◎ 王子偉，張園園，楊玲玲，劉 濤，周享享

（信陽農(nóng)林學(xué)院食品學(xué)院，河南 信陽 464000）

馬尾松在我國分布廣泛。松針，又名松葉、松毛，是馬尾松的葉。松針具有一定的藥用價(jià)值，我國古代醫(yī)書《會(huì)約醫(yī)鏡》《名醫(yī)別錄》《本草綱目》等資料中就有其相關(guān)記載。當(dāng)代研究表明，松針具有止咳，平喘，祛痰，鎮(zhèn)痛，降血糖，降血脂，抗氧化，抗病毒，抗菌，抗腫瘤，抗突變效應(yīng)，抗血小板聚集活性及抗疲勞等藥理作用[1]。

信陽毗鄰大別山，具有豐富的馬尾松松針資源。目前，關(guān)于馬尾松松針揮發(fā)油的報(bào)道比較多，但是不同生長環(huán)境的松針揮發(fā)油其組分及含量會(huì)產(chǎn)生差異。對(duì)于信陽地區(qū)馬尾松松針揮發(fā)油的文獻(xiàn)報(bào)道較少。因此，筆者以信陽的馬尾松松針為原料提取揮發(fā)油，通過氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）研究其化學(xué)成分，并初步探究其對(duì)常見的幾種食品中致病菌的抑制作用，旨在為信陽馬尾松資源的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

馬尾松松針，2020 年3 月底于信陽賢山采摘，經(jīng)信陽農(nóng)林學(xué)院植物教研室鑒定為馬尾松；受試菌種由信陽農(nóng)林學(xué)院生物與制藥工程學(xué)院的喬新榮副教授提供；Agilent 6850/5975 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油

取馬尾松松針300 g，洗凈，剪成約2 cm 小段，放入2 000 mL 圓底蒸餾瓶中，加入1 200 mL 蒸餾水。采用水蒸氣蒸餾法，在循化蒸餾器中進(jìn)行蒸餾，溫度設(shè)置為380 ℃。觀察到水30 min便開始暴沸，剛暴沸時(shí)，揮發(fā)油和水一起被蒸餾出，再經(jīng)過約40 min 基本蒸餾完全，繼續(xù)蒸餾至3 h，得到白色微黃色透明油狀液體約0.8 mL，具有濃郁的特殊氣味。揮發(fā)油用專用小瓶子收集，放入冰箱4 ℃保存?zhèn)溆肹2-3]。

1.2.2 GC-MS 定性定量分析化學(xué)成分

GC 條件：色譜柱為HP-5 MS 毛細(xì)管柱（30 m× 0.25 mm×0.25 μm）；程序升溫，初始柱溫為60 ℃，并保持2 min，以10 ℃·min-1升溫速率升至230 ℃，保持1 min；載氣為高純氦氣，流速1.0 mL·min-1，進(jìn)樣1.0 μL，不分流。在進(jìn)樣前，馬尾松針揮發(fā)油用乙醚適當(dāng)稀釋處理[2-3]。

MS 條件：使用EI 離子源，其掃描范圍是33 ～350 AMU，電子能量為70 eV。

1.2.3 抑菌效果的測(cè)定

將受試菌接種于新鮮斜面培養(yǎng)基上，于恒溫培養(yǎng)箱37 ℃活化24 h 后，用無菌水配制成菌體 106～107CFU·mL-1的菌懸液，備用[4]。

用無菌移液槍分別吸取供試濃度菌懸液各100 μL至固體培養(yǎng)基中，分別涂布均勻。用無菌鑷子夾取已滅菌的濾紙片（直徑6 mm）輕輕蘸取適量的揮發(fā)油，置于已接種的培養(yǎng)基表面，每個(gè)平板放3 片，每個(gè)菌種做3 個(gè)平行試驗(yàn)。以無菌水作空白對(duì)照，在37 ℃的條件下培養(yǎng)24 h 后，量取抑菌圈直徑，取其平均值作為測(cè)定結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 GC-MS 成分分析結(jié)果

