血細胞分析用溶血劑。由于CBC+DIFF模式下對白細胞五分類所使用的染液價格比較昂貴，對于每日室內質控而言成本較高，因而考慮僅在CBC單純計數模式下進行室內質控能否取代CBC+DIFF分類計數模式。參照中華人民共和國衛(wèi)生部衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T 406-2012《臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質量要求》(以下簡稱《要求》)[4]，本課題采用質控品對以上兩種模式下的全血細胞計數結果進行差異性分析，驗證用CBC模式代替CBC+DIFF模式進行室內質控的可靠性，選擇既能滿足本實驗室質控要求，又可以降低檢測成本的室內質控方法。

1 資料與方法

1.1儀器與試劑 Sysmex XS-500i全自動五分類血液分析儀、血液混勻器、Sysmex MK-CELLPACK血細胞分析用稀釋液、SYS-4DS血細胞分類染色液、SYS-SLS血細胞分析用溶血劑、SYS-4DL血細胞分析用溶血劑、邁克生物血液學質控品。

1.2方法

1.2.1試驗準備 按廠家使用說明對Sysmex XS-500i全自動五分類血液分析儀進行日常維護、保養(yǎng)，確保儀器處于良好狀態(tài)。每日開機后，待儀器自檢完畢后，患者標本檢測前，用兩種不同的計數模式進行質控品檢測。每日自2～8 ℃冰箱中拿出質控品，室溫放置10～15 min后，再置于血液混勻器上，混勻8～10 min后檢測。

1.2.2分組 在CBC和CBC+DIFF模式下進行WBC、RBC、PLT和血紅蛋白(Hb)水平計算，檢測3次，取平均值。連續(xù)檢測20 d(同批號質控品)。

1.2.3試驗后質控品處理 血液質控品檢測完畢后，用柔軟的布或紙擦拭試管口和蓋子上殘留的液體，減少對質控品質量的影響，盡快置于2～8 ℃冰箱內。

2 結 果

2.1WBC檢測結果 CBC模式和CBC+DIFF模式下WBC檢測結果見圖1。CBC模式WBC為(7.93±0.08)×109/L，CBC+DIFF模式WBC為(8.15±0.12)×109/L，兩種模式WBC檢測結果比較，差異有統(tǒng)計學意義(t=-13.209，P<0.05)，相對差異為(2.70±0.90)%<5%，符合行業(yè)標準，具有可比性。

圖1 CBC模式和CBC+DIFF模式下WBC檢測結果比較

2.2RBC檢測結果 CBC模式和CBC+DIFF模式下RBC檢測結果見圖2。CBC模式RBC為(5.51±0.08)×1012/L，CBC+DIFF模式RBC為(5.53±0.07)×1012/L，兩種模式RBC檢測結果比較，差異無統(tǒng)計學意義(t=-1.377，P>0.05)，相對差異為(1.10±0.50)%<2%，符合行業(yè)標準，具有可比性。

圖2 CBC模式和CBC+DIFF模式下RBC檢測結果比較

2.3PLT檢測結果 CBC模式和CBC+DIFF模式下PLT檢測結果見圖3。CBC模式PLT為(125.85±6.53)×109/L，CBC+DIFF模式PLT為(126.30±6.93)×109/L，兩種模式PLT檢測結果比較，差異無統(tǒng)計學意義(t=-0.374，P>0.05)，相對差異為(3.60±2.10)%<7%，符合行業(yè)標準，具有可比性。

圖3 CBC模式和CBC+DIFF模式下PLT檢測結果比較

2.4Hb水平比較 CBC模式和CBC+DIFF模式下Hb水平見圖4。CBC模式Hb水平為(112.35±1.31)g/L，CBC+DIFF模式Hb水平為(112.80±0.89)g/L，兩種模式Hb水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(t=-1.528，P>0.05)，相對差異為(1.00±0.70)%<2%，符合行業(yè)標準，具有可比性。

圖4 CBC模式和CBC+DIFF模式下Hb水平比較

2.5各種模式s、CV結果 本實驗室同批號質控品累計s、CV及CBC模式和CBC+DIFF模式WBC、RBC、PLT、Hb水平的s、CV結果見表1。

表1 各種模式s、CV結果比較

3 討 論

本實驗室使用的XS-500i全自動五分類血液分析儀是Sysmex公司推出的全自動五分類血液分析儀XS系列[5]，能利用光檢測器模塊應用流式細胞計數法執(zhí)行血細胞分析，主要有CBC模式和CBC+DIFF模式。在血細胞分析中，CBC指的是單純的計數模式，DIFF指的是白細胞分類模式，可將白細胞分成五分類(中性分葉核粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞)分別計數。Sysmex MK-CELLPACK血細胞分析用稀釋液是一種現成即可使用的稀釋液，用于在電阻抗分析和光電分析法中的血細胞分析。SYS-4DL血細胞分析用溶血劑主要用于測定血液標本中淋巴細胞、單核細胞、嗜中性粒細胞及嗜酸性粒細胞的比例，同樣在電阻檢測和光度檢測中對血液標本進行分析。SYS-SLS血細胞分析用溶血劑在檢測過程中起破壞紅細胞，檢測人體Hb的作用。SYS-4DS血細胞分類染色液價格昂貴，主要用于CBC+DIFF模式中對血液標本的淋巴細胞、單核細胞、嗜中性粒細胞及嗜酸性粒細胞進行差別染色。在抽吸標本后，一部分全血標本被SYS-4DL血細胞分析用溶血劑稀釋到1∶50，然后再被添加SYS-4DS血細胞分類染色液著色，在一段預定的相應時間后，已著色的標本被送至檢測器，進行前向散射光(FSC)和側向熒光(SFL)強度檢測，最后完成5種白細胞的計數和百分比計算。

