王 聰，靳 昌，郭小會

(1.甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，甘肅 武威 733006；2.甘肅省武威市涼州區(qū)四壩鎮(zhèn)人民政府)

近年來，由于抗生素作為飼料添加劑的濫用導(dǎo)致了藥物殘留、耐藥性等問題，尋找抗生素替代品已經(jīng)成為研究的熱點(diǎn)。益生菌可以直接飼喂動物并通過調(diào)節(jié)動物腸道微生態(tài)平衡達(dá)到預(yù)防疾病、促進(jìn)動物生長和提高飼料利用率的活性微生物或其培養(yǎng)物，又稱微生態(tài)制劑或飼用微生物添加劑。中草藥飼料添加劑是以中草藥及植物提取成分的活性物質(zhì)為原料加工調(diào)制而成，其具有天然、毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性和種類繁多而被廣泛用于動物生產(chǎn)中。由于中草藥添加劑和微生態(tài)制劑均具有綠色無污染、無殘留等特點(diǎn)，是替代抗生素的首選添加劑。因此，在畜牧生產(chǎn)中被廣泛應(yīng)用。研究結(jié)果表明，日糧中添加中藥-益生菌在一定程度上可提高蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)，并且能提高機(jī)體免疫機(jī)能。但中藥和益生菌的配伍種類較多，具體哪類中藥和益生菌配伍對蛋雞方面的研究較少，且最適宜的添加量還在研究中。因此，本文以參苓白術(shù)散加味(人參、茯苓、白術(shù)、山藥、薏苡仁、砂仁、桔梗、甘草)為組方中藥，枯草芽孢桿菌作為菌種進(jìn)行配比，研究其對海蘭褐蛋雞免疫機(jī)能的影響，并找到適宜的比例，以期為中藥-益生菌制劑的研制及其在養(yǎng)雞生產(chǎn)中的推廣應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 藥物來源 中藥購自甘肅傲農(nóng)飼料科技有限公司；益生菌購自武威市牛滿加藥業(yè)有限責(zé)任公司。

1.1.2 主要儀器 EX-TE-10型多功能中藥提取罐；BMR系列中式發(fā)酵罐。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 復(fù)方中藥制劑的制備 采用中草藥煮法。取黨參、白術(shù)、山藥各15 g，茯苓10 g，薏苡仁9 g，砂仁6 g，桔梗5 g，甘草6 g，清洗、除雜，加4 倍量水浸泡 2 h，煎煮 1 h，用雙層紗布過濾，藥渣再加 2 倍量水煎煮 30 min，再過濾，去除藥渣，合并 2 次藥液，用文火濃縮至生藥含量為 1 g/mL，高壓滅菌，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 復(fù)方中藥制劑的制備 枯草芽孢桿菌作為菌種。

1.2.3 中藥-益生菌制劑的制備 將上述復(fù)方中藥與益生菌制劑按照 1∶1 混合即得中藥-益生菌制劑。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計

選擇185日齡商品代海蘭褐蛋雞800羽(甘肅華寶農(nóng)牧科技有限公司種雞場)，隨機(jī)分為4組，每組2個重復(fù)，每個重復(fù) 100 只，A 組為對照組，僅飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧；B組為復(fù)方中藥組，在飼喂基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加 0.5%復(fù)方中藥；C 組為益生菌制劑組，在飼喂基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加0.3%益生菌制劑；D 組為中藥-益生菌制劑組，在飼喂基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加 0.3%中藥-益生菌復(fù)合制劑。預(yù)試期14 d，正試期35 d。

1.4 試驗(yàn)日糧與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，其日糧原料組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)雞在密閉式雞舍內(nèi)三層階梯式籠養(yǎng)，每3只雞1籠，自由采食、飲水，每日喂料3次，光照16 h，溫度18～23℃，其他管理措施按雞場常規(guī)管理進(jìn)行。各處理統(tǒng)一飼喂基礎(chǔ)日糧，預(yù)試期結(jié)束時統(tǒng)計各組生產(chǎn)性能，經(jīng)分析無顯著差異開始正式試驗(yàn)。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ)) %

