殷 婷，趙 彤，余青蘭，趙志剛

(青海省農(nóng)林科學(xué)院/青海大學(xué)/青海省春油菜遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/國(guó)家油菜改良中心青海分中心/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部春油菜科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站/青海省春油菜研究開(kāi)發(fā)中心/青海省春油菜工程技術(shù)研究中心，青海 西寧 810016)

【研究意義】油菜作為重要的經(jīng)濟(jì)作物和油料作物，隸屬十字花科蕓薹屬，主要包括了二倍體的白菜型油菜(Brassicarapa，AA，2n=2x=20)、異源四倍體的芥菜型油菜(B.juncea，AABB，2n=4x=36)和甘藍(lán)型油菜(B.napus，AACC，2n=4x=38)。甘藍(lán)型油菜具有抗病、抗倒、抗裂角、產(chǎn)量高、品質(zhì)好等突出特性[1]，在新中國(guó)成立后逐漸取代了之前的主栽種白菜型油菜和芥菜型油菜[2]。甘藍(lán)型油菜遺傳資源相對(duì)匱乏且自然界中遺傳變異有限，在很大程度上限制了甘藍(lán)型油菜的遺傳改良。近年來(lái)，隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步與發(fā)展，育種家們想通過(guò)遠(yuǎn)緣雜交來(lái)拓寬甘藍(lán)型油菜遺傳基礎(chǔ)，豐富其遺傳多樣性。【前人研究進(jìn)展】遠(yuǎn)緣雜交雖然豐富了遺傳資源，但也存在不親和問(wèn)題，從而導(dǎo)致了遠(yuǎn)緣雜交難以獲得雜交種。遠(yuǎn)緣雜交的親和性受環(huán)境、親本基因型等的影響[3]。隨著甘白種間雜交的廣泛應(yīng)用，其親和性的研究也受到許多關(guān)注。趙彩霞等[4]對(duì)青藏高原白菜型油菜和甘藍(lán)型油菜雜交親和性研究結(jié)果表明：甘白雜交F1植株表型偏母本且自交親和，不同雜交方式雜親和性從大到小依次為白菜型油菜品種間雜交、(甘藍(lán)型油菜×白菜型油菜)、(白菜型油菜×甘藍(lán)型油菜)，自交親和性從大到小依次為甘藍(lán)型油菜、F1(甘藍(lán)型油菜×白菜型油菜)、F1(白菜型油菜×甘藍(lán)型油菜)、白菜型油菜，之后何麗[1]和趙艷寧等[5]對(duì)甘藍(lán)型與白菜型冬油菜雜交親和性分析時(shí)也表現(xiàn)相同的規(guī)律。因此，甘白雜交時(shí)以甘藍(lán)型為母本可提高雜交親和性，同時(shí)通過(guò)甘白雜交對(duì)改良甘藍(lán)型油菜和白菜型自交親和性研究具有積極的意義。由于遠(yuǎn)緣雜交種集合了雙親的染色體，一般其表型介于雙親之間，個(gè)別性狀偏向于某一親本且雄性不育。何鳳仙等[6]發(fā)現(xiàn)甘藍(lán)型油菜與薺菜屬間雜交后代外部形態(tài)偏向母本，部分有利性狀偏向父本，少數(shù)有超親性狀。在孫龍濤[7]的研究中發(fā)現(xiàn)，黑芥與白菜雜種性狀整體介于雙親之間，但個(gè)別性狀偏向于母本。遠(yuǎn)緣雜交種中出現(xiàn)一些異?，F(xiàn)象如父本染色體的消除、染色體滲入及不減數(shù)配子的結(jié)合等會(huì)產(chǎn)生偏母本或其他類(lèi)型的植株。如牛妍[8]在進(jìn)行芥菜型與白菜種間雜交時(shí)發(fā)現(xiàn)，芥菜型油菜×白菜型油菜的F1表型偏芥菜型，植株生長(zhǎng)旺盛，分枝少，花粉完全不育，而白菜型油菜×芥菜型油菜的F1植株形態(tài)介于中間型，分枝基部叢生且較多。甘藍(lán)型油菜由甘藍(lán)和白菜雜交并加倍進(jìn)化而來(lái)，其A基因組由二倍體祖先中白菜提供，在長(zhǎng)期的遺傳進(jìn)化過(guò)程中發(fā)生了很大變化，同時(shí)甘藍(lán)型油菜的A亞基因組相比C亞基因組遺傳變異更豐富，二者雜交較易獲得甘藍(lán)型品系[9-11]。因此，白菜型油菜的A基因組遺傳成分的利用對(duì)豐富甘藍(lán)型油菜遺傳變異極為有利。目前，通過(guò)甘藍(lán)型油菜和白菜型油菜雜交獲得不少優(yōu)良的新型甘藍(lán)型油菜，但缺乏對(duì)甘白雜交早期世代的細(xì)胞遺傳學(xué)分析，而且在后代處理上，傳統(tǒng)育種是采用與甘藍(lán)型油菜多次回交，這樣白菜型油菜只有少量的遺傳成分導(dǎo)入甘藍(lán)型油菜?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】本研究通過(guò)甘藍(lán)型油菜與特早熟白菜型油菜種間雜交，利用形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)手段對(duì)F1及自交或姊妹交F2、F3進(jìn)行分析，揭示甘白雜種后代染色體數(shù)目變化趨勢(shì)?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】此結(jié)果為通過(guò)甘白雜交快速獲得新型特早熟甘藍(lán)型油菜提供細(xì)胞學(xué)支撐。

