李銳瑞，武笑天，白 彥，王 瑞，楊 玉

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，山西太谷030801）

目前，我國蛋雞養(yǎng)殖模式已經(jīng)轉(zhuǎn)向集約化的籠養(yǎng)生產(chǎn)模式，而繁殖強(qiáng)度增加和活動范圍減少等因素的變化會使得蛋雞生產(chǎn)中出現(xiàn)應(yīng)激條件，從而影響機(jī)體健康[1]。葉酸是家禽生長所必要的水溶性B族維生素，在單碳代謝中起著關(guān)鍵作用，對氨基酸和核苷酸代謝至關(guān)重要[2]。雛雞缺乏葉酸會導(dǎo)致羽化不良、貧血、采食量減少和生長緩慢。成年雞缺乏葉酸通常導(dǎo)致產(chǎn)蛋量減少和后代孵化率降低。與其他農(nóng)場牲畜相比，家禽更容易缺乏葉酸，而飼料中的葉酸量往往不能滿足家禽的營養(yǎng)需要，因此，需要額外添加葉酸。NRC（1994）建議日糧中各種家禽的葉酸添加量為0.25～1.00 mg/kg，但實際生產(chǎn)中為了獲得更高的經(jīng)濟(jì)效益，葉酸添加量遠(yuǎn)高于此標(biāo)準(zhǔn)。WHITEHEAD 等[3]研究指出，添加葉酸1.5 mg/kg可使肉雞的生長和飼料轉(zhuǎn)化效率得到優(yōu)化。葉酸作為抗氧化劑可以清除自由基[4]，從而防止細(xì)胞損傷。GOUDA 等[5]研究表明，在日糧中添加葉酸提高了肉雞總抗氧化能力和超氧化物歧化酶活性。QUAN 等[6]研究發(fā)現(xiàn)，葉酸可以有效減輕小鼠氧化應(yīng)激，F(xiàn)A 處理后過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）和超氧化物歧化酶（SOD）水平顯著上調(diào)，MDA 水平顯著降低。EBAID 等[7]研究表明，補(bǔ)充葉酸增加了大鼠體內(nèi)的抗氧化酶，降低了丙二醛的活性。CUI 等[8]研究表明，葉酸可以降低大鼠血漿中同型半胱氨酸（Hcy）的含量，增強(qiáng)抗氧化能力，減少脂質(zhì)過氧化。孟苓鳳等[9]研究表明，添加葉酸可以顯著提高鵝血清中亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）活性和顯著降低二氫葉酸還原酶（DHFR）活性。不同家禽品種和生長階段對葉酸的需求不同，而關(guān)于葉酸在京紅蛋雞中的報道較少，其最佳添加比例尚不明確。本試驗探討飼糧中添加6 種葉酸水平對蛋雞生產(chǎn)性能、血液指標(biāo)和抗氧化酶活性的影響，確定其適宜添加水平，為完善家禽飼糧配方提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗動物及材料

2018 年11 月在太谷縣興民牧業(yè)合作社選取30 周齡體況和產(chǎn)蛋率相近的京紅1 號蛋雞648 只。晶體葉酸購自河北科泰生物科技有限公司，含量為99.8%。

1.2 試驗方法

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

在飼糧中添加葉酸共設(shè)6 個水平，分別為Ⅰ組.基礎(chǔ)飼料，為對照組；Ⅱ組.添加1 mg/kg 晶體葉酸；Ⅲ組.添加3 mg/kg 晶體葉酸；Ⅳ組.添加6 mg/kg 晶體葉酸；Ⅴ組.添加12 mg/kg 晶體葉酸；Ⅵ組.添加24 mg/kg 晶體葉酸。將648 只蛋雞隨機(jī)分為6 組，每組108 只，每組6 個重復(fù)，每個重復(fù)18 只。預(yù)試期2 周，試驗期6 周?；A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平如表1 所示。預(yù)飼期所有蛋雞飼喂基礎(chǔ)日糧2 周。試驗期間蛋雞自由采食和飲水，每天準(zhǔn)確記錄采食量。每日光照16 h，保持雞舍的溫度為（20±3）℃，其他均按養(yǎng)殖場常規(guī)進(jìn)行免疫和消毒。

1.3 測定指標(biāo)與方法

1.3.1 生產(chǎn)性能測定 每日準(zhǔn)確記錄給料量、剩料量、產(chǎn)蛋數(shù)量和蛋質(zhì)量，計算產(chǎn)蛋率和料蛋比。

1.3.2 蛋品質(zhì)的測定 試驗期間，每周從各重復(fù)采集2 枚蛋，并在產(chǎn)蛋后48 h 內(nèi)完成蛋品質(zhì)的檢測。用數(shù)顯千分尺（MODEL-P-1）測定蛋殼厚度；蛋殼強(qiáng)度用ORKA 蛋殼強(qiáng)度儀（EFO-501，以色列）測定；蛋黃質(zhì)量、蛋殼質(zhì)量和蛋清質(zhì)量用電子天平測定；蛋質(zhì)量、蛋黃顏色、蛋白高度和哈夫單位用全自動蛋品分析儀（EA-01，以色列）測定。

