王萬良，周建設，陳美群，王金林，曾本和，王且魯，扎西拉姆

(西藏自治區(qū)農牧科學院水產科學研究所，西藏 拉薩 850000)

【研究意義】β-葡聚糖是一種具有生物活性的功能性低聚多糖，其分子式為(C6H10O5)n，廣泛存在于谷物和微生物中，由均一的D-吡喃葡萄糖單位通過β-1,3和 β-1,4鍵連接成，基于不同糖苷鍵的比例可分為水溶性和非水溶性2種[1]。近些年，國家加快水產養(yǎng)殖業(yè)改革創(chuàng)新和補齊發(fā)展短板，推動水產養(yǎng)殖業(yè)轉型升級和綠色高質量發(fā)展，倡導綠色安全水產品，逐步減少抗生素使用已成為必然趨勢。許多研究表明，β-葡聚糖具有保健功效，被廣泛應用于食品和飼料添加劑中，能夠促進動物機體生長、提高免疫能力、增強抗感染等，特別在水產經濟動物養(yǎng)殖過程中，能夠明顯提高成活率，顯著影響部分魚蝦的生長性能和生理功能[2-3]。亞東鮭(Salmontrutta)隸屬于鮭形目(Salmoniformes)、鮭科(Salmonidae)、鮭屬(Salmon)，與褐鱒系同物異名，由英國人從20世紀90年代引進到亞東縣，距今有150年歷史，已成為一個地方性品種，因其肉質細嫩，營養(yǎng)豐富而深受消費者喜愛[4]。【前人研究進展】目前，國內外學者主要開展了亞東鮭資源概況、個體繁殖力、早期發(fā)育、肌肉營養(yǎng)評價及分子生物學等相關研究[5]，有關β-葡聚糖對亞東鮭幼魚生長、腸道消化酶活性及肝臟抗氧化能力的影響，還未見報道。【本研究切入點】基于亞東鮭引進時間相對較長，長期近親繁殖導致種質資源退化現象十分突出，通過開展β-葡聚糖對其生長及生理功能等方面相關研究?！緮M解決的關鍵問題】本研究為西藏地區(qū)開展亞東鮭規(guī)?；B(yǎng)殖和產業(yè)化發(fā)展提供理論依據和參考。

1 材料與方法

1.1 試驗條件與材料

試驗材料來自西藏雅魯藏布江魚類資源繁育基地培育的亞東鮭幼魚，隨機挑選體格健壯、規(guī)格相對整齊、游泳活潑、攝食良好，共計1050尾，體質量為0.89～1.26 g，平均體質量為(1.07±0.3) g。在圓形玻璃缸(100 cm×100 cm×60 cm)中進行，采用循環(huán)水系統(tǒng)設備，控制水深約為40 cm，溶氧為6.5～8.0 mg/L，水溫為13～14 ℃，pH 7.51～8.10。

1.2 試驗設計

試驗共設計7組，參照王常安等預先配置基礎飼料[6](表1)，依次添加β-葡聚糖含量分別為0、0.1 %、0.2 %、0.5 %、1.0 %、1.5 %、2.0 %，每組再設2個平行，每個平行放養(yǎng)50尾亞東鮭幼魚，試驗總持續(xù)時間為60 d。

表1 試驗幼魚基礎飼料組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets(air-dry basis) (%)

1.3 日常管理

每天查看設備運轉及試驗用魚活動情況至少5次，早中晚各1次，夜間2次，定時測定水溫、溶氧、做好相關記錄；每天清理排泄物1次，每10 d用食鹽消毒1次。投喂人工配置基礎飼料，粗蛋白含量為45 %，在早上10∶00投喂1次，飽食后用塑料小抄網撈掉殘餌，烘干后根據初始投喂計算實際投喂量。

1.4 樣品采集

養(yǎng)殖試驗結束后，每個圓形玻璃缸中隨機撈取10尾幼魚，測量體質量、迅速解剖分離腸道和肝臟，依次編號并暫放于附有冰袋的泡沫箱中，采集結束后全部放入-80 ℃冰箱中保存。

1.5 指標測定

1.5.1 生長指標 用棉布干毛巾快速拭去試驗材料體表水分，體長、體質量等形態(tài)學指標分別精確至0.01 cm、0.01 g。其中，C為存活率，N0為每組存活尾數，N為每組試驗魚總尾數；HIS為肝體指數，CF為肥滿度，AWGR為平均體質量增長率，SGR為特定生長率；W、W1、W2、Wg、Wk、t分別代表試驗幼魚的體質量、t1時體質量、t2時體質量、肝質量、空殼質量、開始體長、結束體長、恢復生長天數和攝入飼料量。

相關計算公式[9]：C(%) =N0/N；HIS(%) =100×Wg/Wk；CF(%) =100×W/L23；BWGR(%) =100×(W2-W1)/W1；SGR(%) =100×(lnW2-lnW1)/(t2-t1)。

