朱志強(qiáng)，宋 兵，姜太一，汪 雯，張 愚

由于HIV與HBV具有相同的傳播途徑，HIV合并HBV感染比較常見。目前HIV合并HBV感染對HIV疾病進(jìn)程的影響報道不一[1-2]，有些研究認(rèn)為合并HBV感染對HIV疾病的進(jìn)程沒有影響，有些報道認(rèn)為合并HBV感染促進(jìn)了HIV疾病的進(jìn)程。但一般報道均認(rèn)為HIV合并HBV感染對HBV疾病進(jìn)程影響較大[3]，HIV合并HBV感染的患者肝硬化和肝癌的發(fā)生率明顯增加[3]。因此了解HIV與HBV共感染的特點及尋找相應(yīng)的預(yù)防措施有重要意義。

研究發(fā)現(xiàn)HIV感染者的HBV的合并感染率明顯高于非HIV感染人群，可能是HIV和HBV具有相同的傳播途徑導(dǎo)致的。因為HIV感染急性期沒有特異的臨床表現(xiàn)，急性期感染者難以獲得，因此絕大多數(shù)都是針對HIV感染慢性期患者進(jìn)行的研究和報道[4]。本團(tuán)隊在北京市科委的支持下，從2006年開始建立了HIV感染的急性期隊列，團(tuán)隊前期對HIV感染急性期人群的研究表明， HIV感染急性期患者的HBV合并感染率明顯低于HIV感染慢性期的患者。由此推測可能隨著HIV疾病的進(jìn)展，HIV感染者的免疫力明顯下降，對HBV的免疫反應(yīng)及清除能力明顯降低。雖然很多科學(xué)家及臨床工作者均推測在HIV感染急性期對HBV的清除能力要高于HIV感染慢性期，但關(guān)于HIV感染急性期及慢性期T淋巴細(xì)胞對HBV的反應(yīng)能力的比較尚無報道。因此，本研究通過入組HIV感染急性期及慢性期合并HBV感染的患者，對比分析2種不同時期HIV感染T細(xì)胞對HBV反應(yīng)能力的差異。

1 對象與方法

1.1 對象 患者來自2006年起首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院建立的男男同性HIV感染急性期及慢性期的大隊列患者[5-7]。HIV感染急性期的定義參照Fiebig分期[5-7]，HIV感染慢性期的患者為HIV感染確診半年以上的患者。所有的患者均為HBsAg、HBeAg及HBcAb 3項陽性并能檢測到HBV DNA水平的患者。其中，HIV感染急性期合并HBV感染者10例，年齡為31（19～59）歲，HIV感染慢性期合并HBV感染者15例，年齡為32（22～60）歲。另外，選取與其年齡相匹配的健康者15例作為正常對照，年齡為32（21～55）歲。所有患者均未經(jīng)過抗病毒治療，未合并嚴(yán)重的機(jī)會性感染，無惡病質(zhì)。本研究已獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者及家屬簽署知情同意書。

1.2 HIV RNA檢測 HIV載量檢測采用羅氏cobas TaqMan病毒載量檢測系統(tǒng)進(jìn)行病毒載量檢測。

1.3 HBV DNA檢測 血清中HBV DNA的檢測利用羅氏檢測試劑盒進(jìn)行。

1.4 CD4+T細(xì)胞計數(shù)檢測 利用BD公司CD4+T細(xì)胞計數(shù)檢測試劑盒進(jìn)行檢測，通過BD FACSCalibur全自動雙激光四色流式細(xì)胞儀進(jìn)行獲取和分析。

1.5 體外刺激培養(yǎng) 1×106外周血單個核細(xì)胞在含有10%的胎牛血清的10 ml 1640培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，用1 mg/ml的HBsAg重疊肽（來自牛津大學(xué)）進(jìn)行刺激培養(yǎng)72 h后收集細(xì)胞，CD3-PerCP、 IFN-γ-PE、CD8-FITC和CD4-APC染色后進(jìn)行上機(jī)分析。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 25.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料符合正態(tài)分布，用±s表示，符合非正態(tài)分布用中位數(shù)和四分位數(shù)間距表示，組間比較采用t檢驗或U檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析來進(jìn)行。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HBV DNA水平與HIV載量及CD4+T細(xì)胞計數(shù)之間的相關(guān)性分析 對入組患者HBV DNA水平與HIV載量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)HBV DNA水平與HIV RNA水平呈明顯的正相關(guān)（r=0.502，P=0.011，圖1A），HBV DNA水平與CD4+T細(xì)胞計數(shù)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.409，P=0.042，圖1B）。