1.3.3 血清生化指標(biāo)的測定 試驗?zāi)┓Q質(zhì)量后，每個處理隨機(jī)抽取6 只雞，翅靜脈采血10 mL，3000 r/min 離心制得血清樣品。總蛋白（TP）用考馬斯亮藍(lán)法測定；白蛋白（ALB）、高密度脂蛋白（HDL-C）用試劑盒測定（購自南京建成生物工程研究所）；亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）、二氫葉酸還原酶（DHFR）、葉酸（FA）和同型半胱氨酸（Hcy）均采用酶聯(lián)免疫法檢測。

1.3.4 血清抗氧化指標(biāo)的測定 血清總抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和超氧化物歧化酶（SOD）均用試劑盒測定，丙二醛用硫代巴比妥酸法測定其含量（MDA）[11]，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.4 數(shù)據(jù)分析

Excel 2010 和GraphPad Prism 軟件整理數(shù)據(jù)，SPSS 22.0 進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan's 法比較各組差異，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。通過對葉酸添加量建立回歸模型，尋找最適添加范圍。

2 結(jié)果與分析

2.1 葉酸添加量對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

從表2 和圖1 可以看出，日糧中添加葉酸對產(chǎn)蛋率、采食量、蛋質(zhì)量、料蛋比均無顯著性差異，但Ⅰ組試驗后產(chǎn)蛋率顯著低于試驗前（P＜0.05），Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組、V 組和Ⅵ組試驗前后產(chǎn)蛋率無顯著差異。

表2 葉酸添加量對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 葉酸添加量對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

從表3 可以看出，日糧中添加葉酸對產(chǎn)蛋雞蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋殼比率、蛋黃比率、蛋清比率、蛋白高度、蛋黃顏色和哈夫單位沒有顯著差異。

2.3 葉酸添加量對蛋雞血清指標(biāo)的影響

從表4 可以看出，除Ⅱ組外，其他試驗組葉酸含量均顯著高于Ⅰ組（P＜0.05），分別提高了6.5%、11.93%、26.2%、34.95%、26.12%，Ⅳ組、V 組和VI 組同型半胱氨酸含量顯著低于Ⅰ組（P＜0.05），分別降低了47.75%、47.83%、47.14%，TP、ALB、HDL-C含量均差異不顯著，試驗組MTHFR 含量與Ⅰ組相比顯著升高（P＜0.05），DHFR 含量與Ⅰ組相比顯著降低（P＜0.05）。

表3 葉酸添加量對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

表4 葉酸添加量對蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

2.4 葉酸添加量對蛋雞血清抗氧化酶活性的影響

由表5 可知，與對照組相比，試驗組GSH 顯著升高（P＜0.05），Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ組分別提高了4.36%、5.91%、10.37%、4.52%、3.14%，Ⅲ組、Ⅳ組、V組和Ⅵ組SOD 與對照組相比顯著升高（P＜0.05），試驗組MDA 與對照組相比顯著降低（P＜0.05），Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ組分別降低了25.50%、29.19%、33.89%、30.87%、25.84%，T-AOC 含量差異不顯著。

表5 葉酸添加量對血清抗氧化酶活性的影響

2.5 模型估測產(chǎn)蛋高峰期蛋雞對葉酸的需要量

由表6 回歸分析可知，血清中葉酸、同型半胱氨酸、亞甲基四氫葉酸還原酶、谷胱甘肽過氧化物酶和丙二醛含量均隨葉酸添加量的增加呈顯著的二次曲線變化，由此得出，日糧中葉酸的適宜添加量為3.78～6.40 mg/kg。

表6 葉酸添加量與蛋雞相關(guān)指標(biāo)的回歸模型

3 討論

3.1 飼糧中添加葉酸對蛋雞生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì)的影響

HEBERT 等[12]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加葉酸，來航蛋雞生產(chǎn)性能無明顯變化。田傳歡等[13]研究發(fā)現(xiàn)，添加3 mg/kg 的葉酸對海蘭褐蛋雞的生產(chǎn)性能無顯著的影響。JANIST 等[14-15]研究表明，在飼糧中添加葉酸對蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋黃顏色和哈夫單位等無顯著影響。本試驗添加葉酸對產(chǎn)蛋率和蛋品質(zhì)無顯著影響，這與上述研究結(jié)果一致，但在日糧中添加葉酸可以緩解蛋雞產(chǎn)蛋高峰期產(chǎn)蛋率自然下降的幅度，以6 mg/kg 最佳。

