安 哲，屈 夢，盧 潔，張 婷，秦瑞鴻，董 煒

西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗科，陜西西安 710004

定量檢測乙型肝炎表面抗原(HBsAg)對乙型肝炎病毒(HBV)感染者具有診斷、療效監(jiān)控、預(yù)后判斷等臨床價值[1-2]。HBsAg低水平(HBsAg<100.00 IU/mL)時，發(fā)生HBsAg血清學(xué)免疫應(yīng)答的概率可達(dá)52%[3]。因此，HBsAg低水平對慢性HBV感染者預(yù)后判斷具有重要意義。本文主要從臨床實驗室角度對HBsAg低水平時HBV血清標(biāo)志物的變化進(jìn)行研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2019年1—12月在西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院臨床實驗室進(jìn)行HBV-M定量檢測且HBsAg≥0.05 IU/mL的陽性標(biāo)本9 972例為研究對象。

1.2儀器與試劑 所有標(biāo)本均為空腹采集外周靜脈血，3 500 r/min離心分離血清，當(dāng)日或次日完成檢測。HBV-M定量檢測試劑盒(CMIA)購自美國雅培公司。檢測儀器采用美國雅培公司的Alinity化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。HBV DNA檢測采用PE5700核酸擴增儀，試劑采用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的HBV核酸定量檢測試劑盒；高速離心機采用上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)的高速冷凍臺式離心機(型號TGL-16G)。

1.3方法 采用化學(xué)發(fā)光法檢測HBV-M，PCR法檢測HBV DNA。初檢HBsAg<0.50 IU/mL時，對標(biāo)本進(jìn)行高速離心后復(fù)檢，以復(fù)檢結(jié)果為最終結(jié)果。HBV-M的陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：HBsAg≥0.05 IU/mL，抗HBs≥10.0 mIU/mL，HBeAg≥1.0 S/CO，抗HBe≤1.0 S/CO，抗HBc≥1.0 S/CO。模式的表達(dá)采用慣用模式：即以數(shù)字1、2、3、4、5分別代表HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc，模式名稱以陽性結(jié)果所對應(yīng)的數(shù)字進(jìn)行描述，如單獨抗HBs陽性模式描述為單“2”模式。以HBsAg<100.00 IU/mL(2 log IU/mL)為低水平，分為HBsAg<0 log IU/mL、0～<1 log IU/mL、1～<2 log IU/mL 3個亞組；以HBsAg≥100.00 IU/mL(2 log IU/mL)為高水平，分為2～<3 log IU/mL、3～<4 log IU/mL、≥4 log IU/mL 3個亞組。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料以率或構(gòu)成比(%)表示，不同標(biāo)本率的比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1HBsAg低水平標(biāo)本的HBV-M模式 9 972例HBsAg陽性標(biāo)本中，HBsAg高水平(≥2 log IU/mL)8 021例，占80.44%；HBsAg低水平(<2 log IU/mL)1 951例，占19.56%。1 951例HBsAg低水平標(biāo)本檢出HBV-M模式11種；各模式及其構(gòu)成比見圖1。

圖1 HBsAg低水平標(biāo)本的HBV-M模式

2.2HBsAg不同水平組的HBV-M表達(dá)結(jié)果分析 HBsAg低水平組標(biāo)本抗HBc陰性率為0.82%(16/1 951)，HBeAg陽性率為6.00%(117/1 951)，抗HBs陽性率為8.97%(175/1 951)；HBsAg高水平組標(biāo)本抗HBc陰性率為0.37%(30/8 021)，HBeAg陽性率為34.42%(2 761/8 021)，抗HBs陽性率為2.29%(184/8 021)。兩組HBV-M表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 HBsAg不同水平組HBV-M表達(dá)的差異[n(%)]

按HBsAg水平由低到高，6個亞組的抗HBc陰性率分別為3.69%、0.21%、0.18%、0.08%、0.12%、1.70%，在低水平組呈下降趨勢，在高水平組呈增高趨勢，見圖2。6個亞組的HBeAg陽性率分別為2.56%、5.10%、7.45%、18.12%、32.67%、70.41%，呈逐漸升高趨勢，見圖3。6個亞組的抗HBs陽性率分別為13.35%、11.68%、6.47%、3.10%、2.09%、1.40%，呈逐漸下降趨勢，見圖4。

2.3HBsAg低水平時抗HBs和HBeAg之間的關(guān)系 比較亞組內(nèi)不同HBeAg水平抗HBs陽性率，<0 log IU/mL、0～<1 log IU/mL、1～<2 log IU/mL、2～<3 log IU/mL、3～<4 log IU/mL 5個亞組內(nèi)不同HBeAg水平抗HBs陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；≥4.00 log IU/mL亞組內(nèi)不同HBeAg水平抗HBs陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