1.5 測定指標(biāo)和方法

1.5.1 血清免疫球蛋白的測定 預(yù)試期和正試期結(jié)束后每個重復(fù)分別選擇平均體重相近的健康海蘭褐蛋雞2只，翅下靜脈采血5 mL，室溫靜止30 min后離心(3 500 r/min，10 min)制備血漿，分裝離心管中，—20℃保存。用ELISA試劑盒測定血清中IgA、IgG和IgM(試劑盒購于北京方程生物有限公司)。

1.5.2 免疫器官指數(shù)的測定 試驗(yàn)期結(jié)束，每重復(fù)取2只體重相近的蛋雞頸部放血屠宰后剖取胸腺、脾臟和法氏囊，分別稱重，并計算器官絕對重量和指數(shù)。

胸腺指數(shù)=胸腺濕重/體重×100

脾臟指數(shù)=脾臟濕重/體重×100

法氏囊指數(shù)=法氏囊濕重/體重×100

1.6 統(tǒng)計分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 Microsoft Excel 軟件整理，SPSS18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析，并進(jìn)行LSD 法多重比較，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理組對蛋雞血清免疫球蛋白的影響

由表2可見，D組的IgA和IgG含量顯著高于A、B、C組(P<0.01)，B和C組IgA含量顯著高于A組(P<0.05)，但B和C組間差異不顯著(P>0.05)；C組IgG含量顯著高于A和B組(P<0.05)，但A和B組間差異不顯著(P>0.05)；B、C和D組IgM含量顯著高于A組(P<0.05)，但B、C和D組間差異不顯著(P>0.05)。由此可知，D組對海蘭褐蛋雞血清免疫球蛋白含量均有所提高，可提高機(jī)體免疫功能。

表2 中藥-益生菌制劑對海蘭褐蛋雞血清免疫球蛋白的影響 g/L

2.2 不同處理組對蛋雞免疫器官重量和免疫指數(shù)的影響

由表3可知，D組脾臟重顯著高于A、B和C組(P<0.05)，且A、B和C組間差異不顯著(P>0.05)；D組法氏囊重和胸腺重極顯著高于A、B和C組(P<0.01)。D組脾臟指數(shù)顯著高于其他三組(P<0.05)，法氏囊指數(shù)和胸腺指數(shù)極顯著高于其他三組(P<0.01)。由此可知，D組可在一定程度上提高蛋雞的免疫機(jī)能。