3.2 飼糧中添加葉酸對蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

血液生化指標(biāo)是檢測體內(nèi)許多營養(yǎng)物質(zhì)代謝狀態(tài)的重要且敏感的指標(biāo)。作為機(jī)體細(xì)胞重要的組成部分，TP 是由ALB 和GLB 組成的。TP 總體上反映了體內(nèi)蛋白質(zhì)的代謝情況，血清TP 含量對產(chǎn)蛋率有直接影響[16]。本試驗發(fā)現(xiàn)，血清TP 含量的增高與添加6 mg/kg 葉酸產(chǎn)蛋率變化一致，說明添加6 mg/kg 葉酸可以提高體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝，有利于緩解產(chǎn)蛋率下降的趨勢。葉酸可以輔助Hcy 轉(zhuǎn)換回蛋氨酸或轉(zhuǎn)化為半胱氨酸的過程。葉酸的缺乏會導(dǎo)致血液中Hcy 的升高。高同型半胱氨酸血癥是血漿Hcy 水平升高的綜合征，其引起的內(nèi)皮功能障礙可引發(fā)炎癥、細(xì)胞凋亡以及隨后形成的動脈粥樣硬化病變[17]。NOZARI 等[18-19]研究發(fā)現(xiàn)，葉酸可以降低Hcy 水平，并使內(nèi)皮功能得到改善。葉酸也有獨立于同型半胱氨酸的作用，如保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞免受一氧化氮合酶解偶聯(lián)，保護(hù)四氫生物蝶呤的生物活性和抑制超氧化物的形成[20]。本試驗結(jié)果表明，隨著葉酸添加量的增高，血清葉酸含量呈現(xiàn)先增后低的趨勢，同型半呈現(xiàn)先降后增的趨勢，說明飼糧中過高過低的葉酸均對雞體不利。葉酸的活性形式5-MTHF 是由葉酸通過肝臟中的一系列分子反應(yīng)生物合成的。首先，葉酸的6- 甲基蝶呤部分在二氫葉酸還原酶（DHFR）的催化下經(jīng)歷了2 次還原，第1 次還原產(chǎn)生二氫葉酸，其次在肝細(xì)胞中還原成四氫葉酸[21-22]。四氫葉酸參與單碳轉(zhuǎn)移反應(yīng)，并作為中間轉(zhuǎn)運(yùn)體在代謝中發(fā)揮重要功能[21]。本試驗表明，隨著添加水平的增加，MTHFR 活性呈現(xiàn)先增后低的趨勢，而DHFR 活性呈現(xiàn)先降后增的趨勢，說明添加高劑量的葉酸在其代謝的第一步之后轉(zhuǎn)化為二氫葉酸，二氫葉酸作為葉酸的對抗物產(chǎn)生拮抗作用，抑制了MTHFR 活性。

3.3 飼糧中添加葉酸對蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

動物機(jī)體內(nèi)部的抗氧化酶和外源攝入的抗氧化劑是動物機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)的主要組成部分，但機(jī)體代謝會產(chǎn)生大量的活性氧等氧化產(chǎn)物[23]。葉酸作為一種有效的抗氧化劑，通過降低血漿同型半胱氨酸水平，在降低氧化應(yīng)激、改善內(nèi)皮功能和防止細(xì)胞凋亡方面具有重要作用[24]?？寡趸锏? 個家族如超氧化物歧化酶和過氧化氫酶是在防止細(xì)胞損傷中起重要作用的酶[25]。此外，這些酶可以清除活性氧和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，從而保護(hù)細(xì)胞和組織免受氧化損傷[26]。KOOHPEYMA 等[27]研究表明，葉酸治療可以顯著增加Hcy 處理大鼠的谷胱甘肽水平和顯著降低丙二醛水平。HWANG 等[28]研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)充葉酸可以恢復(fù)高同型半胱氨酸血癥大鼠SOD 活性。丙二醛是脂質(zhì)過氧化的標(biāo)志物。金莉莉等[29]研究發(fā)現(xiàn)，添加葉酸可顯著降低小鼠血清中MDA 含量。本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加葉酸顯著提高GSH-Px和SOD 的活性，降低了MDA 水平，以6 mg/kg 最佳，而添加12～24 mg/kg 葉酸處理的GSH-Px 和SOD 活性卻呈下降趨勢，MDA 水平呈增高趨勢，可能因產(chǎn)生未代謝的葉酸，造成機(jī)體的氧化還原穩(wěn)態(tài)紊亂，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，飼糧中添加葉酸可以緩解產(chǎn)蛋高峰期產(chǎn)蛋率的自然下降幅度，能顯著提高血清中谷胱甘肽過氧化物酶和總超氧化物歧化酶活性，顯著降低丙二醛含量，提高抗氧化性能，以添加3.78～6.40 mg/kg 晶體葉酸為宜。