王法宇 吳迪 趙鳳明 袁家欣

【摘 要】 目的：建立在消栓顆粒劑中有效成份黃芪甲苷的HPLC-ELSD含量測定方法。方法：用Nanologica SVEA C18色譜柱（250mm×4.6mm，5m）采用HPLC-ELSD法測定黃芪甲苷，蒸發(fā)光散射檢測器（SEDEX-55型），柱溫箱為25℃，流動(dòng)相為乙腈∶[KG-*3/5]水（35∶[KG-*3/5]65），流速為1.0mL/min。結(jié)果：黃芪甲苷在0.2742～1.1492g內(nèi)有良好的線性關(guān)系R=0.9994（n=6），平均回收率為99.16%，RSD為1.21%。結(jié)論：本方法操作簡單快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可用于消栓顆粒劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 黃芪甲苷;高效液相色譜法;蒸發(fā)光散射檢測器;含量測定

【中圖分類號(hào)】R284 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2021）1-0031-03

Determination of Astragaloside in Xiaoshuan Granules by HPLC

WANG Fayu1 WU Di2 ZHAO Fengming3 YUANJiaxin3

1.Beijing Pharmaceutical Group staff University， Beijing 100079，China;2.Baicheng food and Drug Inspection Institute， Baicheng 137000， China;

3.Jilin Aodong Deer Industry Co.， Ltd. Changchun 130021， China

Abstract：Objective To establish an HPLC-ELSD method for determining the effective component of astragaloside A in Xiaoshuan Granules. MethodNanologica SVEA C18 column （4.6mm×250mm， 5m） HPLC-ELSD determination of astragaloside， SEDEX-55 type evaporative light scattering detector， column temperature box is 25℃， mobile phase is acetonitrile： water （35∶[KG-*3/5]65 ）， Flow rate∶[KG-*3/5]1.0mL/ min. ResultsAstragaloside A is in the range of 0.2742～1.1492g， the linear relationship between the injection volume and the peak area integral value is good， the average recovery rate of R2 =0.9994 （n=6） is 99.16%， and the RSD is 1.21%.ConclusionThe method is simple， accurate， reliable and reproducible for the quality control of Xiaoshuan granule.

Keywords：Astragaloside A;HPLC;ELSD;Assay

消栓顆粒劑出自清朝名醫(yī)王清任的《醫(yī)林改錯(cuò)》卷下癱痿論方[1]。該方特點(diǎn)為重用黃芪為君藥，其黃芪用量是其它活血藥總和的約3倍，方中重用的黃芪中含有多糖及黃芪甲苷[2-4]，同時(shí)黃芪還具有抗炎、增強(qiáng)免疫[5-6]、抗氧化[7]、保護(hù)心臟[8]、調(diào)脂[9]、降血糖[10]等作用。黃芪甲苷作為黃芪的主要有效成分，在我國藥典中有含量測定并有相關(guān)含量限度規(guī)定[11]。本研究建立消栓顆粒劑中黃芪甲苷含量測定方法，進(jìn)一步細(xì)化藥品的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 液相色譜儀（Agilent 1100） 檢測器為四元泵二極管陣列，數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換器為Agilent35900E蒸發(fā)散射檢測器（SEDEX-55），單元泵（DXNamax-SD-200） ，AgII空氣發(fā)生器電子天平（Mettler instrument Corp），超聲波提取器（型號(hào)GT-350W型濟(jì)寧科特超聲電子有限公司）。

1.2 藥品 消栓顆粒（ 自制的三批藥品分別為20190905 20190904 20190902）自制的黃芪陰性對照;黃芪甲苷對照品（中檢所110781201717）;乙腈（色譜純）;其它試劑（分析純）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備 ①供試品溶液的制備：取本品7g，精密稱定，加氨試液40mL移至具塞三角瓶中搖勻，密閉，過夜。取此提取液以40mL水飽和正丁醇萃取，共萃取3次后合并正丁醇萃取液，將其水浴蒸干，殘?jiān)约状既芙夂笠浦?mL容量瓶中，并稀釋到刻度，然后取上清液，用濾膜過濾（0.45L），即得;②對照品溶液配制：稱取黃芪甲苷對照品0.5mg加甲醇配制成每毫升含0.5mg的溶液;③陰性對照：按上述工藝配制缺黃芪的陰性對照品溶液。精密吸取上述①②③各10L測定。結(jié)果①和②在相同時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)相對應(yīng)的色譜峰，而③則未出現(xiàn)。相關(guān)圖譜如圖1所示。