1 材料與方法

1.1 供試材料

甘藍(lán)型油菜青油14號(hào)、AG 14和特早熟白菜型油菜浩油11號(hào)、門(mén)源小油菜分別于2017年9月5日和15日分批播種于青海省農(nóng)林科學(xué)院春油菜研究所溫室內(nèi)。開(kāi)花后選擇青油14號(hào)、AG 14中生長(zhǎng)健壯且無(wú)明顯病蟲(chóng)害的單株，分別與特早熟白菜型油菜門(mén)源小油菜、浩油11號(hào)進(jìn)行正反交，嚴(yán)格隔離和去除雄蕊，雜交獲得F1。套紗帳獲得F2，選擇偏甘藍(lán)型油菜的F2植株自交獲得F3。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 雜交結(jié)角率及親和指數(shù) 雜交時(shí)剝除母本的雄蕊，柱頭上涂抹父本花粉后嚴(yán)格套袋，防止串粉污染。雜交后分枝掛上記有雜交方式、授粉花朵及雜交日期的紙牌。授粉后在成熟裂角前分別收獲統(tǒng)計(jì)各分枝結(jié)角數(shù)、飽滿(mǎn)種子數(shù)，計(jì)算結(jié)角率和親和指數(shù)。

1.2.2 花粉可染率觀察 晴朗天氣，選取每株當(dāng)天新開(kāi)放的2朵花，將花粉涂抹在載玻片上，用醋酸洋紅染色，蓋上蓋玻片，濾紙吸取多余染液，顯微鏡10倍鏡下觀察每朵花的3個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)可染花粉粒占視野花粉?？倲?shù)的比率即花粉可染率。

1.2.3 有絲分裂觀察 幼嫩花蕾置于離心管內(nèi)，用冰盒取回實(shí)驗(yàn)室，解剖針挑取子房，置于8-羥基喹啉溶液中處理3～4 h，更換溶液為卡諾固定液(V無(wú)水乙醇︰V冰乙酸=3︰1)。鏡檢觀察時(shí)，固定好的子房取出，置于1 mol/L 的HCl溶液，在60 ℃恒溫水浴鍋中水解6～8 min，蒸餾水沖洗后在載玻片上搗碎，滴上卡寶品紅后蓋上蓋玻片，顯微鏡下觀察并統(tǒng)計(jì)染色體數(shù)目。

1.2.4 減數(shù)分裂觀察 幼嫩花蕾置于裝好卡諾固定液的玻璃瓶中，更換固定液至花蕾褪色。鏡檢時(shí)，固定好的花蕾中剝?nèi)』ㄋ?，置? mol/L HCl溶液，在60 ℃恒溫水浴鍋中水解3 min，蒸餾水沖洗后在載玻片上搗碎，滴上卡寶品紅后蓋上蓋玻片，顯微鏡下觀察染色體行為。