通過GC-MS 分析，得到總離子流色譜圖，見圖1。經(jīng)計(jì)算機(jī)標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫檢索，得到26 種組分，確定出23 個(gè)化合物，結(jié)果見表1，占總揮發(fā)油量的95.62%。其中，單萜和倍半萜類化合物是信陽馬尾松松針揮發(fā)油的主要成分，分別有6 種和11 種，而含量較高的單萜類化合物有β-月桂烯31.479%和異松油烯2.44%；含量較高的倍半萜化合物是β-胡椒烯27.837%， β-石竹烯6.857%，雙環(huán)[4.4.0]dec-1-ene，2-異丙基-5-甲基-9-亞甲基3.657%，牛兒烯3.07%，α-石竹烯1.269%，杜松烯0.914%，大根香葉烯0.553%。醇類化合物是芳樟醇0.302%和松油醇0.189%。醛類化合物是β-甜橙醛11.736%和2，4-癸二烯醛0.391%。酚類化合物是甲基丁香酚0.897%。酯類化合物是乙酸冰片酯1.064%。

粟本超等研究廣西柳州馬尾松松針揮發(fā)油，GC-MS 分析的組分中相對(duì)含量較高的是α-蒎烯（26.09%）、β-蒎烯（11.70%）、3-蒈烯（8.27%）、β-石竹烯（13.91%）、大根香葉烯-D（4.89%）和 γ-欖香烯（4.14%）等化合物[5]。胡文杰等研究江西吉安馬尾松松針揮發(fā)油GC-MS 分析的組分中相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的組分是β-古巴烯（7.94%）、γ-依蘭油 烯（6.01%）、β- 瑟 林 烯（3.63%）、1（10），4-杜松二烯（6.65%）、石竹稀（15.85%）、蛇麻稀（5.82%）、大根香葉烯B（10.81%）、α-杜松醇（12.12%）等化合物[2]。李軍集等研究土貢種源馬尾松松針揮發(fā)油，GC-MS 分析的組分中相對(duì)含量較高的是α-蒎烯（37.673%）、莰烯（3.724%）、β-蒎烯（14.969%）、石竹烯（8.242%）、β-水芹烯（3.200%）、γ-欖香烯（3.600%）等化合物；其研究廣西藤縣普通種源馬尾松松針揮發(fā)油，GC-MS 分析的組分中相對(duì)含量較高的是α-蒎烯（46.715%）、莰烯（3.015%）、β-蒎烯（12.978%）、石竹烯（10.212%）、γ-欖香烯（3.600%）等化合物[3]。從參考文獻(xiàn)和本實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)比可以看出，不同地域不同環(huán)境氣候造就了馬尾松松針揮發(fā)油成分和含量上存在明顯的差異。

2.2 抑菌結(jié)果

馬尾松松針揮發(fā)油對(duì)3 種食品中常見致病菌的抑菌效果見表2。結(jié)果表明，3 組試驗(yàn)抑菌圈直徑均大于6 mm，說明馬尾松松針揮發(fā)油對(duì)3 種致病菌均有明顯的抑制作用，其抑制強(qiáng)弱依次為：金黃色葡萄球菌＞大腸桿菌＞沙門氏菌。肖靖萍[6]、許麗璇[7]等研究發(fā)現(xiàn)馬尾松松針揮發(fā)油對(duì)枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、黑曲霉、黃曲霉、白曲霉、啤酒酵母、變形桿菌、八疊球菌等也有較好的抑制作用，表明馬尾松松針揮發(fā)油抑菌范圍較廣，為其在食品中的應(yīng)用提供依據(jù)。

圖1 馬尾松松針揮發(fā)油GC-MS 分析總離子流圖

表1 馬尾松松針揮發(fā)油化學(xué)成分表

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)以信陽的馬尾松松針為原料，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，通過GC-MS 對(duì)揮發(fā)油組分進(jìn)行了分離鑒定，共鑒定出了23 個(gè)化合物，占總揮發(fā)油量的95.62%。其中，單萜和倍半萜類化合物是信陽馬尾松松針揮發(fā)油的主要成分，β-月桂烯和β-胡椒烯含量最高，分別為31.479%和27.837%。通過濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定揮發(fā)油對(duì)3 種食品中常見致病菌的抑菌效果，結(jié)果表明，馬尾松松針揮發(fā)油對(duì)3 種致病菌均有明顯的抑制作用，其抑制強(qiáng)弱依次為：金黃色葡萄球菌＞大腸桿菌＞沙門氏菌。