表3 中藥-益生菌制劑對海蘭褐蛋雞免疫器官重量和免疫器官指數(shù)的影響

3 結(jié)果與討論

3.1 中藥-益生菌制劑對蛋雞血清免疫球蛋白的影響

中草藥和益生菌添加劑均屬于一種綠色新型飼料添加劑，可替代抗生素使用，能提高動物的生產(chǎn)性能，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，并且能減少動物的應(yīng)激反應(yīng)。師寧寧等用中藥散劑與枯草芽孢桿菌合生元飼喂蛋雞，可具有改善蛋雞生產(chǎn)性能，提高蛋雞蛋品質(zhì)的作用；中草藥添加劑還可減少蛋雞和肉雞的熱應(yīng)激，提高經(jīng)濟(jì)效益的作用。血清免疫球蛋白是反映動物體液免疫功能的指標(biāo)。本研究表明，與對照組相比，試驗(yàn)組的IgA、IgG和IgM含量均在一定程度上有所提高，但復(fù)合中藥-益生菌組的免疫球蛋白指標(biāo)含量均比其他組高，這說明復(fù)合中藥-益生菌能顯著提高蛋雞的體液免疫功能。范秋麗等人研究結(jié)果表明，添加枯草芽孢桿菌組的IgA、IgG和IgM含量均高于其他各組，可替代抗生素改善腸道健康，同時可提高機(jī)體的免疫機(jī)能；郭軍蕊等在蛋雞日糧中添加不同濃度枯草芽孢桿菌，結(jié)果表明添加枯草芽孢桿菌組的IgA、IgG和IgM含量顯著升高(P<0.05)。這與本試驗(yàn)益生菌組的IgA、IgG和IgM含量均比對照組高的結(jié)果一致。黨參、白術(shù)、山藥、茯苓、薏苡仁、砂仁、桔梗和甘草均具有健脾益肺功能。劉海峰將黃芪、黨參、當(dāng)歸等飼喂肉雞，結(jié)果表明復(fù)方中藥制劑可提高肉雞的免疫性能并能減少應(yīng)激；同時中藥制劑也能提高海蘭褐蛋雞的免疫機(jī)能。中藥和益生菌均能提高蛋雞的生產(chǎn)性能和免疫機(jī)能，本試驗(yàn)中枯草芽孢桿菌調(diào)節(jié)腸道菌群，促進(jìn)消化，與中草藥可協(xié)同共同激活免疫細(xì)胞，增強(qiáng)機(jī)體免疫力。據(jù)報道，白術(shù)多糖和枯草芽孢桿菌具有協(xié)同作用，可提高對育成期蛋雞的血清免疫指標(biāo)，故與本試驗(yàn)中草藥-益生菌組效果最好一致。目前對于復(fù)合中藥-益生菌的種類方面研究報道較少，還需進(jìn)一步研究，從而找到最適配方。

3.2 中藥-益生菌制劑對蛋雞免疫器官重量和免疫器官指數(shù)的影響

胸腺、法氏囊和脾臟是動物的免疫器官。免疫器官的重量在一定程度上可以反映免疫器官內(nèi)淋巴細(xì)胞的數(shù)量，從而間接了解體內(nèi)淋巴細(xì)胞總體水平對細(xì)胞免疫和體液免疫的促進(jìn)作用。免疫器官的重量越大，機(jī)體免疫機(jī)能越高，重量減小，則機(jī)體的免疫狀況越差。免疫器官指數(shù)可以反映免疫器官的發(fā)育和免疫細(xì)胞的功能狀況，間接反映了機(jī)體免疫水平。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，3個試驗(yàn)組的免疫器官重量和免疫器官指數(shù)均比對照組高，這說明無論是中草藥組還是益生菌組都可以提高機(jī)體的免疫水平，且中草藥-益生菌組聯(lián)合效果更好?？莶菅挎邨U菌是一種無毒、無殘留、無耐藥性的綠色新型添加劑，具有增強(qiáng)動物機(jī)體免疫力、抵抗疾病，同時可改善動物腸道健康等作用。研究結(jié)果表明，與對照組相比，日糧中添加枯草芽孢桿菌組可提高機(jī)體免疫器官指數(shù)(P<0.01)。中藥具有毒副作用小、殘留量低、來源廣泛、價格低廉等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)被用來替代抗生素而廣泛應(yīng)用，可防治疾病，增加機(jī)體抵抗力。陳雁南等研究結(jié)果表明，添加不同水平的中草藥對早期免疫器官的發(fā)育有促進(jìn)作用，脾臟重及其指數(shù)、法氏囊重及其指數(shù)顯著提高(P<0.05)；本試驗(yàn)所選用的中草藥黨參可增強(qiáng)機(jī)體免疫力。王鐵崗等研究潞黨參煎劑和左旋咪唑?qū)Φ半u禽流感抗體效價和免疫器官指數(shù)的影響，結(jié)果表明，潞黨參可提高免疫器官指數(shù)，促進(jìn)免疫器官的發(fā)育。不論是枯草芽孢桿菌還是中草藥都具有提高機(jī)體免疫力之功效，故兩者協(xié)同效果更好。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)復(fù)合中草藥-益生菌組可提高機(jī)體的IgA、IgG和IgM含量，并可促進(jìn)免疫器官發(fā)育，兩者協(xié)同效果比單獨(dú)使用效果好。