2 結(jié)果與分析

2.1 甘白雜交親和性分析

以甘藍(lán)型油菜×特早熟白菜型油菜為正交，進(jìn)行正反交結(jié)實(shí)比較(表1)。正交試驗(yàn)中，青油14號(hào)×門(mén)源小油菜結(jié)角率為85.71 %，親和指數(shù)為11.36；AG 14×浩油11號(hào)結(jié)角率為67.44 %，親和指數(shù)為10.23。反交試驗(yàn)中，門(mén)源小油菜×青油14號(hào)結(jié)角率為95.38 %，親和指數(shù)為6.03；浩油11號(hào)×AG 14結(jié)角率為81.51 %，親和指數(shù)為3.66。通過(guò)對(duì)結(jié)實(shí)情況的研究發(fā)現(xiàn)4個(gè)雜交組合方式結(jié)角率在65 %以上，且正交組合親和指數(shù)皆高于反交，正反交親和性表現(xiàn)為(甘藍(lán)型油菜×特早熟白菜型油菜)>(特早熟白菜型油菜×甘藍(lán)型油菜)。

表1 甘白種間雜交親和性Table 1 Crossing-compatibility index between Brassica napus and B.rapa

2.2 甘白雜種F1形態(tài)分析

根據(jù)田間植株的形態(tài)，對(duì)甘白雜種進(jìn)行初步鑒定。田間形態(tài)調(diào)查發(fā)現(xiàn)青油14號(hào)×門(mén)源小油菜和AG 14×浩油11號(hào)的F1植株均大部分生長(zhǎng)旺盛，分枝較多，表現(xiàn)出明顯的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，個(gè)別植株苗弱、死蕾、不育等，表現(xiàn)為劣勢(shì)。雜種植株株高和花期介于雙親之間，但整體形態(tài)上偏向于母本甘藍(lán)型油菜(圖1)且花粉育性不佳。

2.3 甘白雜種F1細(xì)胞學(xué)觀察

體細(xì)胞檢測(cè)2個(gè)甘白雜交組合雜種F1植株染色體數(shù)均為2n=29，推測(cè)其基因組成為AAC(圖2-A)。青油14號(hào)×門(mén)源小油菜的F1減數(shù)分裂終變期PMCs共觀察了118個(gè)，染色體配對(duì)以二價(jià)體為主，二價(jià)體數(shù)目變化于10～14之間，出現(xiàn)多價(jià)體的PMCs為15.25 %(三價(jià)體15個(gè)，四價(jià)體2個(gè)，五價(jià)體1個(gè))；中期I的PMCs共觀察了119個(gè)，96.64 %出現(xiàn)落后染色體，數(shù)目在1～5之間(圖2-B)；后期I/II的PMCs共109個(gè)，存在落后染色體的PMCs為20.18 %(圖2-C)，出現(xiàn)染色體橋的為1.83 %，后期I 有42.20 %的PMCs以15/14方式分離，其他的PMCs以16/13、17/12和18/11等方式分離；四分體時(shí)期的PMCs共觀察了104個(gè)，以四分孢子為主，14.40 %的PMCs出現(xiàn)三分的異常分裂，還出現(xiàn)了3個(gè)五分孢子。

AG 14×浩油11號(hào)的F1減數(shù)分裂終變期PMCs共觀察了97個(gè)，染色體配對(duì)以二價(jià)體為主，二價(jià)體數(shù)目變化介于10～14之間，也有23.71 %的PMCs出現(xiàn)多價(jià)體，其中三價(jià)體21個(gè)，四價(jià)體1個(gè)，五價(jià)體1個(gè)；中期I的PMCs共103個(gè)，97.09 %出現(xiàn)落后染色體，數(shù)目在1～6之間，分別分布在赤道板兩側(cè)；后期I/II的PMCs共觀察了121個(gè)，14.88 %的PMCs出現(xiàn)落后染色體(圖2-D)，5.79 %出現(xiàn)染色體橋(圖2-E)，后期I主要呈15/14分離，占觀察細(xì)胞總數(shù)的35.54 %，其余以16/13、17/12和18/11等方式分離；四分體時(shí)期的PMCs共觀察了106個(gè)，以四分孢子為主(圖2-F)，4.72 %的PMCs出現(xiàn)三分的異常分裂，還出現(xiàn)了1個(gè)五分孢子。甘白雜種三倍體AAC減數(shù)分裂過(guò)程中，終變期染色體以單價(jià)體、二價(jià)體和多價(jià)體等形式存在及中期I出現(xiàn)染色體落后情況，導(dǎo)致染色體在后期I、后期II向兩極移動(dòng)時(shí)速度緩慢且方向不定，從而在后期I、后期II及四分體時(shí)期出現(xiàn)落后染色體、染色體橋等現(xiàn)象，這些染色體行為表明了A、C染色體組間具有一定的同源性，同時(shí)減數(shù)分裂的紊亂導(dǎo)致了F1花粉育性不佳。