1.5.2 腸道消化酶活性 將腸道解凍后用剪刀縱向剪開，用小刀片刮下食糜及黏膜，按照質量體積比1∶9加入樣本均漿介質，在冰浴條件下機械勻漿，2500 r·min-1離心10 min，取上清液測定。胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性均采用南京建成生物工程有限公司試劑盒測定，具體操作步驟詳見試劑盒說明書。

1.6 肝臟抗氧化指標

將肝臟解凍后，準確稱量質量，按照質量體積比1︰9加入0.86 % NaCl溶液在冰浴條件下進行機械均漿，3000 r·min-1離心10 min，取上清液測定?？刂茰y定過程24 h內完成。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量均采用南京建成生物工程有限公司測定，具體操作步驟詳見試劑盒說明書。

1.7 數據處理

采集數據用Excel和Spass13.0軟件進行相關分析。

2 結果與分析

2.1 不同含量β-葡聚糖對亞東鮭幼魚存活及生長的影響

由表2可知，整個試驗過程中，不同含量β-葡聚糖對亞東鮭幼魚存活率差異不顯著(P>0.05)，均為100 %；0.5 %試驗組體質量增加最高，顯著高于其他各組(P<0.05)，0.1 %、0.2 %和1.0 % 試驗組之間差異不顯著(P>0.05)，0試驗組(對照組)增長最低；平均質量增長率0試驗組增長最慢，與2.0 %試驗組差異不顯著(P>0.05)，顯著低于其他各組(P<0.05)，0.5 %試驗組平均質量增長率最大，顯著高于其他各組(P<0.05)。1.0 %試驗組體長最大，與0.1 %、0.2 %、0.5 % 和1.5 % 試驗組之間差異不顯著(P>0.05)，顯著高于其他各組(P<0.05)。特定生長率依次呈現先增大后減小的變化趨勢，0試驗組最小，顯著低于其他各組(P<0.05)；0.5 %試驗組最大，顯著高于其他各組(P<0.05)。肝體指數依次遞減，0試驗組最大，與0.1 %、0.2 %和0.5 %試驗組之間差異不顯著(P>0.05)，但顯著高于其他各組(P<0.05)。肥滿度0.1 %、0.2 %、0.5 %和1.0 %試驗組之間差異不顯著(P>0.05)，顯著高于其他各組(P<0.05)，0試驗組最小。

表2 β-葡聚糖對亞東鮭幼魚存活和生長的影響Table 2 Effect of β-glucan on the survival and growth of young Salmon trutta

2.2 不同含量β-葡聚糖對亞東鮭幼魚腸道消化酶的影響

由圖1～3可知，亞東鮭幼魚腸道胰蛋白酶活性、脂肪酶活性、淀粉酶活性均呈現先遞增后降低的變化趨勢。其中胰蛋白酶活性0.5 % 試驗組最大，與0.2 % 試驗組差異不顯著，顯著高于其他各組，0試驗組最小，與1.5 % 和2.0 %試驗組差異不顯著，顯著低于其他各組。脂肪酶活性0試驗組最低，顯著低于其他各組；0.5 % 試驗組最大，與0.2 %、1.0 %試驗組差異不顯著，顯著高于其他各組。淀粉酶活性2.0 % 試驗組最小，顯著低于其他各組；0試驗組與1.5 %試驗組之間差異不顯著，顯著低于0.2 %、0.5 % 和1.0 % 試驗組。

2.3 不同含量β-葡聚糖對亞東鮭幼魚肝臟抗氧化性的影響

由表3可知，飼料中添加不同含量β-葡聚糖，對GSH含量及GSH-Px和SOD均具有顯著性影響，而對MDA、CAT活性差異不顯著。其中MDA含量依次呈現遞減變化，0試驗組最大，各試驗組之間差異不顯著；CAT活性各試驗組之間差異不顯著；GSH含量0.5 %試驗組最大，與0.1 % 和0.2 % 試驗組差異不顯著，顯著高于其他各組；GSH-Px活性0.5 %試驗組最高，顯著高于其他各組，0試驗組最低；SOD活性0試驗組最低，與0.1 %、1.5 %和2.0 %試驗組之間差異不顯著，顯著低于其他各組，1.0 %試驗組最高，顯著高于其他各組。

表3 β-葡聚糖對亞東鮭幼魚肝臟抗氧化能力的影響Table 3 Effects of dietary β-glucan levels on hepatic antioxidant function of juvenile Salmon trutta

3 討 論

3.1 飼料添加不同含量β-葡聚糖對亞東鮭幼魚存活與生長影響

目前研究表明，在飼料中添加適量β-葡聚糖水平，能夠明顯提高水產動物水產動物養(yǎng)殖成活率，且表現出促進生長作用。本次試驗結果表明，β-葡聚糖對亞東幼魚存活率無差異，與許國煥等[7]試驗β-葡聚糖對彭澤鯽(Carassiusauratus)存活率結果一致，可能原因本次試驗每10 d進行1次消毒，減少病害發(fā)生，從而提高其存活率。

