饒永超,李 維,張 蕓,楊德鳳,李洪林,林家棟,張福平*
(1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,高原山地動(dòng)物遺傳育種與繁殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州省動(dòng)物遺傳育種與繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州貴陽(yáng) 550025;2.貴州大學(xué)科研雞場(chǎng),貴州貴陽(yáng) 550025;3.貴州大學(xué)家禽研究所,貴州貴陽(yáng) 5 500251;4.貴州省畜禽遺傳資源管理站,貴州貴陽(yáng) 550001)
種雞的繁殖性能低一直是制約地方雞產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要原因,產(chǎn)蛋后期的種雞產(chǎn)蛋量急劇下降,如何提高產(chǎn)蛋后期種雞的繁殖性能成為增加經(jīng)濟(jì)效益的關(guān)鍵[1]。貴州黃雞是貴州省的優(yōu)良地方品種,屬于蛋肉兼用型,成年公雞重2.60~3.30 kg,母雞體重1.99~2.56 kg,開產(chǎn)日齡143~160 d,年產(chǎn)蛋175 枚[2],具有良好的生長(zhǎng)性能和生產(chǎn)性能。但貴州黃雞的產(chǎn)蛋高峰期持續(xù)時(shí)間短,產(chǎn)蛋后期種母雞產(chǎn)蛋量迅速下降[3]。因此,如何延長(zhǎng)貴州黃雞產(chǎn)蛋高峰期,提高其生產(chǎn)性能值得深入探究。
中草藥添加劑是以天然的中草藥為材料,以動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)及中獸醫(yī)知識(shí)為基礎(chǔ)而制作的單一或復(fù)合型藥方,能促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育、提高生產(chǎn)性能[4]。菟絲子的主要成分是黃酮,其能調(diào)節(jié)機(jī)體激素水平、抑制生精細(xì)胞凋亡等,提高繁殖性能[5];菟絲子中的黃酮還能通過(guò)提升小鼠血清睪酮濃度發(fā)揮生殖保護(hù)作用[6]。淫羊藿的主要活性成分為淫羊藿苷,淫羊藿苷具有調(diào)節(jié)生殖功能、免疫保護(hù)和抗氧化等藥理作用[7],能提高母雞的產(chǎn)蛋率和平均蛋重,降低母雞輸卵管氧化應(yīng)激水平[8]。巴戟天的主要有效成分為巴戟天多糖,其可通過(guò)提高垂體生成素釋放激素及卵巢對(duì)母鼠生殖激素的分泌、治療不孕等[9],也能改善、促進(jìn)雄鼠睪丸的生精功能[10]。目前,關(guān)于菟絲子、淫羊藿和巴戟天對(duì)畜禽繁殖性能影響的研究主要集中在豬等哺乳動(dòng)物,且作用機(jī)制尚不明確,同時(shí)大多數(shù)研究通常只研究其中某一單組分,對(duì)于這3 種中草藥組成的復(fù)方中草藥添加劑對(duì)產(chǎn)蛋后期種雞繁殖性能的影響研究報(bào)道較少。本試驗(yàn)旨在探究該復(fù)方中草藥添加劑(由菟絲子、淫羊藿、巴戟天組成)對(duì)產(chǎn)蛋后期貴州黃雞種雞(385 日齡)繁殖性能的影響,以期為復(fù)方中草藥添加劑在提高種雞繁殖性能生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
1.1 試驗(yàn)材料 復(fù)方中草藥添加劑由菟絲子、淫羊藿、巴戟天按照質(zhì)量比1:1:1 混合,菟絲子、淫羊藿、巴戟天等中草藥均采購(gòu)于貴州省貴陽(yáng)市花溪區(qū)中醫(yī)院。
1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取385 日齡貴州黃雞種母雞120 只和種公雞72 只,采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì),分為4 個(gè)組,每個(gè)組3 個(gè)重復(fù),母雞每個(gè)重復(fù)10 只,公雞每個(gè)重復(fù)6 只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧,復(fù)方中草藥組在基礎(chǔ)日糧中分別添加0.5%、1.0%、1.5%復(fù)方中草藥添加劑。預(yù)試期7 d,正試期28 d。