2.4 F2細(xì)胞學(xué)觀察

青油14號(hào)×門(mén)源小油菜雜交F2群體體細(xì)胞觀察如表2所示：共觀察97株，染色體數(shù)目介于20～58之間。2n=20的植株有2株，形態(tài)上偏白菜型，占總數(shù)的2.06 %，2n=23～27的植株15株，形態(tài)上介于雙親之間，占總數(shù)的15.46 %，2n=29～48的植株80株，形態(tài)上偏甘藍(lán)型，占總數(shù)的82.47 %，其中5株2n=38，花粉可染率均大于80 %。

表2 青油14號(hào)×門(mén)源小油菜雜交F2群體染色體數(shù)目Table 2 No.of chromosomes with F2 between Qingyou 14×Menyuanxiaoyoucai 11

AG 14×浩油11號(hào)雜交F2群體體細(xì)胞觀察如表3所示：共觀察108株，染色體數(shù)目介于20～58之間。2n=20的植株有1株，形態(tài)上偏白菜型，占總數(shù)的0.93 %，2n=24～28的植株19株，形態(tài)上介于雙親之間，占總數(shù)的17.59 %，2n=29～58的植株88株，形態(tài)上偏甘藍(lán)型，占總數(shù)的81.48 %，其中9株2n=38，花粉可染率在64.94 %～90.27 %。

表3 AG 14×浩油11號(hào)雜交F2群體染色體數(shù)目Table 3 No.of chromosomes with F2 between spring AG×Haoyou 11

青油14號(hào)×門(mén)源小油菜和AG 14×浩油11號(hào)雜交F2群體體細(xì)胞觀察發(fā)現(xiàn)：染色體數(shù)目介于20～58之間。2n=20的植株形態(tài)上偏白菜型，2n=23～28的植株形態(tài)上介于雙親之間，2n=29～58的植株形態(tài)上偏甘藍(lán)型，其中2n=38的植株較少。F2植株形態(tài)變異廣泛，經(jīng)細(xì)胞學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)偏白菜型和中間型植株2n=20～28，在選育甘藍(lán)型油菜時(shí)可根據(jù)表型對(duì)其淘汰。

2.5 F3細(xì)胞學(xué)觀察

在青油14號(hào)×門(mén)源小油菜和AG 14×浩油11號(hào)雜交的F2群體中，分別選取偏甘藍(lán)型油菜，自交種子于2019年5月播種于試驗(yàn)田。根據(jù)葉型、株高等調(diào)查發(fā)現(xiàn)F3群體形態(tài)上均偏甘藍(lán)型。在兩個(gè)正交組合后代F3群體中，選擇到具有38條染色體的植株20和6株，分別占27.40 %和12.77 %。如表4所示，2個(gè)組合中，2n=29～30的植株F3中2n=38的比例較低甚至沒(méi)有，2n=31～34的植株后代中2n=38的比例約為0～26.67 %。總體上可以看出，F(xiàn)2植株染色體數(shù)目越高，其后代獲得2n=38的植株比例越大。2n=38的F2植株F3中2n=38的比例約為46.67 %，仍有一半以上的F3植株沒(méi)有達(dá)到38條染色體，這可能與F2中2n=38條的植株減數(shù)分裂終變期出現(xiàn)單價(jià)體和多價(jià)體、中期I及后期出現(xiàn)落后染色體和染色體橋有關(guān)。

