饒永超，李 維，張 蕓，楊德鳳，李洪林，林家棟，張福平*

（1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，高原山地動(dòng)物遺傳育種與繁殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州省動(dòng)物遺傳育種與繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽(yáng) 550025；2.貴州大學(xué)科研雞場(chǎng)，貴州貴陽(yáng) 550025；3.貴州大學(xué)家禽研究所，貴州貴陽(yáng) 5 500251；4.貴州省畜禽遺傳資源管理站，貴州貴陽(yáng) 550001）

種雞的繁殖性能低一直是制約地方雞產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要原因，產(chǎn)蛋后期的種雞產(chǎn)蛋量急劇下降，如何提高產(chǎn)蛋后期種雞的繁殖性能成為增加經(jīng)濟(jì)效益的關(guān)鍵[1]。貴州黃雞是貴州省的優(yōu)良地方品種，屬于蛋肉兼用型，成年公雞重2.60～3.30 kg，母雞體重1.99～2.56 kg，開產(chǎn)日齡143～160 d，年產(chǎn)蛋175 枚[2]，具有良好的生長(zhǎng)性能和生產(chǎn)性能。但貴州黃雞的產(chǎn)蛋高峰期持續(xù)時(shí)間短，產(chǎn)蛋后期種母雞產(chǎn)蛋量迅速下降[3]。因此，如何延長(zhǎng)貴州黃雞產(chǎn)蛋高峰期，提高其生產(chǎn)性能值得深入探究。

中草藥添加劑是以天然的中草藥為材料，以動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)及中獸醫(yī)知識(shí)為基礎(chǔ)而制作的單一或復(fù)合型藥方，能促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育、提高生產(chǎn)性能[4]。菟絲子的主要成分是黃酮，其能調(diào)節(jié)機(jī)體激素水平、抑制生精細(xì)胞凋亡等，提高繁殖性能[5]；菟絲子中的黃酮還能通過(guò)提升小鼠血清睪酮濃度發(fā)揮生殖保護(hù)作用[6]。淫羊藿的主要活性成分為淫羊藿苷，淫羊藿苷具有調(diào)節(jié)生殖功能、免疫保護(hù)和抗氧化等藥理作用[7]，能提高母雞的產(chǎn)蛋率和平均蛋重，降低母雞輸卵管氧化應(yīng)激水平[8]。巴戟天的主要有效成分為巴戟天多糖，其可通過(guò)提高垂體生成素釋放激素及卵巢對(duì)母鼠生殖激素的分泌、治療不孕等[9]，也能改善、促進(jìn)雄鼠睪丸的生精功能[10]。目前，關(guān)于菟絲子、淫羊藿和巴戟天對(duì)畜禽繁殖性能影響的研究主要集中在豬等哺乳動(dòng)物，且作用機(jī)制尚不明確，同時(shí)大多數(shù)研究通常只研究其中某一單組分，對(duì)于這3 種中草藥組成的復(fù)方中草藥添加劑對(duì)產(chǎn)蛋后期種雞繁殖性能的影響研究報(bào)道較少。本試驗(yàn)旨在探究該復(fù)方中草藥添加劑（由菟絲子、淫羊藿、巴戟天組成）對(duì)產(chǎn)蛋后期貴州黃雞種雞（385 日齡）繁殖性能的影響，以期為復(fù)方中草藥添加劑在提高種雞繁殖性能生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 復(fù)方中草藥添加劑由菟絲子、淫羊藿、巴戟天按照質(zhì)量比1:1:1 混合，菟絲子、淫羊藿、巴戟天等中草藥均采購(gòu)于貴州省貴陽(yáng)市花溪區(qū)中醫(yī)院。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取385 日齡貴州黃雞種母雞120 只和種公雞72 只，采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，分為4 個(gè)組，每個(gè)組3 個(gè)重復(fù)，母雞每個(gè)重復(fù)10 只，公雞每個(gè)重復(fù)6 只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，復(fù)方中草藥組在基礎(chǔ)日糧中分別添加0.5%、1.0%、1.5%復(fù)方中草藥添加劑。預(yù)試期7 d，正試期28 d。