2.2 色譜條件 Nanologica SVEA C18色譜柱（250mm×4.6mm，5m）;以乙腈-水（35∶[KG-*3/5]65）為流動(dòng)相;蒸發(fā)光散射檢測器。1.0mL/min為流速，柱溫為25℃，理論塔板數(shù)不低于4000，以黃芪甲苷峰計(jì)算。進(jìn)樣量為10L。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍 黃芪甲苷對照品溶液（濃度為0.47mg/mL）精密吸取4～30L，進(jìn)行測定峰的面積，縱坐標(biāo)（Y）為峰面積log值，橫坐標(biāo)（X）為進(jìn)樣量log值，回歸處理，結(jié)果顯示黃芪甲苷在0.2742～1.1492g范圍內(nèi)，峰面積的積分值與進(jìn)樣量之間呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=1.4709X+2.7033，R=0.9994（n=6）。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密地吸取上述同一對照品溶液10L，在測試的條件和測試的地點(diǎn)相同的前提下，重復(fù)進(jìn)樣6次后測定黃芪甲苷的峰面積，并計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，取6次RSD的平均值以記錄。結(jié)果表明黃芪甲苷的平均峰面積為5527.88，RSD為1.45%，該方法精密度較好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 同批次的樣品為供試品，按上文所述的方法配制供試品溶液，依上述方法重復(fù)進(jìn)行含量平行測定。黃芪甲苷重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果的平均值為7919.53，RSD為1.63%。由以上可知，此方法的重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取本品供試品溶液，分別放置0～24h，每次吸取10L測定。結(jié)果平均峰面積為7519.55，RSD為1.87%。結(jié)果顯示，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率 精密地稱取已知含量的同一樣品6份，其每份黃芪甲苷含量約1.25mg。精密地加入對照品溶液（含黃芪甲苷為1.2404mg）按以上樣品測定項(xiàng)下的方法提取，測定含量并計(jì)算回收率，平均回收率為99.16%，RSD為1.21%，結(jié)果見表1。

2.8 檢出限 取黃芪甲苷對照品配置成濃度為0.001mg/mL、0.002mg/mL、0.003mg/mL、0.004mg/mL、0.005mg/mL、0.006mg/mL、0.008mg/mL、0.01mg/mL的對照品溶液，分別注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣量為10L，計(jì)算不同進(jìn)樣量的信噪比，經(jīng)測定，濃度為0.005mg/mL的黃芪甲苷進(jìn)樣量為10L時(shí)，其信噪比為3，因此確定黃芪甲苷的最低檢出限為0.05g。

2.9 樣品含量測定 取10批次的上述樣品，按供試品溶液的方法配制并測定其峰面積，再用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算樣品中黃芪甲苷的含量，測定結(jié)果見表2?？紤]到每批藥材之間質(zhì)量差異和生產(chǎn)實(shí)際，最后將黃芪甲苷的含量定為不低于0.70mg/g。

3 討論

黃芪為方中君藥，其主要成分黃芪甲苷的含量測定可以做為控制消栓顆粒劑質(zhì)量的指標(biāo)性成份。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，黃芪甲苷平均加樣回收率為 99.16%，RSD 為1.21%。樣品中黃芪甲苷出峰時(shí)間為15.6min，且樣品峰與其他峰的分離度很好。陰性對照試驗(yàn)表明，除黃芪外的其他原輔料不干擾樣品中黃芪甲苷的含量測定。表明本結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性良好，可用于對消栓顆粒劑的質(zhì)量控制，從而保證臨床應(yīng)用中制劑的療效和安全。

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（收稿日期：2020-07-16 編輯：陶希睿）