表4 F3中染色體為38條植株Table 4 Somatic cell with 38 chromosomes of F3 plants

2.6 甘白雜交后代花期

高等植物開(kāi)花這一現(xiàn)象是植株由營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)轉(zhuǎn)為生殖生長(zhǎng)的重大轉(zhuǎn)變過(guò)程。植株開(kāi)花時(shí)間的早晚對(duì)其成熟期、產(chǎn)量、品質(zhì)等有著一定的影響。油菜適宜的開(kāi)花時(shí)間是保證高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的前提條件[14]。對(duì)各雜交后代的開(kāi)花時(shí)間情況統(tǒng)計(jì)分析(表5)，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)正交組合F1花期均介于雙親之間。青油14號(hào)×門(mén)源小油菜的F2偏白菜型植株中80.00 %的開(kāi)花期比甘藍(lán)型親本早7 d，中間型的為30.00 %，偏甘藍(lán)型的僅28.85 %，F(xiàn)3群體均為偏甘藍(lán)型，開(kāi)花期比親本青油14號(hào)早7 d的占19.77 %；AG 14×浩油11號(hào)的F2偏白菜型植株中66.67 %的開(kāi)花期比甘藍(lán)型親本早7 d，中間型的為31.43 %，偏甘藍(lán)型的僅28.13 %，F(xiàn)3群體均為偏甘藍(lán)型，開(kāi)花期比親本青油14號(hào)早7d的占8.16 %。由此可知：在甘藍(lán)型油菜與特早熟白菜型油菜雜交后代中，F(xiàn)1植株花期介于雙親之間，F(xiàn)2群體中偏白菜型植株大都開(kāi)花較早，而中間型、偏甘藍(lán)型植株中早花植株的概率在依次降低，且F2偏甘藍(lán)型油菜后代F3中早花植株更少，不足20.00 %。

表5 甘白雜交后代開(kāi)花期Table 5 Flowering period of hybridization pogenies between B.napus and B.rapa

3 討 論

3.1 甘白雜交正反交組合的差異

遠(yuǎn)緣雜交由于親本間基因型差異較大，普遍存在生殖隔離的障礙，具體分為受精不親和、受精后胚胎發(fā)育障礙、雜種夭亡或不育等情況。蕓薹屬6個(gè)種間均可相互雜交，實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)的相互轉(zhuǎn)移，但不同的物種之間雜交，其交配能力存在一定差異。前人研究表明甘藍(lán)型油菜與白菜型種間雜交容易，通過(guò)常規(guī)種間雜交即可得到雜交種，后代中也易得到優(yōu)良的甘藍(lán)型油菜[9]。本試驗(yàn)通過(guò)3個(gè)甘藍(lán)型油菜與2個(gè)特早熟白菜型油菜正反交，對(duì)雜交親和性進(jìn)行分析。從結(jié)實(shí)情況看，不同的甘藍(lán)型油菜與特早熟白菜型油菜通過(guò)有性雜交，結(jié)角率達(dá)65 %以上，但雙親相同的正反交親和性存在一定的差異，這說(shuō)明甘藍(lán)型油菜與特早熟白菜型油菜種間雜交親和性受細(xì)胞質(zhì)背景的影響。以特早熟白菜型油菜為母本的反交組合角果脫粒發(fā)現(xiàn)存在許多癟籽，飽滿(mǎn)籽粒少，初步推斷特早熟白菜型油菜與甘藍(lán)型油菜雜交存在著受精后胚胎發(fā)育的障礙。以甘藍(lán)型油菜為母本的正交組合角果中多為飽滿(mǎn)籽粒，較反交組合更易獲得雜交種，親和指數(shù)高，這與前人[15-17]的研究結(jié)果中以染色體數(shù)目多的親本為母本獲得真雜種概率高的結(jié)論相一致。