試驗(yàn)采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，基礎(chǔ)日糧參照《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 33—2004）和《中國(guó)飼料成分及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值表》（2018）設(shè)計(jì)，制成顆粒飼糧，基礎(chǔ)日糧成分和營(yíng)養(yǎng)成分見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)于2019 年4 月17 日開始在貴州大學(xué)科研雞場(chǎng)進(jìn)行，將中草藥過(guò)40 目篩后與基礎(chǔ)日糧混勻，喂料方式采用人工喂料（每天08:00、14:00 各喂食1 次），自由飲水。試驗(yàn)雞采用半階梯式籠養(yǎng)，試驗(yàn)前清理雞舍并消毒，每3～5 d 進(jìn)行1 次帶雞消毒，保證雞舍衛(wèi)生。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 精液品質(zhì) 試驗(yàn)第28 天，禁食（12 h）不禁水一夜后，早上空腹采用腹背式按摩采精法采精，采集精液后立即用邁朗精子全自動(dòng)分析儀（mL-210JZ，南寧松景天倫生物科技有限公司）進(jìn)行分析。

1.4.2 激素濃度 試驗(yàn)第28 天，禁食不禁水一夜后，早上禁食12 h，空腹翅靜脈采血，公雞屠宰后取睪丸組織。睪酮（Testosterone，T）、催乳素（Prolactin，PRL）、雌二醇（Estradiol，E2）、促卵泡素（Follicle-Stimulating Hormone，F(xiàn)SH）、促黃體素（Luteinizing Hormone，LH）、孕激素（Progesterone，PROG）均使用ELISA 激素測(cè)定試劑盒（江萊生物公司）并按說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

1.4.3 卵泡數(shù)量 記錄每天的產(chǎn)蛋數(shù)據(jù)，第28 天屠宰母雞后記錄卵泡數(shù)量，采用數(shù)顯式游標(biāo)卡尺（蘇制02050123-1，無(wú)錫錫工量具有限公司）測(cè)量卵泡直徑后進(jìn)行分級(jí)。

1.4.4 種蛋孵化 試驗(yàn)結(jié)束后，各個(gè)重復(fù)收集60 枚合格種蛋經(jīng)恒溫孵化器進(jìn)行孵化，統(tǒng)計(jì)孵化率、種蛋受精率、健雛率等。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS 22.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差表示，用ANOVA 過(guò)程進(jìn)行單因素方差分析，進(jìn)行線性和二次顯著性檢驗(yàn)分析。P<0.05 表示差異顯著，P>0.05 表示差異不顯著。

表1 基礎(chǔ)日糧成分及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種公雞精液品質(zhì)的影響 由表2 可知，試驗(yàn)組的精子密度均高于對(duì)照組，其中1.0%、1.5% 復(fù)方中草藥添加劑組與對(duì)照組差異顯著。試驗(yàn)組的精子畸形率均顯著低于對(duì)照組，其中1.5%復(fù)方中草藥添加劑組最低。0.5%、1.0%、1.5%復(fù)方中草藥添加劑組比對(duì)照組分別低8.88%、13.79%、15.45%。0.5%復(fù)方中草藥添加劑組的精液量較對(duì)照組顯著增加，而1.0%、1.5%復(fù)方中草藥添加劑組與對(duì)照組差異不顯著。試驗(yàn)組精子活率均顯著高于對(duì)照組，其中0.5%復(fù)方中草藥添加劑組最高，較對(duì)照組提高5.83%。結(jié)果表明，在種公雞日糧中添加復(fù)方中草藥添加劑對(duì)精液品質(zhì)有顯著的提高作用。

表2 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種公雞精液品質(zhì)的影響（n=3）

2.2 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種公雞血漿和睪丸中睪酮濃度的影響 由表3 可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)各組血漿睪酮濃度均有一定程度的提升，其中1.5%復(fù)方中草藥添加劑組顯著高于其他各組。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)各組睪丸睪酮濃度均顯著提高，其中1.0%復(fù)方中草藥添加劑組最高。結(jié)果表明，在種公雞日糧中添加復(fù)方中草藥添加劑能提高睪酮濃度。

