趙 霞，烏仁圖亞，蘇雅拉圖，吉林臺

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)農(nóng)牧業(yè)科學院 內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031；2.赤峰市巴林左旗畜牧工作站；3.赤峰市巴林左旗烏蘭達壩蘇木動物防疫站；4.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學)

隨著人民生活水平的提高及人們對肉類消費需求量的不斷上升，對羊肉的需求量也逐年增加。這種需求使得肉羊生產(chǎn)方式發(fā)生變化，已經(jīng)向集約化、工廠化方向轉(zhuǎn)變。但規(guī)模化生產(chǎn)肉羊仍然存在諸多的實際問題，如目前國內(nèi)大部分技術(shù)人員依靠進口超數(shù)排卵藥物和器械，使得胚胎移植成本提高以及肉羊擴大繁育技術(shù)成本高，導致導致該技術(shù)不能大面積推廣而擴繁技術(shù)落后、規(guī)?；a(chǎn)程度低，無法適時滿足市場需求等弊端。在肉羊生產(chǎn)當中超數(shù)排卵、同期發(fā)情、胚胎移植等技術(shù)可以快速擴大繁殖優(yōu)質(zhì)種羊，在短時間內(nèi)增加現(xiàn)有優(yōu)秀種羊數(shù)量，為改良地方品種提供充足的優(yōu)良種羊，利用雜交優(yōu)勢生產(chǎn)羔羊，提高我國肉羊生產(chǎn)水平之不可或缺的一項。促卵泡激素(FSH)是垂體前葉嗜堿性細胞分泌的一種激素，成分為糖蛋白，主要作用為促進卵泡成熟。促卵泡激素可促進卵泡顆粒層細胞增生分化，并促進整個卵巢長大。而LH可使卵母細胞恢復(fù)減數(shù)分裂、成熟卵泡分泌PGF2a，進而促進卵泡膜細胞釋放膠原酶而溶解局部組織，當LH釋放達到高峰時發(fā)生排卵，因此認為，超數(shù)排卵的過程就是應(yīng)用超過體內(nèi)正常水平的外源性促卵泡激素，使將要轉(zhuǎn)化為閉鎖卵泡的有腔卵泡發(fā)育成熟而排卵，所以上述FSH和LH常用于家畜生產(chǎn)中的超數(shù)排卵。目前在生產(chǎn)上主要采用成本較高的進口FSH而國產(chǎn)FSH被冷落，本研究對上述兩種FSH的超排卵作用及其授精卵的受胎率進行對比，為將來全部使用國產(chǎn)藥品降低超數(shù)排卵成本，以及為胚胎移植技術(shù)走向產(chǎn)業(yè)化發(fā)展及肉羊生產(chǎn)的產(chǎn)業(yè)化提供有利的理論依據(jù)。

1 材料

1.1 供體羊

赤峰市巴林右旗養(yǎng)殖戶選取選擇繁殖機能正常、體質(zhì)健壯、營養(yǎng)狀況良好，膘情中等以上的適齡母羊，并在預(yù)試期內(nèi)完成驅(qū)蟲和常規(guī)防疫注射。實驗在巴林右旗養(yǎng)殖戶進行。

1.2 受體羊的選擇

選擇養(yǎng)殖戶2～3歲經(jīng)產(chǎn)、健康、無繁殖障礙及生殖系統(tǒng)疾病的母羊為受體。

1.3 實驗用藥

垂體促卵泡素(FSH)規(guī)格100IU/支、人工合成促性腺激素釋放激素(GnRH)規(guī)格100 ug/支，均購買自寧波第二激素廠;超數(shù)排卵藥物FSH由加拿大(400 mg/20mL/支)、寧波激素(100 IU/支)生產(chǎn)。注射用垂體促黃體素(LH，200IU/支)、PMSG(1 000 IU/支)、孕酮海綿栓(42 mg/支)均由寧波第二激素制品有限公司生產(chǎn)，胚胎保存液(新西蘭進口)，青霉素，生理鹽水，碘酊，酒精，新潔爾滅等相關(guān)耗材。

1.4 試驗用器材

羊胚胎移植用手術(shù)架(自制)，子宮角輸精器(德國)，腹腔鏡(德國)，實體顯微鏡，沖卵撿胚針，移植針，持針器，手術(shù)刀，手術(shù)用剪刀，縫合針及線，注射器。