3.2 甘白雜交后代細(xì)胞學(xué)分析

甘白雜種F1形態(tài)均偏向于母本。有研究結(jié)果表明外源基因在后代這一新的遺傳背景不一定能在形態(tài)上得以體現(xiàn)，孫萬(wàn)倉(cāng)等[18]]認(rèn)為植株偏母本是異源父本花粉誘導(dǎo)孤雌生殖所致。因此，對(duì)雜種真假的鑒定還需結(jié)合細(xì)胞、分子等方法進(jìn)一步鑒定。甘白雜種F1花粉育性差，自交難以結(jié)實(shí)，可能是雜種含有2個(gè)十分相似但又有分化的蕓薹屬A基因組以及甘藍(lán)型油菜的C基因組，在減數(shù)分裂過(guò)程中遺傳物質(zhì)發(fā)生重組，產(chǎn)生多種類(lèi)型的配子所致，與Choudhary[19]研究觀察B.juneca×toria、B.juncea×yellow sarson雜種F1花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂形成不減數(shù)配子，導(dǎo)致花粉活力分別為16.5 %和20.4 %，花粉育性不佳相似。本研究甘藍(lán)型油菜與特早熟白菜型油菜雜種F1體細(xì)胞具有預(yù)期的染色體數(shù)(2n=29)，這與陳樹(shù)忠等[20]對(duì)羽衣甘藍(lán)和甘藍(lán)型油菜雜種體細(xì)胞染色體數(shù)為雙親配子染色體數(shù)之和相一致。雜種F1染色體來(lái)源于甘藍(lán)型油菜和特早熟白菜型油菜兩個(gè)不同的物種，由于一些染色體同源性較低，在減數(shù)分裂中期配對(duì)不正常，形成單價(jià)體，而另一些染色體具有部分同源性，在減數(shù)分裂中進(jìn)行同源配對(duì)，形成多價(jià)體，減數(shù)分裂后期單價(jià)體隨機(jī)移向細(xì)胞兩極，部分由于移動(dòng)緩慢且方向不定而落后在赤道板上，出現(xiàn)落后染色體，這與Olsson[21]、牛妍[8]細(xì)胞學(xué)觀察雜種染色體配對(duì)時(shí)存在單價(jià)體、二價(jià)體、三價(jià)體等相一致。減數(shù)分裂過(guò)程中單價(jià)體、多價(jià)體、落后染色體、染色體橋等的出現(xiàn)，說(shuō)明存在A基因組間的同源配對(duì)、A基因組和C基因組以及C基因組內(nèi)部部分同源配對(duì)情況，也伴隨染色體的交換、缺失、易位、插入等的發(fā)生，表明甘藍(lán)型油菜與特早熟白菜型油菜種間雜交實(shí)現(xiàn)了物種間遺傳物質(zhì)的相互滲透和重新組合，是獲得新變異后代的理論基礎(chǔ)。

由于甘白雜種F1染色體數(shù)目為雙親染色體的一半，說(shuō)明每一個(gè)親本只提供了相當(dāng)于單倍體的基因組，雙親基因組間具有較大的差異，導(dǎo)致基因組內(nèi)部分同源配對(duì)及基因組間部分同源配對(duì)，減數(shù)分裂終變期形成多價(jià)體，同源性較低的染色體形成單價(jià)體，從而出現(xiàn)落后染色體、染色體橋等異?，F(xiàn)象，形成多種類(lèi)型的配子。后代F2通過(guò)體細(xì)胞觀察發(fā)現(xiàn)染色體數(shù)目存在明顯差異，將表型與細(xì)胞學(xué)結(jié)合，表型偏白菜型油菜植株2n=20，中間型植株2n=23～28，偏甘藍(lán)型油菜植株2n=29～58。與牛妍[8]的研究中芥白雜交后代2n=20的植株偏白菜型，2n=21～25的植株中間型，2n=26～28的植株偏芥菜型，染色體數(shù)目越多，形態(tài)越偏染色體數(shù)目多的親本這一結(jié)果一致。偏白菜型和中間型植株2n=20～28，在選育新型甘藍(lán)型油菜時(shí)，可以此初步給予淘汰。F2中2n=38的植株較少，且自交難以結(jié)實(shí)。F2群體偏甘藍(lán)型植株自交后代F3全為偏甘藍(lán)型，細(xì)胞學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)2中2n=35～38的植株自交后代中2n=38的植株達(dá)25 %以上且減數(shù)分裂單價(jià)體、三價(jià)體明顯減少，但F2中2n=38的植株自交后代2n=38的比例并非100 %，可能是由于雜交后代中異源染色體的存在，使減數(shù)分裂過(guò)程中染色體配對(duì)時(shí)存在單價(jià)體、三價(jià)體以及后期分離出現(xiàn)落后染色體、染色體橋等，形成的配子染色體數(shù)目及組成存在差異，導(dǎo)致后代廣泛分離。為減少甘白雜交選育甘藍(lán)型油菜的中因群體過(guò)大造成的繁重工作量，可根據(jù)表型在田間初步淘汰偏白菜型和中間型的F2植株，對(duì)F2群體偏甘藍(lán)型植株細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，選出2n≥35的植株自交選育新型甘藍(lán)型油菜。