表3 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種公雞睪酮濃度的影響（n=3）pg/mL

2.3 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種母雞激素濃度的影響 據(jù)表4 可知，試驗(yàn)組種母雞血清中PRL 濃度較對(duì)照組顯著降低。試驗(yàn)組種母雞血清中E2、FSH、LH、PROG 濃度均較對(duì)照組提高，其中E2濃度試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組；0.5%復(fù)方中草藥添加劑組FSH 濃度與對(duì)照組差異不顯著，1.0%、1.5%復(fù)方中草藥添加劑組FSH 濃度顯著高于對(duì)照組；試驗(yàn)組LH、PROG 濃度顯著高于對(duì)照組，在種母雞日糧中添加復(fù)方中草藥添加劑能促進(jìn)促性腺激素分泌。

2.4 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)蛋雞卵泡發(fā)育及產(chǎn)蛋情況 由表5 可知，對(duì)照組的大卵泡直徑與0.5%復(fù)方中草藥添加劑組差異不顯著，顯著低于1.0%、1.5%復(fù)方中草藥添加劑組；對(duì)照組中黃卵泡的直徑顯著低于0.5%、1.5%復(fù)方中草藥添加劑組，與1.0%復(fù)方中草藥添加劑組差異不顯著。各組母雞卵巢卵泡發(fā)育情況見圖1。由表6可知，1.5% 復(fù)方中草藥添加劑組的總產(chǎn)蛋數(shù)顯著高于對(duì)照組，4 個(gè)處理組的蛋重?zé)o顯著差異。

2.5 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種蛋孵化效果的影響 由表7可知，試驗(yàn)組受精率、受精蛋孵化率、健雛率均顯著高于對(duì)照組，其中添加復(fù)方中草藥添加劑為1.0%組效果最好。

3 討 論

3.1 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種公雞的影響 有研究表明，睪酮可以刺激精子生成，提高精子密度及精液量、精子活率[11-12]，精子活率與受精率的高低密切相關(guān)。睪酮通過(guò)對(duì)間質(zhì)細(xì)胞和支持細(xì)胞的調(diào)節(jié)，為整個(gè)生精過(guò)程及精液儲(chǔ)存提供有利環(huán)境[13]。菟絲子中的黃酮可通過(guò)下調(diào)凋亡基因Fas、Fasl的表達(dá)而抑制生精細(xì)胞凋亡，從而提高精子活率、降低精子畸形率[14-15]。淫羊藿苷具有類似雄激素的功能，可促進(jìn)動(dòng)物精液生成，在提高睪酮激素方面具有潛在的作用[16]。巴戟天中的多聚糖可以緩解精子的氧化應(yīng)激反應(yīng)，保護(hù)精子頂體的結(jié)構(gòu)和功能，提高精子運(yùn)動(dòng)能力和穿透能力[17]。本研究結(jié)果表明，由菟絲子、巴戟天、淫羊藿組成的復(fù)方中草藥添加劑可顯著提升種公雞的血漿睪酮及睪丸睪酮濃度，并顯著改善精液品質(zhì)，提高了種蛋的孵化率，說(shuō)明該復(fù)方中草藥可顯著提高種公雞的繁殖性能。

