萬學(xué)濟，龔 萍，楊 宇，童新紅，李中心，喻 婷，葉勝強，陳 星，王麗霞，凌明湖，陳 潔，錢運國

（武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，武漢 430208）

中國是畜禽養(yǎng)殖大國，也是獸用抗菌藥物生產(chǎn)和使用大國。獸用抗菌藥物在防治動物疾病、提高養(yǎng)殖效益、保障畜禽產(chǎn)品有效供給中，發(fā)揮了重要作用。但是，由于市場秩序不夠規(guī)范、養(yǎng)殖環(huán)節(jié)使用不盡合理、從業(yè)人員科學(xué)用藥意識不強、公眾對細菌耐藥性認知度不高等問題依然存在，嚴重威脅了畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全和公共衛(wèi)生安全，給人類和動物健康帶來隱患［1，2］。中國已于 2020 年 7 月 1 日起全面禁止促生長藥物飼料添加劑的使用。大量的研究表明，在畜禽日糧中添加一定劑量的益生菌，可與腸黏膜共同構(gòu)成一道保護屏障，阻止細菌、病毒和食物抗原的入侵，進而促進宿主健康［3］。芽孢桿菌可以形成芽孢，具有抗逆性強、耐酸堿、耐高溫高壓等特性，是畜禽養(yǎng)殖中研究和使用較多的一類益生菌［4］。其中地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis）和枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）均已在中國得到批準可用作飼料添加劑。在家禽中，芽孢桿菌具有提高動物生產(chǎn)性能，促進營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收，提高飼料利用率，減少動物腸道中的有害菌群，調(diào)節(jié)動物胃腸道微生態(tài)平衡，提高抗病力等多種作用［5］。為此，試驗選取前期研制的一種復(fù)合芽孢桿菌添加到蛋雞飼糧中，研究其對蛋雞腸道微生物及蛋品質(zhì)的影響，旨在為益生菌在蛋雞生產(chǎn)中的推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

復(fù)合芽孢桿菌由實驗室研制（地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌含量分別為5×109CFU/g、2×1010CFU/g）。

1.2 試驗設(shè)計

選取同一批次兩棟海蘭褐蛋雞（30 周齡），一棟為對照組（10 416 只），一棟為試驗組（10 224 只）。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗組在基礎(chǔ)日糧中添加1 g/kg 復(fù)合芽孢桿菌。

1.3 飼養(yǎng)管理

采用蛋雞“124”標準化養(yǎng)殖模式，即1 棟全封閉式雞舍，層疊式籠養(yǎng)蛋雞2 萬只以上，生產(chǎn)過程采用自動喂料機、自動集蛋雞、傳送帶清糞機、濕簾風(fēng)機4 機配套進行生產(chǎn)蛋雞的高效健康養(yǎng)殖模式。試驗期3 個月。

1.4 指標檢測

1）糞便微生物檢測。無菌采集新鮮糞便保存于冰盒中，每組5 個重復(fù)，每月測定一次。在超凈臺內(nèi)稀釋糞樣，選擇2~3個適宜稀釋度分別接種于營養(yǎng)瓊脂、乳酸菌培養(yǎng)基瓊脂、伊紅美藍瓊脂平板、SS 瓊脂培養(yǎng)基（所用培養(yǎng)基均購自青島海博生物技術(shù)有限公司），分別測定菌落總數(shù)、乳酸菌、大腸菌群和“沙門+志賀”氏菌的數(shù)量；選擇2~3 個適宜稀釋度，80 ℃水浴15 min 后，接種于營養(yǎng)瓊脂平板，測定芽孢桿菌的數(shù)量。采用平板菌落計數(shù)法進行統(tǒng)計，結(jié)果用1 g糞便中細菌數(shù)量的對數(shù)值［log（CFU/g）］表示。

2）蛋品質(zhì)測定。每組隨機采集新鮮雞蛋120枚，于12 h 內(nèi)進行蛋品質(zhì)測定，每月測定一次。采用電子天平測定蛋重，用數(shù)顯卡尺、數(shù)顯千分尺分別測定蛋的縱長、橫寬及蛋殼厚度；用鹽水漂浮法測定蛋比重，蛋殼強度測定儀（ROBOTMATION）測定蛋殼強度，蛋品質(zhì)測定儀（ROBOTMATION）測定蛋白高度、哈氏單位和蛋黃顏色，用電子天平測定蛋黃重；并記錄肉斑、血斑及雞蛋破損情況。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用SPSS 13.0 進行統(tǒng)計分析，結(jié)果用“平均值±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合芽孢桿菌對蛋雞糞便微生物的影響

由圖1 可以看出，在0 d 時，試驗組與對照組雞舍糞便中的細菌總數(shù)、大腸菌群、芽孢桿菌、乳酸菌及“沙門+志賀”氏菌的數(shù)量無顯著差異（P>0.05）（圖1A）；在30 d 時，與對照組相比，試驗組“沙門+志賀”氏菌數(shù)顯著降低（P<0.05），芽孢桿菌數(shù)顯著增加（P<0.05）（圖1B）；在 60 d 時，與對照組相比，試驗組細菌總數(shù)、大腸菌群數(shù)顯著降低（P<0.05），芽孢桿菌數(shù)顯著增加（P<0.05）（圖1C）；在90 d 時，與對照組相比，試驗組細菌總數(shù)、大腸菌群、“沙門+志賀”氏菌數(shù)顯著降低（P<0.05）（圖1D）。從0~90 d 總體上看，試驗組蛋雞糞便中的細菌總數(shù)、大腸菌群和“沙門+志賀”氏菌的數(shù)量呈下降趨勢，芽孢桿菌數(shù)呈上升趨勢，90 d 時糞便中“沙門+志賀”氏菌數(shù)極顯著低于0~60 d（P<0.05），芽孢桿菌數(shù)顯著高于 0~30 d（P<0.05）。結(jié)果表明，在日糧中添加復(fù)合芽孢桿菌，可顯著降低蛋雞糞便中的有害微生物數(shù)量，改善蛋雞腸道健康。

