王 倩，李留安，秦夢然，張科研，范真真，張仲謀，毋春楠，張宇強，毛帥強

(天津農(nóng)學院 動物科學與動物醫(yī)學學院/天津市農(nóng)業(yè)動物繁育與健康養(yǎng)殖重點實驗室，天津 300384)

隨著生活水平的不斷提高，人們對食物的營養(yǎng)價值有了更高的追求。雞蛋是人們日常消費中性價比最高的食物來源之一。維生素A作為人體必需的一種重要脂溶性維生素，可以促進視覺細胞感光色素的形成，防止夜盲癥和視力減退，抵抗呼吸系統(tǒng)感染，增強機體免疫功能，外用還有助于改善粉刺、膿包、癤瘡、皮膚表面潰瘍等，對治療脫發(fā)也有重要作用[1-2]。因此，開發(fā)富維生素A功能性雞蛋對滿足人們改善健康狀況的營養(yǎng)需求具有重要意義。

維生素A在動物體內合成轉化效率較低，因此蛋雞所需的維生素A需要從飼料添加劑中獲取[3]。NRC(1994)推薦蛋雞產(chǎn)蛋期維生素A的添加量為1 500 IU/kg，然而許多研究表明，這個添加量并不能使蛋雞獲得最佳的性能，尤其是當?shù)半u生產(chǎn)中面臨各種復雜多變的環(huán)境時，蛋雞處于應激狀態(tài)，導致蛋雞對維生素A的需要量增加，因此在蛋雞生產(chǎn)中應根據(jù)生產(chǎn)實際需要調整維生素A的添加量[4]。截至目前，有關日糧中添加較高濃度維生素A對蘆花雞蛋品質及蛋黃中維生素A含量的影響鮮有報道。本研究以地方品種蘆花雞為試驗對象，通過在日糧中添加不同水平的維生素A，探討其對蛋品質及蛋黃中維生素A含量的影響，為富維生素A功能性雞蛋生產(chǎn)提供科學理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與設計

試驗于2019年8-9月在天津金洼農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司蘆花雞養(yǎng)殖基地進行。隨機選取34周齡、健康的蘆花蛋雞180只，隨機分為4組，每組45只，室外平地散養(yǎng)，每組活動區(qū)域50 m2，自由采食和飲水。試驗采用玉米豆粕型基礎日糧，經(jīng)檢測基礎日糧中維生素A含量為1 200 IU/kg，在參考相關文獻的基礎上[5]，3個試驗組在對照組基礎日糧中分別添加15 000 IU/kg、30 000 IU/kg、45 000 IU/kg的維生素A原料。所有組在飼喂基礎日糧預試3 d后，開始飼喂相應的試驗日糧，試驗期為30 d。

1.2 材料與試劑

維生素A原料(食品級，粉狀，32.5×104IU/g，河南華商食品添加劑有限公司)；維生素A標準品(美國Sigma公司);視黃醇(C29H30O，CAS號：68-26-8，純度≥95%)；無水乙醇(C2H5OH，分析純)；抗壞血酸(C6H8O6)；氫氧化鉀(KOH)；石油醚(C5H12O2，沸程為30～60 ℃)；甲醇(CH3OH，色譜純)(默克股份兩合公司)；2，6-二叔丁基對甲酚(C15H24O，簡稱BHT)；pH試紙等。

1.3 儀器與設備

高效液相色譜儀(Agilent-1260，安捷倫科技有限公司)；色譜柱C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；恒溫水浴振蕩器；分液漏斗萃取凈化振蕩器；旋轉蒸發(fā)儀；電子分析天平；蛋殼顏色測定儀；游標卡尺；外徑千分尺；羅氏比色扇；蛋白高度測定儀(NFN382，日本FHK公司)等。

1.4 樣品采集

在第10、20和30天前后，從每組隨機選取35枚雞蛋，其中20枚用于檢測雞蛋中的維生素A ，剩余15枚用于檢測蛋品質。檢測前，雞蛋貯藏于4 ℃冰箱備用。

1.5 高效液相色譜法測定蛋黃中維生素A含量

樣品前處理參照GB 5009.82-2016執(zhí)行[6]。測定時的液相條件為：液相色譜柱C18(5 μm，250 mm×4.6 mm)；柱溫20 ℃；流動相：A.水，B.甲醇,流速0.8 mL/min；紫外檢測波長325 nm；進樣量10 μL。準確吸取維生素A標準儲備溶液0.008、0.012和0.016 mL于5 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，使標準溶液中維生素A濃度為0.80、1.20和1.60 μg/mL。測定這3個不同濃度的標準品并計算出精準的標準曲線回歸方程，再用高效液相色譜法檢測雞蛋樣品中維生素A的含量。