3.2 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種母雞的影響 隨著種用時(shí)間的延長(zhǎng)，母雞體內(nèi)生殖激素水平的變化是其種用性能降低的主要因素之一[18]。母雞產(chǎn)蛋是通過(guò)“下丘腦—垂體—性腺（卵巢）”來(lái)促進(jìn)或抑制相關(guān)激素的分泌調(diào)節(jié)的結(jié)果[19]。FSH 促進(jìn)卵泡生長(zhǎng)，LH 促進(jìn)成熟卵泡排卵，抑制PRL 的分泌，并促進(jìn)卵巢分泌E2及PROG，促使雞輸卵管蠕動(dòng)運(yùn)輸成熟卵泡和蛋的形成；PRL 分泌量增加會(huì)抑制FSH、LH 分泌，導(dǎo)致排卵減少甚至停止，抑制卵巢分泌E2和PROG 等激素，促使母雞開始并持續(xù)就巢行為，停止排卵；另一方面卵巢分泌E2及PROG協(xié)同促使下丘腦、垂體釋放FSH、LH，繼而發(fā)生排卵，卵巢分泌E2和PROG 受到抑制后促使下丘腦、垂體釋放PRL，繼而發(fā)生就巢行為[20-22]。

表4 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種母雞血清激素濃度的影響（n=3）

表5 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)卵母細(xì)胞直徑的影響（n=3） mm

圖1 4 組母雞的卵巢圖片

表6 復(fù)方中草藥對(duì)種母雞產(chǎn)蛋數(shù)量的影響（n=3）

中草藥含有豐富的蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素、脂肪和礦物質(zhì)，在營(yíng)養(yǎng)平衡、提高生長(zhǎng)性能和調(diào)節(jié)生理功能等方面發(fā)揮著重要作用[23]。張琴等[24]研究證實(shí)，淫羊藿本身具有性激素、腎上腺皮質(zhì)激素樣作用，能激發(fā)卵巢激素分泌，繼而促使下丘腦、垂體釋放FSH、LH，抑制PRL 的分泌，增加成熟卵泡數(shù)量及產(chǎn)蛋量。巴戟天主要通過(guò)提高垂體對(duì)促卵泡素及促黃體素的調(diào)控來(lái)增強(qiáng)下丘腦垂體—性腺（卵巢）的功能，在家禽飼料中添加巴戟天寡糖后可改善生長(zhǎng)性能與健康狀況[25-26]。菟絲子黃酮對(duì)下丘腦—垂體—性腺軸功能具有多方面的影響。在雌性小鼠和大鼠中，菟絲子黃酮表現(xiàn)出雌激素樣活性，能提高成年大鼠腺垂體、卵巢和子宮的重量，能增強(qiáng)卵巢人絨毛膜促性腺激素促黃體生成素受體功能[27]。菟絲子的生物學(xué)作用及臨床療效與黃酮類化合物有關(guān)，已知這些黃酮類物質(zhì)在結(jié)構(gòu)上與雌激素近似[6]。雞的產(chǎn)蛋性能主要取決于卵泡發(fā)育的狀況，母雞卵巢上的卵泡可以連續(xù)發(fā)育和成熟、排卵，每次排卵都相繼形成一個(gè)蛋并排出體外。產(chǎn)蛋量高的母雞卵巢上布滿葡萄串樣的體積大小不一、顏色或深或淺的卵泡[28-29]。本研究中，試驗(yàn)組的大黃卵泡比對(duì)照組多，中黃卵泡顯著數(shù)量顯著高于對(duì)照組，試驗(yàn)組的產(chǎn)蛋數(shù)也優(yōu)于對(duì)照組，可能是由于復(fù)方中草藥對(duì)機(jī)體進(jìn)行了一定修復(fù)并促進(jìn)“下丘腦—垂體—性腺（卵巢）”軸功能導(dǎo)致的產(chǎn)蛋量提高，繼而提高種用性能。本試驗(yàn)以1.5%劑量添加效果較好，1.5%組產(chǎn)蛋量顯著高于對(duì)照組。

表7 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種蛋孵化性能的影響（n=3） %

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，在貴州黃雞產(chǎn)蛋后期日糧中添加中草藥添加劑可促進(jìn)E2、FSH、LH、PROG 等激素的釋放以及提高卵泡數(shù)量和產(chǎn)蛋量，可顯著提高睪酮激素分泌及精液品質(zhì)，提高種蛋受精率、孵化率，故可提高貴州黃雞的繁殖性能，可延長(zhǎng)種用時(shí)間，降低制種成本。