圖1 HBV DNA水平與HIV載量和CD4+ T細(xì)胞計數(shù)的相關(guān)性分析Figure 1 Correlation analysis of HBV DNA level with HIV viral load and CD4+ T cell count level

2.2 HIV感染急性期及慢性期CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞分泌IFN-γ能力的比較 研究對比分析了刺激后CD4+T細(xì)胞（圖2A）及CD8+T細(xì)胞（圖2B）分泌IFN-γ的能力，發(fā)現(xiàn)HIV感染急性期患者經(jīng)HBsAg重疊肽刺激后CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞分泌IFN-γ的能力（分別為9.1%±3.9%及4.4%±1.8%）明顯高于HIV感染慢性期的患者（分別為5.7%±2.5%及2.7%±1.4%）。

圖2 HBsAg重疊肽刺激后，CD4+ T及CD8+ T細(xì)胞分泌IFN-γ在正常對照、HIV感染急性期患者及HIV感染慢性期患者之間的比較Figure 2 Comparison of IFN- secreted by CD4+ T and CD8+ T cells after stimulation by HBsAg overlapping peptide among normal persons,HIV patients at acute and chronic stages

3 討 論

本研究發(fā)現(xiàn)，在HIV感染過程中，HIV合并HBV感染的患者，HBV DNA水平與HIV RNA水平呈正相關(guān)，而與CD4+T細(xì)胞計數(shù)呈負(fù)相關(guān)。HIV RNA水平及CD4+T細(xì)胞計數(shù)是反映HIV疾病進(jìn)展的兩個最重要的指標(biāo)，本研究結(jié)果表明在HIV感染中，隨著疾病的進(jìn)展，機(jī)體對HBV的清除能力逐漸降低。這可能是HIV合并HBV感染的患者，HBV疾病進(jìn)展速度較快的原因。很多人設(shè)想在HIV疾病進(jìn)展過程中機(jī)體對HBV的清除能力是降低的，本研究利用已有的隊列和標(biāo)本對此進(jìn)行了證實。因此對合并HBV感染的HIV感染者早發(fā)現(xiàn)及早治療可能有效抑制HBV疾病的進(jìn)展。但也有研究報道， HIV感染極晚期的患者機(jī)體B細(xì)胞反應(yīng)能力非常低下，通過檢測抗原和抗體的水平不能很好地反映HBV感染情況，須要進(jìn)一步檢測HBV DNA的水平來進(jìn)行評價[8]。

健康成人急性HBV感染后大部分能夠自愈，而嬰幼兒急性HBV感染后，因其免疫力低下不能有效清除病毒而成為慢性HBV攜帶者。我國通過對新生兒接種乙型肝炎疫苗來控制乙型肝炎的成效非常顯著。HIV感染者中，合并慢性HBV感染率明顯高于非HIV感染者。在本研究中利用HBsAg重疊肽刺激發(fā)現(xiàn)，與急性期感染者相比，HIV感染慢性期患者CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的能力較低，表明隨著HIV疾病的進(jìn)展，機(jī)體對HBV的清除能力逐漸降低。HIV感染人群隨著疾病的進(jìn)展，HBV合并感染率增加，感染率增加是因HIV感染者隨疾病的進(jìn)展，機(jī)體對急性期HBV感染的清除能力降低導(dǎo)致HBV感染進(jìn)入慢性期，還是因患者隨著機(jī)體抗HBV能力的降低，機(jī)體潛在的HBV復(fù)制增加導(dǎo)致，值得進(jìn)一步研究。此外，隨著免疫系統(tǒng)的損傷，機(jī)體感染HBV后易慢性化，對這類人群接種乙型肝炎疫苗可能會有預(yù)防HBV合并感染的作用。

總之，本研究在HIV感染急性期及慢性期隊列的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)隨著HIV疾病的進(jìn)展，HBV DNA水平逐漸升高。CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞分泌IFN-γ的能力逐漸降低。但本研究也有一些不足，因為患者難以獲得，受細(xì)胞量及流式細(xì)胞儀檢測的限制，本研究只檢測了CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞分泌IFN-γ的能力，沒有直接檢測細(xì)胞對HBV感染細(xì)胞的殺傷及清除作用，后期如有相應(yīng)的標(biāo)本，進(jìn)行更詳細(xì)的研究將會有助于進(jìn)一步揭示HIV感染者感染HBV后慢性化的機(jī)制。