試驗(yàn)采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧,基礎(chǔ)日糧參照《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)和《中國(guó)飼料成分及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值表》(2018)設(shè)計(jì),制成顆粒飼糧,基礎(chǔ)日糧成分和營(yíng)養(yǎng)成分見表1。
1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)于2019 年4 月17 日開始在貴州大學(xué)科研雞場(chǎng)進(jìn)行,將中草藥過(guò)40 目篩后與基礎(chǔ)日糧混勻,喂料方式采用人工喂料(每天08:00、14:00 各喂食1 次),自由飲水。試驗(yàn)雞采用半階梯式籠養(yǎng),試驗(yàn)前清理雞舍并消毒,每3~5 d 進(jìn)行1 次帶雞消毒,保證雞舍衛(wèi)生。
1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法
1.4.1 精液品質(zhì) 試驗(yàn)第28 天,禁食(12 h)不禁水一夜后,早上空腹采用腹背式按摩采精法采精,采集精液后立即用邁朗精子全自動(dòng)分析儀(mL-210JZ,南寧松景天倫生物科技有限公司)進(jìn)行分析。
1.4.2 激素濃度 試驗(yàn)第28 天,禁食不禁水一夜后,早上禁食12 h,空腹翅靜脈采血,公雞屠宰后取睪丸組織。睪酮(Testosterone,T)、催乳素(Prolactin,PRL)、雌二醇(Estradiol,E2)、促卵泡素(Follicle-Stimulating Hormone,F(xiàn)SH)、促黃體素(Luteinizing Hormone,LH)、孕激素(Progesterone,PROG)均使用ELISA 激素測(cè)定試劑盒(江萊生物公司)并按說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。
1.4.3 卵泡數(shù)量 記錄每天的產(chǎn)蛋數(shù)據(jù),第28 天屠宰母雞后記錄卵泡數(shù)量,采用數(shù)顯式游標(biāo)卡尺(蘇制02050123-1,無(wú)錫錫工量具有限公司)測(cè)量卵泡直徑后進(jìn)行分級(jí)。
1.4.4 種蛋孵化 試驗(yàn)結(jié)束后,各個(gè)重復(fù)收集60 枚合格種蛋經(jīng)恒溫孵化器進(jìn)行孵化,統(tǒng)計(jì)孵化率、種蛋受精率、健雛率等。
1.5 統(tǒng)計(jì)分析 所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS 22.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差表示,用ANOVA 過(guò)程進(jìn)行單因素方差分析,進(jìn)行線性和二次顯著性檢驗(yàn)分析。P<0.05 表示差異顯著,P>0.05 表示差異不顯著。
表1 基礎(chǔ)日糧成分及營(yíng)養(yǎng)成分(風(fēng)干基礎(chǔ))
2.1 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種公雞精液品質(zhì)的影響 由表2 可知,試驗(yàn)組的精子密度均高于對(duì)照組,其中1.0%、1.5% 復(fù)方中草藥添加劑組與對(duì)照組差異顯著。試驗(yàn)組的精子畸形率均顯著低于對(duì)照組,其中1.5%復(fù)方中草藥添加劑組最低。0.5%、1.0%、1.5%復(fù)方中草藥添加劑組比對(duì)照組分別低8.88%、13.79%、15.45%。0.5%復(fù)方中草藥添加劑組的精液量較對(duì)照組顯著增加,而1.0%、1.5%復(fù)方中草藥添加劑組與對(duì)照組差異不顯著。試驗(yàn)組精子活率均顯著高于對(duì)照組,其中0.5%復(fù)方中草藥添加劑組最高,較對(duì)照組提高5.83%。結(jié)果表明,在種公雞日糧中添加復(fù)方中草藥添加劑對(duì)精液品質(zhì)有顯著的提高作用。