CBC模式和CBC+DIFF模式WBC檢測結果比較，差異有統(tǒng)計學意義(t=-13.209，P<0.05)，分析其原因可能是由于兩種模式的WBC原理不同，CBC計數模式主要采用流式細胞術和光散射血細胞檢測原理[6-9]，即利用流式細胞術，單個細胞隨著流體動力聚集的鞘流液通過激光照射的檢測區(qū)時，使光束發(fā)生折射、衍射和散射，散射光由光檢測器接收后產生脈沖，脈沖的大小與被檢細胞的大小呈正比，脈沖的數量則代表被檢細胞的數量，也就是說，CBC模式主要通過細胞的大小來計數白細胞；而CBC+DIFF模式則主要采用半導體激光流式細胞計數結合核酸熒光染色原理[6-9]，即先用配套染色液對有核細胞進行染色，將染色后的標本導入鞘流式檢測系統(tǒng)，被檢細胞經半導體激光照射后產生3種信號，其中FSC信號可反映細胞體積大小；SSC信號可反映細胞核的分葉、胞漿顆粒大小、數量、分布均勻程度等信息；SFL強度信號可反映細胞內脫氧核糖核酸水平。通過檢測分析FSC、SSC和SFL 3種信號，可實現細胞種類的鑒別。簡而言之，CBC+DIFF模式主要以增加SFL強度信號來識別細胞內部結構，從而更加精確計數。從以上分析可知，通過細胞大小來計數的CBC模式與通過識別細胞內部結構來計數的CBC+DIFF模式，最終得到的WBC結果理論上有一定差異。

CBC模式和CBC+DIFF模式RBC和PLT檢測結果比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。XS-500i全自動五分類血液分析儀的紅細胞和血小板檢測在RBC/PLT通道中進行，原理為鞘流電阻抗法[10-11]，即血液標本稀釋后分配到紅細胞/血小板檢測器內，細胞通過前鞘流檢測小孔時，產生一個電阻信號，儀器將這個電阻信號轉化為脈沖信號記錄下來，脈沖的高度反映了細胞的大小，每個脈沖信號代表一個細胞，通過收集整理大量細胞的脈沖信號，最終得到紅細胞和血小板的直方圖。由此可見，無論CBC模式還是CBC+DIFF模式，均不影響RBC和PLT檢測結果，二者檢測結果是一致的。CBC模式和CBC+DIFF模式Hb水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(t=-1.528，P>0.05)。XS-500i全自動五分類血液分析儀的Hb水平檢測原理為SLS-Hb檢測法，即表面活性劑先將紅細胞溶解，釋放出Hb分子，Hb分子中的Fe2+被氧化為Fe3+，同時SLS的親水端與Fe3+結合形成穩(wěn)定的SLS-Hb有色基團，在535 nm有最大吸收峰。因此，無論CBC模式還是CBC+DIFF模式，均不會影響Hb檢測水平，二者結果是一致的。

《要求》中對同一臺血液分析儀不同模式的結果做出了可比性要求，其中規(guī)定WBC檢測結果的相對差異應小于或等于5%，RBC檢測結果的相對差異應小于或等于2%，PLT檢測結果的相對差異應小于或等于7%，Hb檢測結果的相對差異應小于或等于2%[6]?？杀刃允鞘褂貌煌臋z測程序檢測某種分析物獲得的檢測結果間的一致性，結果間的差異不超過規(guī)定的可接受標準時，可認為結果具有可比性。因此，能否用CBC模式代替CBC+DIFF模式做室內質控，關鍵在于驗證CBC模式的結果與CBC+DIFF模式的結果之間的可比性[12]。本實驗采用質控品作為標本，參照《要求》，20組數據WBC的相對差異為(2.70±0.90)%，RBC的相對差異為(1.10±0.50)%，PLT的相對差異為(3.60±2.10)%，Hb水平的相對差異為(1.00±0.70)%，均符合行業(yè)標準要求，可認為結果具有可比性，也就是說，CBC模式下的WBC、RBC、PLT和Hb檢測結果與CBC+DIFF模式是一致的。

四川省邁克科技有限責任公司生產的血液質控品的血液學參數較穩(wěn)定，批內精密度較好，2～8 ℃保存穩(wěn)定性達6個月以上[13]。CBC模式下質控品RBC、PLT和Hb檢測結果與CBC+DIFF模式無差異，WBC雖然與CBC+DIFF模式有差異，但相對差異不超過規(guī)定的可接受標準，符合《要求》。由于CBC+DIFF模式對白細胞分類所使用的是SYS-4DS血細胞分類染色液，其價格昂貴，長期使用會大大增加質控成本。加之目前無論是各大廠家的質控品所提供的靶值，還是瀘州市及省質控要求，均只要求了WBC、RBC、Hb、PLT等相關參數，未對白細胞分類做出要求。另外，室內質控品、使用方法、質控規(guī)則等是否合適取決于是否能監(jiān)測系統(tǒng)的穩(wěn)定性，如兩種模式下的s、CV、失控率及操作的便捷性等進行比較。表1為本研究CBC模式、CBC+DIFF模式及本實驗室同批號質控品累計s、CV結果，可以進行簡單的分析，認為CBC模式下質控具有可行性。當然，隨著累計標本數量增加，將更全面地討論此方案的可行性[14-15]。

因此，在本實驗室全血細胞分析儀室內質控工作中，結合實際情況，為降低室內質控成本，可考慮用CBC模式代替CBC+DIFF模式，建立適合本實驗室的個性化質控方案。