史鴻鵬 陳麗紅 司華哲 劉可園 南韋肖 王金銘 楊乾龍 李光玉 孫偉麗

(中國農業(yè)科學院特產研究所，長春 2130112)

硒元素是動物生長發(fā)育必需的微量元素之一[1]，硒缺乏將會引起機體免疫失調、氧化應激、生長遲緩等生理性反應[2-5]。有機硒的安全性比無機硒高，且容易被動物機體吸收利用[6-7]。研究表明，硒元素作為5′-脫碘酶的輔助因子，參與三碘甲狀腺原氨酸的合成，而三碘甲狀腺原氨酸可以通過控制動物機體能量代謝和蛋白質代謝來調節(jié)機體生長[8]；硒元素可以通過促進瘤胃微生物生長，提高α-淀粉酶和蛋白酶活性，進而促進有機物質、蛋白質的消化吸收[9]；硒元素經過小腸被吸收進入血液后與硒蛋白P結合，形成功能性硒蛋白和含硒酶類，進而影響動物健康和生長發(fā)育[10]。研究發(fā)現(xiàn)，鹿茸頂端出現(xiàn)硒元素富集現(xiàn)象[11-12]，而關于鹿茸的生長是否受外源硒的影響，還未曾有學者研究。本試驗擬通過探索不同硒(酵母硒形式)添加量對梅花鹿生長性能、產茸性能、血清生化指標和營養(yǎng)物質表觀消化率的影響，得出生茸期梅花鹿飼糧適宜的硒添加量，旨在為硒元素在生茸期梅花鹿飼糧中合理利用提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設計

選取20頭體況相近、5歲的健康生茸期梅花鹿，隨機分為4組，每組5個重復，每個重復1頭梅花鹿。其中，Ⅰ組為對照組，飼喂不額外添加硒的基礎飼糧；Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組為試驗組，飼喂在基礎飼糧基礎上添加酵母硒(硒含量為2 000 mg/kg)的飼糧，硒添加量分別為0.3、1.2和4.8 mg/kg。飼養(yǎng)試驗在中國農業(yè)科學院特產研究所梅花鹿養(yǎng)殖場進行。試驗從2020年4月23日開始至2020年6月30日結束，預試期7 d，正試期60 d。

1.2 基礎飼糧

本試驗采用試驗基地原有基礎飼糧配方配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。根據(jù)國家農業(yè)科學數(shù)據(jù)共享中心公布的數(shù)據(jù)，查閱基礎飼糧中各個原料中硒含量，計算得到基礎飼糧中硒含量為0.04 mg/kg。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

續(xù)表1項目 Items含量 Content預混料 Premix1)1.00合計 Total100.00營養(yǎng)水平 Nutrient levels2)干物質 DM89.72代謝能 ME/(MJ/kg)10.50粗蛋白質 CP19.07粗脂肪 EE2.31鈣 Ca0.78磷 P0.58硒Se/(mg/kg)0.04

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗前對所有梅花鹿進行耳釘編號，全面清理圈舍并消毒。每天飼喂3次(04：30、10：00和16：00)。正試期以預試期測定的采食量為基礎，進行定量飼喂，每天飼喂前收集剩料，烘干計算采食量。保證鍋內有清潔飲水，自由飲水。每天清晨打掃圈舍，各組梅花鹿飼養(yǎng)方式以及環(huán)境條件一致。

1.4 樣品采集

試驗開始和結束時對所有梅花鹿進行稱重，并在試驗第30、31和32天連續(xù)3 d于05：00—06：00在鹿圈內定點收糞，每個鹿圈定點5個，每個定點采集糞樣200 g左右，去除明顯雜質。試驗第34天晨飼前麻醉試驗鹿，然后由專業(yè)技術人員通過頸靜脈采血10 mL，4 000 r/min離心10 min，將血清分裝入1.5 mL離心管，置于-80 ℃保存待測。

1.5 指標檢測

1.5.1 生長性能

根據(jù)試驗前體重和鋸茸時體重計算平均日增重，每天記錄梅花鹿的采食量，計算干物質采食量和料重比。

1.5.2 產茸性能

鋸茸前，使用軟尺測量茸尺指標；鋸茸后，稱量茸重。所有茸尺指標和茸重數(shù)據(jù)均取鹿茸左、右支的平均值。

1.5.3 營養(yǎng)物質表觀消化率

飼糧和糞樣干物質(DM)含量參照GB/T 6435—2006，采用105 ℃烘干法測定；粗蛋白質(CP)含量參照GB/T 6432—1994，采用凱氏定氮法的測定；粗脂肪(EE)含量參照GB/T 6433—1994，采用索氏抽提法的測定；鈣(Ca)含量參照GB/T 6436—1992，采用乙二胺四乙酸(EDTA)滴定法測定；磷(P)含量參照GB/T 6437—1992，采用釩鉬酸銨比色法的測定。以鹽酸不溶灰分(AIA)為指示劑，計算營養(yǎng)物質表觀消化率[13]，計算公式如下：