表2 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種公雞精液品質(zhì)的影響(n=3)
2.2 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種公雞血漿和睪丸中睪酮濃度的影響 由表3 可知,與對(duì)照組相比,試驗(yàn)各組血漿睪酮濃度均有一定程度的提升,其中1.5%復(fù)方中草藥添加劑組顯著高于其他各組。與對(duì)照組相比,試驗(yàn)各組睪丸睪酮濃度均顯著提高,其中1.0%復(fù)方中草藥添加劑組最高。結(jié)果表明,在種公雞日糧中添加復(fù)方中草藥添加劑能提高睪酮濃度。
表3 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種公雞睪酮濃度的影響(n=3)pg/mL
2.3 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種母雞激素濃度的影響 據(jù)表4 可知,試驗(yàn)組種母雞血清中PRL 濃度較對(duì)照組顯著降低。試驗(yàn)組種母雞血清中E2、FSH、LH、PROG 濃度均較對(duì)照組提高,其中E2濃度試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組;0.5%復(fù)方中草藥添加劑組FSH 濃度與對(duì)照組差異不顯著,1.0%、1.5%復(fù)方中草藥添加劑組FSH 濃度顯著高于對(duì)照組;試驗(yàn)組LH、PROG 濃度顯著高于對(duì)照組,在種母雞日糧中添加復(fù)方中草藥添加劑能促進(jìn)促性腺激素分泌。
2.4 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)蛋雞卵泡發(fā)育及產(chǎn)蛋情況 由表5 可知,對(duì)照組的大卵泡直徑與0.5%復(fù)方中草藥添加劑組差異不顯著,顯著低于1.0%、1.5%復(fù)方中草藥添加劑組;對(duì)照組中黃卵泡的直徑顯著低于0.5%、1.5%復(fù)方中草藥添加劑組,與1.0%復(fù)方中草藥添加劑組差異不顯著。各組母雞卵巢卵泡發(fā)育情況見圖1。由表6可知,1.5% 復(fù)方中草藥添加劑組的總產(chǎn)蛋數(shù)顯著高于對(duì)照組,4 個(gè)處理組的蛋重?zé)o顯著差異。
2.5 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種蛋孵化效果的影響 由表7可知,試驗(yàn)組受精率、受精蛋孵化率、健雛率均顯著高于對(duì)照組,其中添加復(fù)方中草藥添加劑為1.0%組效果最好。
3.1 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種公雞的影響 有研究表明,睪酮可以刺激精子生成,提高精子密度及精液量、精子活率[11-12],精子活率與受精率的高低密切相關(guān)。睪酮通過(guò)對(duì)間質(zhì)細(xì)胞和支持細(xì)胞的調(diào)節(jié),為整個(gè)生精過(guò)程及精液儲(chǔ)存提供有利環(huán)境[13]。菟絲子中的黃酮可通過(guò)下調(diào)凋亡基因Fas、Fasl的表達(dá)而抑制生精細(xì)胞凋亡,從而提高精子活率、降低精子畸形率[14-15]。淫羊藿苷具有類似雄激素的功能,可促進(jìn)動(dòng)物精液生成,在提高睪酮激素方面具有潛在的作用[16]。巴戟天中的多聚糖可以緩解精子的氧化應(yīng)激反應(yīng),保護(hù)精子頂體的結(jié)構(gòu)和功能,提高精子運(yùn)動(dòng)能力和穿透能力[17]。本研究結(jié)果表明,由菟絲子、巴戟天、淫羊藿組成的復(fù)方中草藥添加劑可顯著提升種公雞的血漿睪酮及睪丸睪酮濃度,并顯著改善精液品質(zhì),提高了種蛋的孵化率,說(shuō)明該復(fù)方中草藥可顯著提高種公雞的繁殖性能。