1.6 產(chǎn)蛋量

在整個30 d的試驗期間，每天記錄各組產(chǎn)蛋量，分析第10、20和30天時各組產(chǎn)蛋量的變化。

1.7 蛋品質指標測定

蛋重、蛋黃重、蛋清重和蛋殼重、蛋殼顏色、雞蛋比重、蛋形指數(shù)、蛋黃顏色、蛋白高度、哈氏單位、蛋殼厚度等蛋品質指標測定參考文獻[7]進行。

1.8 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 20.0軟件對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，用單因子方差分析(one-way ANOVE analysis，Duncan's)進行均值間多重比較，并進行顯著性檢驗，P<0.05為差異顯著，所有測定結果均以平均數(shù)±標準誤表示。

2 結果與分析

2.1 日糧添加維生素A對蛋黃維生素A含量的影響

由表1可知，第10天和第20天時，所有試驗組蛋黃中維生素A含量均顯著高于對照組(P<0.05)，且45 000 IU/kg維生素A組最高；第30天時，30 000 IU/kg維生素A組和45 000 IU/kg維生素A組蛋黃中的維生素A含量顯著高于15 000 IU/kg維生素A組和對照組(P<0.05)，30 000 IU/kg維生素A組和45 000 IU/kg維生素A組蛋黃中的維生素A含量無顯著差異(P>0.05)。

2.2 日糧添加維生素A對蛋雞產(chǎn)蛋率的影響

由表2可知，第10天和20天時，對照組產(chǎn)蛋率顯著高于所有試驗組(P<0.05)，試驗組之間的產(chǎn)蛋率無顯著差異；第30天時，對照組產(chǎn)蛋率顯著高于所有試驗組(P<0.05)，30 000 IU/kg維生素A組和45 000 IU/kg維生素A組產(chǎn)蛋率顯著高于15 000 IU/kg維生素A組(P<0.05)。

表1 日糧維生素A添加量對蛋黃中維生素A含量的影響

表2 日糧維生素A添加量對產(chǎn)蛋率的影響

2.3 日糧添加維生素A對雞蛋品質的影響

由表3可知；在第10天時，所有試驗組蛋殼厚度均顯著高于對照組(P<0.05)；各試驗組之間的蛋殼厚度均無顯著差異(P>0.05)；其他蛋品質指標各組間均差異不顯著(P>0.05)。

第20天時，30 000 IU/kg維生素A組和45 000 IU/kg維生素A組的蛋黃顏色顯著高于對照組(P<0.05)，15 000 IU/kg維生素A組與對照組兩者之間的蛋黃顏色無顯著差異(P>0.05)；45 000 IU/kg維生素A組的哈氏單位顯著高于對照組(P<0.05)；所有試驗組的蛋殼顏色顯著低于對照組(P<0.05)；其他蛋品質指標各組間均差異不顯著(P>0.05)。

在第30天時，30 000 IU/kg維生素A組和45 000 IU/kg維生素A組的蛋黃重顯著低于對照組(P<0.05)，15 000 IU/kg維生素A組與對照組之間的蛋黃重無顯著差異；所有試驗組蛋黃顏色均顯著高于對照組(P<0.05)；所有試驗組的蛋清比率顯著低于對照組(P<0.05)；所有試驗組的蛋殼顏色顯著低于對照組(P<0.05)；其他蛋品質指標各組間均差異不顯著(P>0.05)。

3 討 論

3.1 蛋黃中維生素A含量

目前，中國蛋雞生產(chǎn)所參照的《NY/T 33-2004雞飼養(yǎng)標準》中提供的產(chǎn)蛋雞飼糧維生素A水平為8 000 IU/kg，但隨著近年來蛋雞育種水平越來越高，高產(chǎn)蛋雞700日齡時產(chǎn)蛋率仍能達到80%左右[8]，因此在實際生產(chǎn)中，蛋雞對維生素A的需要量比標準中有較大幅度的提高。崔桂山等[9]有關日糧添加維生素A的試驗表明，在試驗前期蛋中維生素A含量沒有顯著影響，第21天時，13 200 IU/kg維生素A組能顯著提高蛋中維生素A含量，但在第42天時，13 200 IU/kg維生素A組提高不顯著。Squires等[10]報道，在蛋雞日糧中如果添加足夠量的維生素A，在12～13周后蛋黃中維生素A含量會趨于穩(wěn)定。本試驗結果表明，日糧添加3種較高濃度的維生素A均能顯著提高蛋黃中的維生素A含量，且45 000 IU/kg維生素A組蛋黃中維生素A含量最高，這與崔桂山等[9]研究報道基本一致。另外，試驗第30天時的結果與第20天相比無顯著變化，提示試驗到一定天數(shù)時蛋中維生素A富集可能達到峰值，即蛋中維生素A含量不會隨試驗時間延長而持續(xù)增加。