3.3 甘白雜交后代早花材料的獲得

我國(guó)白菜型油菜品種資源豐富，栽培馴化歷史長(zhǎng)，分布廣，具有耐瘠、抗旱、早熟、分枝多且分枝低等優(yōu)良特性，且遺傳資源豐富，是青海高海拔地區(qū)唯一能正常成熟的油菜栽培類(lèi)型[8]。然而，白菜型油菜相比甘藍(lán)型油菜產(chǎn)量低、雜種優(yōu)勢(shì)利用困難。甘藍(lán)型油菜原產(chǎn)于歐洲，僅有400多年的歷史，具有抗病、產(chǎn)量高、品質(zhì)好、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，在新中國(guó)成立后逐漸取代了之前的主栽種白菜型油菜和芥菜型油菜[1]。然而，甘藍(lán)型油菜沒(méi)有野生種質(zhì)資源，種內(nèi)分化程度低，遺傳基礎(chǔ)在人為選擇過(guò)程中漸趨狹窄，遺傳資源匱乏，且原有春性甘藍(lán)型油菜資源生育期較長(zhǎng)，且在青海高海拔地區(qū)無(wú)法正常成熟，嚴(yán)重阻礙了甘藍(lán)型油菜產(chǎn)區(qū)的增產(chǎn)增收和甘藍(lán)型油菜的育種進(jìn)程。開(kāi)花時(shí)間對(duì)油菜成熟期、產(chǎn)量等有著一定的影響。甘藍(lán)型油菜在青海等高海拔地區(qū)難以正常成熟，而作為高海拔地區(qū)主栽類(lèi)型的白菜型油菜具有早熟的特點(diǎn)，但產(chǎn)量低。本研究在資源創(chuàng)新的親本選擇上，選擇了春性AG 14以及青海省農(nóng)林科學(xué)院育成的春性雙低的早熟油菜青油14號(hào)。作為供體親本的特早熟白菜型油菜選擇了青海高海拔地區(qū)種植較為廣泛的浩油11號(hào)和門(mén)源小油菜。通過(guò)甘藍(lán)型油菜與特早熟白菜型油菜種間雜交，其后代F1表型偏甘藍(lán)型，但花期介于雙親之間，早于甘藍(lán)型親本，晚于特早熟白菜型親本。F2植株形態(tài)發(fā)生變異，主要分為偏白菜型、中間型和偏甘藍(lán)型，且以偏甘藍(lán)型植株為主。其中早花植株多為偏白菜型，偏甘藍(lán)型且自交結(jié)實(shí)的早花植株少，鑒于甘白雜交主要目的是獲得早熟的新型甘藍(lán)型油菜，結(jié)合上述試驗(yàn)結(jié)果，偏向選擇F2中偏甘藍(lán)型的油菜植株自交獲得F3。F3群體中存在開(kāi)花較早的偏甘藍(lán)型植株，但比F2群體偏甘藍(lán)型植株中早花植株占比少，這可能與特早熟白菜型油菜遺傳物質(zhì)在后代中滲入多少有關(guān)。遠(yuǎn)緣雜交后代性狀受父母本影響的程度不對(duì)等，雖能獲得父本的某些性狀，但其后代整體更偏向于母本，且隨著世代的增加，后代群體中父本的遺傳力更加弱化[18]。本研究甘白雜交后代中，特早熟白菜型油菜早花這一性狀在后代群體中的表現(xiàn)情況再一次證明了該觀點(diǎn)。

4 結(jié) 論

本研究通過(guò)對(duì)甘白雜交早期世代細(xì)胞學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)(甘藍(lán)型油菜×特早熟白菜型油菜)較(特早熟白菜型油菜×甘藍(lán)型油菜)更易獲得雜交種，且所得雜種F1染色體為雙親配子染色體數(shù)之和，PMCs減數(shù)分裂時(shí)存在異常行為。后代F2形態(tài)變異廣泛，偏白菜型的植株2n=20，中間型植株2n=23～28，偏甘藍(lán)型植株2n=29～58，其中2n=38的植株較少。偏甘藍(lán)型的F2植株自交后代全為偏甘藍(lán)型，其中2n=35～38的植株后代中2n=38的植株占25.00 %以上?；ㄆ谡{(diào)查發(fā)現(xiàn)F1花期介于雙親之間，F(xiàn)2中早花植株的概率降低，且F3中早花植株更少，不足20.00 %。