在配合飼料中添加0.1 %、0.15 %、0.20 %、0.25 %不同比例的β-葡聚糖，對錦鯉(Cyprinuscarpiovar)促生長作用越來越明顯[8]；同樣β-葡聚糖對齊口裂腹魚(Schizothoraxprenanti)[9]和羅非魚(Oreochromsmossambcus)[3]均具有改善其生長性能。本次試驗結果表明，添加不同含量的β-葡聚糖，均對亞東鮭幼魚有促生長作用，這與上述研究結果一致，但添加量在0.5 %時，生長速度最快，以此推測β-葡聚糖對亞東鮭幼魚生長性能的影響亦可能與添加劑量相關。但也有一些報道表明β-葡聚糖對水產動物無促生長作用，如王永宏等[10]采用連續(xù)投喂和間接投喂2種方式，β-葡聚糖均能夠顯著提高暗紋東方鲀幼魚(Takifuguobscurus)成活率，但對其生長沒有影響；還有一些學者報道β-葡聚糖對虹鱒(Oncorhynchusmykiss)和南美白對蝦(Penaeusvannamei)的促生長作用不明顯[11-12]；可能原因是β-葡聚糖會引起動物機體長時間處于免疫激活狀態(tài)，造成營養(yǎng)物質重分配進而對其生長性能造成了影響[13]。肝體指數和肥滿度是反映魚類生長過程中形體指標的參數。本試驗研究結果表明，隨著β-葡聚糖含量的增加，肝體指數依次減小，而肥滿度呈先增大后減小的趨勢，這與李永娟等試驗β-葡聚糖對黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)生長性能肝體指數和肥滿度變化相一致[14]，可能原因是β-葡聚糖可以提高亞東鮭幼魚消化酶活性，促進蛋白質轉化效率，增加營養(yǎng)物質在機體沉積，從而降低肝體指數。在本試驗中，隨著β-葡聚糖含量增加，特定增長率呈先遞增后減小的趨勢，這與譚志彪使用β-葡聚糖對奧尼羅非魚研究結果相一致[15]，可能原因是亞東鮭幼魚吸收β-葡聚糖之后可以提供能量，從而起到節(jié)約蛋白質用于促進生長。

3.2 飼料添加不同含量β-葡聚糖對亞東鮭幼魚腸道消化酶活性影響

魚類的消化系統(tǒng)主要由口咽腔、肝臟、食道和腸等部分組成，相應器官的消化腺通過分泌消化酶，將食物分解成可以被吸收利用的小分子物質，從而維持魚體生命、生長及繁殖等所需的能量和營養(yǎng)[16]。腸道是魚類消化系統(tǒng)中最長的區(qū)段，也是最重要的消化器官，其腸粘膜杯狀細胞能夠分泌粘液和消化酶，具有潤滑和消化的功能[17-18]。譚志彪[15]試驗結果表明，飼料中添加一定含量β-葡聚糖對奧尼羅非魚腸道蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶均有顯著性提高，且1.0 % 添加組效果最好；在本試驗中，隨著β-葡聚糖添加不斷增加，亞東鮭幼魚腸道胰蛋白酶活性、脂肪酶活性、淀粉酶活性均呈現先遞增后降低的變化趨勢，這與上述研究結果相一致，說明飼料中添加適量β-葡聚糖可以提高亞東鮭幼魚腸道消化酶活性，從而增強其消化能力。

3.3 飼料添加不同含量β-葡聚糖對亞東鮭幼魚肝臟抗氧化能力的影響

肝臟在魚類整個新陳代謝過程中扮演著極其重要角色，是最大的消化腺，主要負責魚體消化吸收、物質代謝、解毒和防御功能[19]。一般而言，機體細胞在維持正常生命過程中均產生氧化自由基，MDA具有很強的生物毒性，如果過量將對細胞氧化造成損傷，SOD、GSH-Px和CAT是魚體主要的酶促抗氧化防御系統(tǒng)，SOD可以將O2-·轉變?yōu)镠2O2，在GSH參與下，GSH-Px催化H2O2分解，從而清除自由基，達到保護機體的目的[20]。錢妤等[21]開展了生物素對團頭魴幼魚肝臟抗氧化能力的試驗，結果顯示隨著生物素含量增加，GSH含量和GSH-Px、SOD活性變化呈先遞增后降低的趨勢，說明添加適宜生物素能夠提升團頭魴抗氧化能力。本試驗結果表明，隨著β-葡聚糖不斷增加，亞東鮭幼魚肝臟MDA含量變化依次降低，和CAT活性一樣各試驗組之間差異不顯著，而GSH含量和GSH-Px、SOD活性呈先遞增后降低的變化趨勢，與上述研究結果相類似，說明基礎飼料中添加適量β-葡聚糖能夠提升亞東鮭幼魚抗氧化能力。