2 方法

2.1 供體羊的超數(shù)排卵處理

采用常規(guī)遞減注射法進行超數(shù)排卵處理。任選1天給供體羊陰道內(nèi)放置孕酮陰道栓，放置陰道栓后的第13～14 d開始每天分上、下午按體重肌肉注射FSH。選用國產(chǎn)和進口兩種FSH，各分3組進行劑量遞減注射3 d。注射3 d國產(chǎn)FSH總劑量為160～220 IU、發(fā)現(xiàn)發(fā)情時注射120～160 IU 的LH；而注射3 d進口FSH總劑量為8～14 mL，且不需要注射LH。在超數(shù)排卵的第3 d早上(第五針的時候)取出陰道栓，晚上注FSH之前用試情公羊進行試情，如發(fā)情停止注射第六針。

2.2 供體羊的試情、配種

取栓后的12～24 h開始試情，早晚各1次。并對發(fā)情羊做標記，記錄好發(fā)情時間。腹腔鏡輸精的羊輸精前24 h開始空腹，發(fā)情后的30～36 h進行腹腔鏡輸精。

2.3 供體羊胚胎采集

供體羊發(fā)情后的72～80 h，用輸卵管沖卵法采集2～4細胞期的胚胎。將供體羊仰臥手術(shù)架上保定好，手術(shù)部位按常規(guī)方法消毒并切口，在骨盆腔、膀胱周圍觸摸到子宮角，將其牽引出切口外，先觀察記錄卵巢表面黃體數(shù)量及濾泡數(shù)量。將裝有5～10 ml生理鹽水，連有頭皮針的注射器，從子宮和輸卵管的結(jié)合部扎入，針尖到達輸卵管的狹部后用手指抓緊輸卵管及扎入的針頭，將軟硅膠管或剪去針頭的頭皮針管，從輸卵管喇叭口約插入3～4 cm，遠端與表面皿銜接(但沖卵管不能與回收的沖卵液液面接觸)，回收注入輸卵管的沖卵液。并在實體顯微鏡下檢查回收的胚胎質(zhì)量、數(shù)量及胚胎發(fā)育情況。

2.4 受體羊的同期發(fā)情和管理

母羊陰道內(nèi)放置孕酮陰道栓10～14 d，之后的任何一天取出栓(超數(shù)排卵供體羊與胚胎移植受體羊在數(shù)量上按比例同時取栓)，同時肌肉注射血促性素(PMSG)330 IU/只。受體羊移植手術(shù)前空腹24 h。

2.5 受體羊胚胎移植

把采集到的可用胚胎用相應(yīng)的手術(shù)方法移植到同期發(fā)情處理的發(fā)情同步差在±24 h以內(nèi)的受體羊體內(nèi)。胚胎移植后40 d左右B型超聲波檢測儀鑒定其受胎率。

2.6 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)處理采用單因素方差分析(ANOVA)法，P<0.05為差異顯著。

3 結(jié)果與討論

3.1 國產(chǎn)和進口不同F(xiàn)SH對超數(shù)排卵效果的影響

此次試驗在乏情季節(jié)6月中旬在同一地點、同一飼養(yǎng)管理條件下，將用兩種同來源的FSH進行超數(shù)排卵的供體羊隨機各分3個組實施如表1所示。

表1 國產(chǎn)及進口FSH對超數(shù)排卵效果和成本對比

3.2 受體羊胚胎移植

因使用生理鹽水進行沖胚，所以只把沖出來的部分A級胚胎移植到了48只受體羊體內(nèi)，如表2所示，同樣也取得了較好的產(chǎn)羔率。

表2 受體羊胚胎移植產(chǎn)羔情況

3.3 討論

種羊的優(yōu)劣是決定肉羊業(yè)健康、持續(xù)、穩(wěn)步發(fā)展的關(guān)鍵所在。優(yōu)質(zhì)種羊是肉羊產(chǎn)業(yè)有效發(fā)展的基礎(chǔ)。但目前肉羊行業(yè)管理混亂，缺少政策規(guī)劃和技術(shù)指導的情況下任意炒作特定品種、以次充好、假冒偽劣猖獗等現(xiàn)象很普遍；再加上國內(nèi)沒有專門化生產(chǎn)牛、羊胚胎移植所需產(chǎn)品的專業(yè)廠家，移植所需用品及超數(shù)排卵藥品都依賴于進口，使得胚胎移植成本提高，導致該項技術(shù)在畜牧業(yè)生產(chǎn)中不能像人工輸精一樣廣泛推廣和應(yīng)用。

胚胎移植技術(shù)是對優(yōu)秀的母畜進行超數(shù)排卵處理后，把超出自然排卵數(shù)量的幾倍甚至幾十倍的受精卵取出，移植到普通母畜體內(nèi)，使之產(chǎn)出優(yōu)秀后代的技術(shù)。利用這個技術(shù)很快擴大繁育優(yōu)秀母畜和公畜，迅速提高群體的品質(zhì)，為改良地方品種提供充足優(yōu)秀種源，大大減少了直接引進大批公母畜所需的資金投入。