3.2 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種母雞的影響 隨著種用時(shí)間的延長(zhǎng),母雞體內(nèi)生殖激素水平的變化是其種用性能降低的主要因素之一[18]。母雞產(chǎn)蛋是通過(guò)“下丘腦—垂體—性腺(卵巢)”來(lái)促進(jìn)或抑制相關(guān)激素的分泌調(diào)節(jié)的結(jié)果[19]。FSH 促進(jìn)卵泡生長(zhǎng),LH 促進(jìn)成熟卵泡排卵,抑制PRL 的分泌,并促進(jìn)卵巢分泌E2及PROG,促使雞輸卵管蠕動(dòng)運(yùn)輸成熟卵泡和蛋的形成;PRL 分泌量增加會(huì)抑制FSH、LH 分泌,導(dǎo)致排卵減少甚至停止,抑制卵巢分泌E2和PROG 等激素,促使母雞開始并持續(xù)就巢行為,停止排卵;另一方面卵巢分泌E2及PROG協(xié)同促使下丘腦、垂體釋放FSH、LH,繼而發(fā)生排卵,卵巢分泌E2和PROG 受到抑制后促使下丘腦、垂體釋放PRL,繼而發(fā)生就巢行為[20-22]。
表4 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種母雞血清激素濃度的影響(n=3)
表5 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)卵母細(xì)胞直徑的影響(n=3) mm
圖1 4 組母雞的卵巢圖片
表6 復(fù)方中草藥對(duì)種母雞產(chǎn)蛋數(shù)量的影響(n=3)
中草藥含有豐富的蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素、脂肪和礦物質(zhì),在營(yíng)養(yǎng)平衡、提高生長(zhǎng)性能和調(diào)節(jié)生理功能等方面發(fā)揮著重要作用[23]。張琴等[24]研究證實(shí),淫羊藿本身具有性激素、腎上腺皮質(zhì)激素樣作用,能激發(fā)卵巢激素分泌,繼而促使下丘腦、垂體釋放FSH、LH,抑制PRL 的分泌,增加成熟卵泡數(shù)量及產(chǎn)蛋量。巴戟天主要通過(guò)提高垂體對(duì)促卵泡素及促黃體素的調(diào)控來(lái)增強(qiáng)下丘腦垂體—性腺(卵巢)的功能,在家禽飼料中添加巴戟天寡糖后可改善生長(zhǎng)性能與健康狀況[25-26]。菟絲子黃酮對(duì)下丘腦—垂體—性腺軸功能具有多方面的影響。在雌性小鼠和大鼠中,菟絲子黃酮表現(xiàn)出雌激素樣活性,能提高成年大鼠腺垂體、卵巢和子宮的重量,能增強(qiáng)卵巢人絨毛膜促性腺激素促黃體生成素受體功能[27]。菟絲子的生物學(xué)作用及臨床療效與黃酮類化合物有關(guān),已知這些黃酮類物質(zhì)在結(jié)構(gòu)上與雌激素近似[6]。雞的產(chǎn)蛋性能主要取決于卵泡發(fā)育的狀況,母雞卵巢上的卵泡可以連續(xù)發(fā)育和成熟、排卵,每次排卵都相繼形成一個(gè)蛋并排出體外。產(chǎn)蛋量高的母雞卵巢上布滿葡萄串樣的體積大小不一、顏色或深或淺的卵泡[28-29]。本研究中,試驗(yàn)組的大黃卵泡比對(duì)照組多,中黃卵泡顯著數(shù)量顯著高于對(duì)照組,試驗(yàn)組的產(chǎn)蛋數(shù)也優(yōu)于對(duì)照組,可能是由于復(fù)方中草藥對(duì)機(jī)體進(jìn)行了一定修復(fù)并促進(jìn)“下丘腦—垂體—性腺(卵巢)”軸功能導(dǎo)致的產(chǎn)蛋量提高,繼而提高種用性能。本試驗(yàn)以1.5%劑量添加效果較好,1.5%組產(chǎn)蛋量顯著高于對(duì)照組。
表7 復(fù)方中草藥添加劑對(duì)種蛋孵化性能的影響(n=3) %
本試驗(yàn)結(jié)果表明,在貴州黃雞產(chǎn)蛋后期日糧中添加中草藥添加劑可促進(jìn)E2、FSH、LH、PROG 等激素的釋放以及提高卵泡數(shù)量和產(chǎn)蛋量,可顯著提高睪酮激素分泌及精液品質(zhì),提高種蛋受精率、孵化率,故可提高貴州黃雞的繁殖性能,可延長(zhǎng)種用時(shí)間,降低制種成本。