某營養(yǎng)物質表觀消化率(%)=100-100×[飼糧中
AIA含量(%)/糞樣中AIA含量(%)]×[糞樣中
該營養(yǎng)物質含量(%)/飼糧中該營養(yǎng)
物質含量(%)]。

1.5.4 飼糧和糞便中硒含量的測定

根據(jù)GB 5009.93—2017的方法處理飼糧和糞便樣品，使用吉天公司的原子熒光光度計(AFS-9130)，采用原子吸收光譜法測定飼糧和糞便中硒含量，該方法的檢出限為0.002 mg/kg。

1.5.5 血清生化指標的測定

血清中高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、葡萄糖(GLU)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(CHO)、尿素氮(UN)含量與堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)、谷草轉氨酶(AST)、谷丙轉氨酶(ALT)活性采用中生北控生物科技股份公司提供的試劑盒，按照試劑盒說明書，使用SELECTRA-E全自動生化分析儀進行測定。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

獲得的試驗數(shù)據(jù)通過Excel 2010進行整理，然后使用GraphpadPrism8.0的one-way ANOVA程序對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，以P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。統(tǒng)計結果以“平均值±標準差”表示。

2 結 果

2.1 不同硒添加量對生茸期梅花鹿生長性能的影響

由表2可知，飼糧硒添加量對生茸期梅花鹿的平均日增重和干物質采食量無顯著影響(P>0.05)；Ⅲ組料重比低于其他各組，但差異不顯著(P>0.05)；Ⅳ組硒體沉積量極顯著高于Ⅱ組和Ⅲ組(P<0.01)。

表2 不同硒添加量對梅花鹿生長性能的影響

2.2 不同硒添加量對梅花鹿產茸性能的影響

由表3可知，飼糧硒添加量對梅花鹿茸重無顯著影響(P>0.05)，但Ⅲ組茸重相對于Ⅰ組和Ⅱ組提高0.24 kg，相對于Ⅳ組提高0.37 kg。Ⅲ組的各茸尺指標也高于其他組，但差異均未達顯著水平(P>0.05)。

表3 不同硒添加量對梅花鹿產茸性能的影響

2.3 不同硒添加量對梅花鹿營養(yǎng)物質表觀消化率的影響

由表4可知，Ⅱ組梅花鹿對干物質、鈣、磷的表觀消化率極顯著高于Ⅰ組和Ⅲ組(P<0.01)，同時干物質和磷的表觀消化率顯著高于Ⅳ組(P<0.05)；Ⅱ組梅花鹿對粗蛋白質的表觀消化率與Ⅰ組無顯著差異(P>0.05)，但極顯著高于Ⅲ組(P<0.01)，顯著高于Ⅳ組(P<0.05)；Ⅱ組梅花鹿對硒的表觀消化率極顯著高于Ⅲ組和Ⅳ組(P<0.01)；各組梅花鹿對粗脂肪的表觀消化率無顯著差異(P>0.05)。

表4 不同硒添加量對梅花鹿營養(yǎng)物質表觀消化率的影響

2.4 不同硒添加量對梅花鹿血清生化指標的影響

由表5、表6和表7可知，Ⅱ組梅花鹿血清乳酸脫氫酶和堿性磷酸酶活性極顯著高于Ⅰ組(P<0.01)；Ⅳ組梅花鹿血清總膽固醇和總蛋白含量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；Ⅳ組梅花鹿血清高密度脂蛋白膽固醇含量和乳酸脫氫酶活性極顯著高于Ⅰ組和Ⅲ組(P<0.01)；Ⅲ組梅花鹿血清堿性磷酸酶活性極顯著高于Ⅰ組和Ⅳ組(P<0.01)；Ⅲ組梅花鹿血清尿素氮含量顯著高于Ⅱ組(P<0.05)；Ⅲ組梅花鹿血清谷丙轉氨酶活性顯著高于Ⅳ組(P<0.05)。

表5 不同硒添加量對梅花鹿血清糖脂代謝指標的影響

表6 不同硒添加量對梅花鹿血清蛋白質代謝指標的影響

表7 不同硒添加量對梅花鹿血清肝功能指標的影響

3 討 論

3.1 不同硒添加量對生茸期梅花鹿生長性能的影響

動物對有機硒的利用率高于無機硒[14-15]，硒元素可以通過硒蛋白參與動物生長發(fā)育的調節(jié)[16]。本試驗發(fā)現(xiàn)，在生茸期梅花鹿飼糧中添加酵母硒，硒添加量為1.2 mg/kg時能降低料重比，平均日增重隨著硒添加的增加出現(xiàn)先增高后下降的趨勢。研究表明，硒可以提高雌性梅花鹿、湖羊和杜寒雜交羊的平均日增重，降低料重比，提高飼料轉化率[10，15]。硒對妊娠母豬的生長性能無顯著影響，但可以提高仔豬的平均日增重，降低料重比[17-19]。這可能是因為硒元素與脫碘酶作用，參與三碘甲狀腺原氨酸的合成，進而影響機體能量代謝和蛋白質代謝，促進動物的生長發(fā)育[8]。本試驗發(fā)現(xiàn)硒體沉積量隨著飼糧硒添加量的增加而增加，硒添加量為4.8 mg/kg的組梅花鹿硒體沉積量極顯著高于硒添加量為0.3和1.2 mg/kg的組。