該研究中我們?yōu)榱丝焖贁U大現(xiàn)有優(yōu)秀種公羊數(shù)量的同時降低超數(shù)排卵成本、對供體羊年齡、體重、胎次、膘情、超數(shù)排卵季節(jié)等因素進行綜合評估的基礎(chǔ)上，分別采用國產(chǎn)和進口FSH進行超數(shù)排卵，之后對生產(chǎn)的受精卵的品質(zhì)、受胎率等進行了比較研究。在同一地點、同一時間、同一管理條件下飼養(yǎng)的羊只進行隨機分組，根據(jù)羊只的體重等個體差異注射不同劑量的FSH進行超數(shù)排卵處理，使每組供體羊在自己最適宜的激素劑量下均獲得了較好的超數(shù)排卵效果。如表1所示，分別使用國產(chǎn)和進口FSH進行超數(shù)排卵的供體羊均得到了較好的超數(shù)排卵效果。其中國產(chǎn)FSH處理的第二組供體羊中兩只羊表現(xiàn)發(fā)情不穩(wěn)定、進口FSH處理的供體羊中也有兩只推遲發(fā)情的羊，但我們?yōu)槿〉猛暾囼灁?shù)據(jù)仍按常規(guī)進行腹腔鏡輸精，繼而進行采胚，所以采集到了未受精卵。

當我們進行大規(guī)模生產(chǎn)胚胎時，必須準確掌握供體羊的年齡、體重、繁殖性能，并按其個體差異、超數(shù)排卵季節(jié)等不同條件給予每個供體羊最適宜劑量的FSH、同時淘汰發(fā)情不穩(wěn)定、推遲發(fā)情的供體羊，從而大幅度提高超數(shù)排卵效率，使得每一只供體羊都能夠超數(shù)排卵成功，提高供體羊的利用率。不同來源(如不同廠家、不同原料)的激素制品，由于其制造工藝和提純方法的不同其純度與所含的有效成分不同、效價測定造成的誤差、以及保存溫度對生物活性的影響等都可能其效果。因此，為慎重起見，在一批激素大量使用以前，最好先做預(yù)備試驗，根據(jù)試驗情況，對這批激素的效價進行評估后，再進行大量使用為好。

試驗中為降低成本我們嘗試性使用生理鹽水沖卵，試驗結(jié)果顯示，移植后同樣獲得了較好的產(chǎn)羔率。生理鹽水，又稱為無菌生理鹽水，是指生理學實驗或臨床上常用的滲透壓與動物或人體血漿的滲透壓基本相等的氯化鈉溶液。用于哺乳類動物和人體時是0.85 %～0.9 %。其滲透壓與人體血液近似，鈉的含量也與血漿相近，但氯離子的含量卻明顯高于血漿內(nèi)氯離子的含量，因此生理鹽水只是比較地合乎生理，其用途為供給電解質(zhì)和維持體液的張力。所以0.9 %的生理鹽水可維持細胞的正常形態(tài)。

但值得注意的是使用生理鹽水沖胚時，胚胎所需的營養(yǎng)物質(zhì)如葡萄糖、牛血清白蛋白等的缺失，無法供給胚胎所需的營養(yǎng)環(huán)境；但在缺乏專用沖卵液的情況下，如果術(shù)者、撿胚者技術(shù)熟練，并增加胚胎在胚胎保存液中的沖洗次數(shù)、盡量做到胚胎的操作在無污染環(huán)境中進行，同樣也可獲得較好的產(chǎn)羔率。

本研究中用國產(chǎn)藥物代替進口超數(shù)排卵藥物進行超數(shù)排卵，每只供體羊所需FSH費用由1 200元左右降低到140元左右、每只受體羊同期發(fā)情費用由20元左右降低到15元左右元；試驗根據(jù)以往的經(jīng)驗指定了合理用藥方案(進口、國產(chǎn)FSH)平均采集胚胎數(shù)量均提高到10枚以上；已經(jīng)達到國產(chǎn)藥完全替代高成本進口藥的目的，并減少了80 %～85 %的購藥支出,權(quán)福生(2010)的研究也曾經(jīng)提倡過用國產(chǎn)藥物替代進口藥物。本研究中對胚胎移植所需用品(除了胚胎保存液)全部使用國產(chǎn)藥品，為使羊胚胎移植技術(shù)可以用最低成本，像人工輸精技術(shù)一樣推廣應(yīng)于廣大農(nóng)牧民畜牧業(yè)生產(chǎn)中在最短的時間內(nèi)加快純種擴繁，提高良種化程度，盡快實現(xiàn)肉羊的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)、規(guī)?；a(chǎn)胚胎提供了較可靠的數(shù)據(jù)。