2.2 復(fù)合芽孢桿菌對蛋品質(zhì)的影響

由圖2 可以看出，在0、30 d 時，試驗組與對照組的蛋重、蛋形指數(shù)、蛋比重、蛋黃比率、蛋殼厚度、蛋殼強度、蛋黃顏色、蛋白高度、哈氏單位均無顯著差異（P>0.05）（圖2A、2B）；在60 d 時，試驗組的蛋黃比率顯著高于對照組（P<0.05）（圖2C）；在90 d時，試驗組的蛋黃顏色顯著高于對照組（P<0.05）（圖2D）；在30~90 d，試驗組的蛋殼強度、蛋白高度和哈氏單位均有高于對照組的趨勢，但差異不顯著（P>0.05）。從0~90 d 總體上看，試驗組的蛋重、蛋白高度與哈氏單位有增加的趨勢，但差異不顯著（P>0.05）；60 d 的蛋黃比率極顯著高于其他時期（P<0.05），90 d的蛋殼強度顯著高于0 d（P<0.05），90 d 的蛋黃顏色顯著高于其他時期（P<0.05）。結(jié)果表明，在日糧中添加復(fù)合芽孢桿菌，可顯著提高雞蛋的蛋黃比率、蛋黃顏色，具有增加蛋殼強度、蛋白高度和哈氏單位的潛力。

3 小結(jié)與討論

3.1 復(fù)合芽孢桿菌對蛋雞糞便微生物的影響

動物腸道微生物區(qū)系的平衡對于動物的生長發(fā)育有著直接的影響。在飼養(yǎng)管理中不可避免地會導(dǎo)致大腸桿菌、沙門氏菌等病原菌進入畜禽腸道內(nèi)繁殖。進入腸道的病原菌會通過產(chǎn)生毒素和有害物質(zhì)減少腸道微生物的種類與數(shù)量，降低腸道微生物的多樣性［6］。腸道微生物多樣性的減少會降低腸內(nèi)穩(wěn)態(tài)和抵御病原菌的能力。益生菌主要通過與腸道微生物之間、與宿主之間的相互作用而發(fā)揮作用［7］。Li 等［8］報道，芽孢桿菌能抑制腸道有害菌的繁殖，促進腸道有益菌的生長；郭軍蕊等［9］研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加枯草芽孢桿菌可降低蛋雞糞和盲腸大腸桿菌數(shù)量，增加腸道雙歧桿菌數(shù)量。本研究中，在30 d 時，試驗組“沙門+志賀”氏菌數(shù)顯著降低（P<0.05），芽孢桿菌數(shù)顯著增加（P<0.05）；在60 d 時，試驗組細菌總數(shù)、大腸菌群數(shù)顯著降低（P<0.05），芽孢桿菌數(shù)顯著增加（P<0.05）；在90 d 時，試驗組細菌總數(shù)、大腸菌群、“沙門+志賀”氏菌數(shù)顯著降低（P<0.05）。表明在日糧中添加復(fù)合芽孢桿菌，可顯著降低蛋雞糞便中的大腸菌群、“沙門+志賀”氏菌等有害微生物數(shù)量，增加芽孢桿菌等有益微生物的數(shù)量，進而改善蛋雞腸道健康。

3.2 復(fù)合芽孢桿菌對蛋品質(zhì)的影響

蛋品質(zhì)是影響商品蛋經(jīng)濟效益的重要因素之一。哈氏單位是衡量蛋的新鮮度和蛋清質(zhì)量的重要指標，蛋白高度和哈氏單位越高，蛋清品質(zhì)越好，蛋越新鮮。Abdelqader 等［10］發(fā)現(xiàn)，在高產(chǎn)蛋雞飼糧中添加枯草芽孢桿菌，可明顯提高蛋雞的蛋殼厚度、加深蛋黃的顏色，從而改善蛋殼的品質(zhì)，使破蛋率降低，進一步提高養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟收入；雷凱［11］研究表明，蛋雞飼糧中添加地衣芽孢桿菌可以改善蛋殼厚度、蛋殼強度、哈夫單位、蛋白高度和蛋黃顏色；郭軍蕊等［9］研究顯示，飼糧中添加枯草芽孢桿菌可顯著提高雞蛋的蛋黃顏色。本研究中，在60 d 時，試驗組的蛋黃比率顯著高于對照組（P<0.05）；在90 d 時，蛋黃顏色顯著提高（P<0.05）；0~90 d，試驗組的蛋重、蛋白高度與哈氏單位有增加的趨勢，但差異不顯著（P>0.05）。結(jié)果表明，在日糧中添加復(fù)合芽孢桿菌，可顯著提高雞蛋的蛋黃比率、蛋黃顏色，具有增加蛋殼強度、蛋白高度和哈氏單位的潛力。

在蛋雞日糧中添加復(fù)合芽孢桿菌，可顯著降低蛋雞糞便中的大腸菌群、“沙門+志賀”氏菌等有害微生物數(shù)量，增加芽孢桿菌等有益微生物的數(shù)量，進而改善蛋雞腸道健康；可顯著提高雞蛋的蛋黃比率、蛋黃顏色，具有增加蛋殼強度、蛋白高度和哈氏單位的潛力，進而改善蛋品質(zhì)。