3.2 不同硒添加量對梅花鹿產茸性能的影響

硒元素可以調節(jié)鹿茸生長，生茸期馬鹿血清硒含量顯著高于其他時期[20]。研究表明，鹿茸頂端出現(xiàn)硒元素富集現(xiàn)象[12]，而鹿茸的生長中心位于鹿茸頂端[21-22]。NRC(2000)認為當飼糧硒含量超過5 mg/kg時，反芻動物會發(fā)生中毒現(xiàn)象?；诖耍驹囼炘O置不同硒添加量組，觀察硒元素對梅花鹿鹿茸生長及機體代謝的影響。研究表明，硒蛋白通過參與調節(jié)胰島素樣生長因子-1(IGF-1)的分泌[23-24]，進而促進鹿茸生長[25]。本試驗發(fā)現(xiàn)，硒添加量為1.2 mg/kg時，梅花鹿的茸重有增加趨勢。有研究表明，硒添加量的增加可以提高奶牛的生產性能[26-27]，與本試驗結果相似，這可能是因為硒元素在動物體內發(fā)揮抗氧化作用，有效緩解動物的氧化應激狀態(tài)，進而使生產性能得到提高[28]。

3.3 不同硒添加量對梅花鹿營養(yǎng)物質表觀消化率的影響

生茸期梅花鹿對營養(yǎng)物質需求量高，以滿足鹿茸快速生長的需要。本試驗發(fā)現(xiàn)，飼糧中硒添加量為0.3 mg/kg時，梅花鹿對干物質、粗蛋白質、粗脂肪、鈣、磷和硒的表觀消化率均得到不同程度的提高。Bao等[10]研究發(fā)現(xiàn)，隨著硒添加量從0.2 mg/kg提高到0.3 mg/kg，梅花鹿對粗蛋白質和粗脂肪的表觀消化率顯著提高。這可能是因為硒元素可以改變瘤胃菌群結構，將不易消化的營養(yǎng)物質轉化為反芻動物容易吸收的狀態(tài)[17，29-30]。硒參與抗氧化酶谷胱甘肽過氧化物酶的生物合成，可以保護機體免受活性氧和自由基的侵害[31-33]，對消化器官起到保護作用，進而影響機體α-淀粉酶和蛋白酶活性，促進淀粉和蛋白質的消化、吸收和利用[9]。

3.4 不同硒添加量對梅花鹿血清生化指標的影響

營養(yǎng)物質被動物機體消化吸收后，通過血液運輸?shù)竭_各個組織器官，用以維持動物機體生長發(fā)育和功能的發(fā)揮。外源飼喂的酵母硒經過瘤胃到達小腸，然后通過主動運輸方式穿過腸壁進入血液。血漿中硒元素的傳輸先經過白蛋白，然后經過球蛋白運輸?shù)礁鱾€組織。血清中總蛋白含量高是蛋白質代謝增強的標志[34]；血清中堿性磷酸酶活性是反映細胞再生能力強弱的指標，在發(fā)育迅速的組織中堿性磷酸酶活性高代表細胞再生能力強[35]；谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶是存在于反芻動物線粒體中的2種轉氨酶，參與動物機體的蛋白質代謝[36]。本試驗發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加4.8 mg/kg硒顯著提高血清中總蛋白、總膽固醇含量，極顯著提高血清乳酸脫氫酶活性，添加1.2 mg/mg硒顯著或極顯著提高血清堿性磷酸酶和谷丙轉氨酶活性，而添加0.3 mg/kg則對絕大部分血清生化指標沒有顯著影響。Bao等[10]的研究顯示低劑量添加硒對雌性梅花鹿對血清生化指標沒有顯著影響，本試驗結果與此一致，王建[26]的研究也得出相似結果，不同硒添加量對泌乳中期的奶牛血清生化指標無顯著影響。

4 結 論

綜上所述，在以酵母硒為硒源時，飼糧中硒添加量為0.3 mg/kg時可不同程度提高生茸期梅花鹿對飼糧中干物質、粗蛋白質、鈣、磷和硒的表觀消化率，因此推薦生茸期梅花鹿飼糧適宜的硒添加量為0.3 mg/kg。