3.2 產(chǎn)蛋量

Kucuk等[11]研究顯示，提高日糧中維生素A水平可以提高蛋雞的產(chǎn)蛋量。日糧中維生素A添加量在12 000 IU/kg時，可以顯著提高31～44周齡蛋雞的產(chǎn)蛋量[12]。汪秀娟等[13]研究提示，由于維生素A和維生素E存在拮抗作用，較高水平維生素A會影響脂溶性維生素E的吸收，而維生素E具有維持機體生殖的功能，因而導致產(chǎn)蛋量下降，其試驗結果也顯示當日糧中維生素A添加量達到14 000 IU/kg時產(chǎn)蛋量會顯著下降。本試驗研究表明，所有試驗組的產(chǎn)蛋量均顯著低于對照組，與汪秀娟等[13]研究結果一致。因此，推測日糧中添加較高水平的維生素A會對蛋雞產(chǎn)蛋量產(chǎn)生負面影響。

3.3 蛋品質指標

劉曉輝等[14]報道，雞蛋蛋黃顏色是人們選購時的第一感觀指標，維生素A的分子結構與蛋黃色素相似，因此它們之間存在競爭抑制作用。邵元庫等[15]報道，日糧添加16 000 IU/kg維生素A后，蛋黃重量和顏色均有所降低，影響蛋黃品質，維生素A過高會影響色素的吸收沉積。本試驗結果表明，在第20天和30天時，30 000 IU/kg維生素A組和45 000 IU/kg維生素A組的蛋黃顏色顯著高于對照組(P<0.05)，與上述報道結果不一致，分析其原因可能是本研究日糧添加的維生素A含量更高，致試驗組蛋黃顏色顯著高于對照組。在第30天時，30 000 IU/kg維生素A組和45 000 IU/kg 維生素A組蛋黃重顯著低于對照組，這與邵元庫等報道的結果一致，分析原因可能是高濃度的維生素A能夠拮抗維生素E的作用，進而影響蛋黃的生成。

表3 日糧維生素A添加量對雞蛋品質的影響

Roberts等[16]報道，影響雞蛋哈氏單位的因素有很多，如日糧蛋白質和氨基酸組成等營養(yǎng)因素、雞舍中氨氣濃度等環(huán)境因素。崔桂山[17]研究顯示，日糧中添加8 100～18 000 IU/kg的維生素A對雞蛋哈氏單位沒有顯著影響。Squires等[10]報道，日糧中添加4 000～28 000 IU/kg的維生素A對哈氏單位影響不顯著。但也有報道表明，日糧維生素A含量為8 000 IU/kg時能顯著提高雞蛋哈氏單位，并且隨著維生素A水平的增加，哈氏單位顯著提高[18-19]。本試驗只在第20天時發(fā)現(xiàn)45 000 IU/kg維生素A組的哈氏單位顯著高于對照組，而在第10天、第30天時，所有試驗組與對照組間哈氏單位均無顯著差異，即維生素A添加與雞蛋哈氏單位間的關系尚不確定，有待進一步研究。

蛋殼顏色取決于附著在蛋殼上的色素，這些色素由子宮壁上的蛋殼腺所分泌，附在蛋殼外層的殼膠膜上，維生素A與生殖道黏膜上皮的發(fā)育有關，能夠影響色素的吸收和沉積[20]。陳玉艷等[21]研究表明，蛋雞如果長期缺乏維生素A，可能引起輸卵管正常黏膜上皮被分層的鱗狀角質化上皮所取代，使蛋殼色素的分泌失常，造成蛋殼顏色變淺。本試驗結果表明，在第20天和30天時，所有試驗組蛋殼顏色顯著低于對照組(P<0.05)，說明日糧添加維生素A能夠有效改善蛋殼顏色。

蛋殼厚度和強度是反映蛋殼質量優(yōu)劣的主要指標。王蘭芳等[22]報道，日糧中添加3 000～9 000 IU/kg的維生素A對蛋殼厚度無顯著影響。閻佩佩等[23]研究表明，提高日糧維生素A水平至12 000和16 000 IU/kg時，蛋殼厚度未出現(xiàn)顯著改變。本試驗結果表明，在第10天時，3組試驗組的蛋殼厚度均顯著高于對照組，但在第20天和30天時，所有試驗組與對照組均無顯著差異，與王蘭芳等[22]、閻佩佩等[23]研究結果整體類似，即長時間添加較高濃度維生素A對蛋殼厚度無顯著影響。

4 結 論

在本試驗中，當?shù)半u日糧中維生素A添加量達到15 000 IU/kg時，能夠顯著提高蛋黃中維生素A含量，但會導致產(chǎn)蛋率顯著下降，對蛋黃顏色、蛋黃重、哈氏單位、蛋殼顏色等蛋品質指標有一定影響。