2.4HBsAg陽性且抗HBc陰性病例的HBV-M特征 HBsAg陽性且抗HBc陰性病例46例，其中HBsAg低水平組16例，HBsAg高水平組30例。16例HBsAg低水平標(biāo)本中“13”模式1例，其HBsAg為54.16 IU/mL；“1”模式11例，“12”模式4例；HBV DNA陽性1例(6.25%)。30例HBsAg高水平標(biāo)本中“13”模式29例，“14”模式1例；HBV DNA陽性30例(100.00%)。兩組HBV DNA陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=-6.39,P=0.000)。

圖2 不同HBsAg水平的抗HBc陰性率

圖3 不同HBsAg水平的HBeAg陽性率

圖4 不同HBsAg水平的抗HBs陽性率

表2 同一HBsAg水平組不同HBeAg水平對抗HBs陽性率的影響

3 討 論

慢性乙型肝炎是威脅人類健康的一種常見傳染性疾病，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，全球目前約有2.5億HBV感染者，我國是HBV高流行區(qū)，約有9 000多萬HBV感染者，其中2 000萬為慢性乙型肝炎患者[2]。

HBsAg是HBV最重要的血清標(biāo)志物。目前，以化學(xué)發(fā)光發(fā)原理為基礎(chǔ)的自動化免疫分析儀可以實現(xiàn)HBsAg定量檢測。HBsAg<100.00 IU/mL判斷為HBsAg低水平，是基于以HBV DNA<1×102IU/mL且HBsAg<100.00 IU/mL為慢性HBsAg攜帶者的診斷臨界值時，具有良好的陰性預(yù)測值，3年隨訪，發(fā)生HBsAg血清學(xué)免疫應(yīng)答的概率可達(dá)52%[3]。但臨床發(fā)現(xiàn)少數(shù)HBsAg低水平的HBV感染者表現(xiàn)出明顯的病毒復(fù)制狀態(tài)。以S基因突變逃逸為最主要原因的HBsAg/抗HBs共存現(xiàn)象也多見于HBsAg低水平特別是極低水平的HBV感染者[4]。本研究旨在探討HBV感染者HBsAg低水平的血清學(xué)模式和臨床價值。

本研究中HBsAg低水平標(biāo)本1 951例，占19.56%；HBsAg低水平檢出HBV-M模式11種，其中檢出率≥1.00%的有5種，依次為“145”模式(76.47%)、“15”模式(9.99%)、“1245”模式(6.00%)、“135”模式(3.28%)、“1235”模式(1.85%)，其余6種模式共計2.41%。

抗HBc是HBV感染的一個重要指標(biāo)，大多數(shù)現(xiàn)癥HBV感染者和既往感染者均呈抗HBc陽性，極少數(shù)HBV早期感染者和免疫缺陷患者可能出現(xiàn)HBsAg陽性而抗HBc陰性情況。研究發(fā)現(xiàn),HBsAg低水平組的抗HBc陰性率明顯高于HBsAg低水平組的抗HBc陰性率(0.82%vs.0.37%)，HBsAg高水平組的抗HBc陰性率隨HBsAg水平增高而增高，但在HBsAg低水平病例中，抗HBc陰性率隨HBsAg水平降低而增高；探索其中原因可能與下列因素有關(guān)：(1)HBV早期感染大多呈“13”模式且HBsAg多為高水平，此時抗HBc尚未產(chǎn)生或水平較低尚未達(dá)到檢測限；(2)HBsAg低水平時抗HBc陰性可能與HBsAg假陽性有關(guān)[5]。

HBeAg可以間接反映HBV DNA的復(fù)制水平。HBeAg陽性率隨HBsAg水平下降而下降，在HBsAg低水平組明顯低于在HBsAg高水平組(6.00%vs.34.42%)。無論HBsAg多低都存在HBeAg陽性病例；與之密切關(guān)聯(lián)的是抗HBs水平，在HBsAg低水平病例中抗HBs≥100.00 mIU/mL多提示發(fā)生HBV-S區(qū)突變或表型變異[4,6-7]。本次研究顯示，HBsAg低水平組抗HBs陽性率明顯高于HBsAg高水平組的抗HBs陽性率(8.97%vs.2.29%),且在HBsAg同一水平組內(nèi)，HBeAg陽性病例的抗HBs陽性率明顯高于HBeAg陰性病例的抗HBs陽性率。在HBsAg低水平時，HBeAg陽性病例的抗HBs陽性率高達(dá)66.67%。

HBV DNA是反映病毒復(fù)制的直接指標(biāo)，檢測抗HBc陰性病例的HBV DNA水平，結(jié)果顯示HBsAg高水平組HBV DNA陽性率明顯高于HBsAg低水平組。當(dāng)抗HBc陰性時HBsAg低水平應(yīng)更多考慮HBsAg假陽性問題，如設(shè)立灰區(qū)[8-9]，或者對初檢HBsAg低水平可通過高速離心降低假陽性率[10]，也可采用第2種檢測平臺或檢測試劑進(jìn)行復(fù)檢[11]。當(dāng)抗HBc陽性時HBsAg低水平除獲得有效治療患者外，應(yīng)考慮HBV-S區(qū)突變或表型變異[12-13]。