覃意往，莫梅香，張龍炯，羅銀亞，韋良銀，胡季芳，魯衍強(qiáng)*

(1.荔波縣人民醫(yī)院 婦產(chǎn)科，貴州 黔南布依族苗族自治州 558400； 2.上海張江普匯轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究院 項(xiàng)目辦公室，上海 201314)

葉酸是人體重要的營(yíng)養(yǎng)素，葉酸攝入不足或代謝障礙會(huì)造成體內(nèi)同型半胱氨酸升高和甲基化降低。孕期葉酸營(yíng)養(yǎng)不足會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)管畸形[1]、先天性心臟病[2]、唐氏綜合征[3]、唇腭裂[4]等出生缺陷，并與流產(chǎn)[5]、早產(chǎn)[6]等不良妊娠結(jié)局以及妊娠期糖尿病[7]、妊娠期高血壓[8]等疾病密切相關(guān)。5, 10-亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase ，MTHFR)和甲硫氨酸合成酶還原酶(methionine synthase reductase，MTRR)是葉酸代謝通路中的關(guān)鍵酶，基因多態(tài)性決定了不同的酶活性以及葉酸利用能力。本研究針對(duì)荔波縣漢族和布依族女性開(kāi)展分子流行病學(xué)調(diào)查，研究MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G的基因多態(tài)性分布，獲取本地區(qū)的群體遺傳學(xué)特征。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2017年7月至2020年1月在荔波縣人民醫(yī)院進(jìn)行圍孕期保健的育齡健康女性，依據(jù)知情同意原則采集口腔黏膜細(xì)胞。本研究已獲得中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院生命倫理研究中心批準(zhǔn)。入組對(duì)象共1 342人，其中漢族236人，布依族1 106人。

1.2 檢測(cè)方法

利用硅膠吸附法提取口腔黏膜細(xì)胞樣本的基因組DNA。采用熒光定量PCR技術(shù)，檢測(cè)MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G基因多態(tài)性。相關(guān)儀器、試劑(ABI公司)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用HaploView4.2軟件進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)的Hardy-Weinberg平衡、連鎖不平衡水平(linkage disequili-brium ，LD)分析。SPSS19.0軟件分析基因型和等位基因頻率。

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg平衡分析

入組對(duì)象的MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G基因多態(tài)性分布符合遺傳平衡(表1)。說(shuō)明數(shù)據(jù)來(lái)自同一孟德?tīng)柸后w，樣本具有群體代表性。

表1 Hardy-Weinberg平衡分析Table 1 Hardy-Weinberg equilibrium analysis(n)

2.2 基因型頻率分析

與漢族女性相比，布依族女性MTHFRC677T、A1298C的基因型頻率有差異(P<0.05)，MTRRA66G的基因型頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2)。

表2 漢族、布依族女性MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因型頻率Table 2 MTHFR C677T, A1298C, and MTRR A66G genotype frequencies of Han and Buyi women[n(%)]

2.3 等位基因頻率分析

與漢族女性相比，布依族女性MTHFRC677T、A1298C的等位基因頻率有差異(P<0.05)，MTRRA66G等位基因頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3)。

表3 漢族、布依族女性MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G等位基因頻率Table 3 Allele frequencies of MTHFR C677T, A1298C, and MTRR A66G for Han and Buyi women [n(%)]

2.4 MTHFR C677T和A1298C連鎖及單倍型分析

MTHFRC677T和A1298C兩位點(diǎn)連鎖情況(表4，5)。漢族和布依族女性均有6種組合，沒(méi)有CT/CC、TT/AC和TT/CC。漢族女性頻率最高的是CT/AA，布依族女性頻率最高的是CC/AC。

表4 漢族女性MTHFR C677T和A1298C連鎖型分布Table 4 Han women’s MTHFR C677T and A1298C linkage distributions(n,%)

表5 布依族女性MTHFR C677T和A1298C連鎖型分布Table 5 MTHFR C677T and A1298C-linked distributions of Buyi women

漢族和布依族女性MTHFRC677T和A1298C兩個(gè)位點(diǎn)構(gòu)建的單倍型均存在3種組合：CA、TA、CC，兩位點(diǎn)間存在完全連鎖不平衡(表6)。

表6 漢族、布依族女性MTHFR C677T和A1298C的單倍型分布頻率Table 6 Haplotype distribution frequencies of MTHFR C677T and A1298C for Han and Buyi women(%)

3 討論

THFR和MTRR的基因多態(tài)性分布具有地域和民族差異[9]。近年來(lái)該領(lǐng)域的報(bào)道大多為漢族人群。中國(guó)布依族總?cè)丝谟?87萬(wàn)余人，97%分布在貴州省。荔波縣隸屬黔南布依族苗族自治州，布依族占全縣人口的65%。本研究顯示，荔波縣布依族女性MTHFR677TT基因型頻率(4.4%)低于漢族女性(10.6%)，MTHFR1298CC基因型頻率(9.7%)高于漢族女性(4.7%)，MTRR66GG基因型頻率(7.1%)高于漢族女性(5.9%)。荔波縣漢族女性風(fēng)險(xiǎn)基因型MTHFR677TT的頻率為10.6%，677T等位基因頻率為30.5%，均高于已有報(bào)道的廣東佛山市[10](5.6%，21.5%)、廣西南寧市(7.7%，24.2%)[11]，低于河北廊坊市[12](37.8%，60.9%)、河南新鄉(xiāng)市[13](38.9%，62.0%)、山東淄博市[14](43.6%，65.6%)等地，這些研究調(diào)查有助于了解機(jī)體對(duì)葉酸的利用能力，制定個(gè)性化的營(yíng)養(yǎng)干預(yù)方案，對(duì)于MTHFR677TT的圍孕期女性，更應(yīng)酌情增加葉酸補(bǔ)充劑量或延長(zhǎng)孕前增補(bǔ)時(shí)間，以避免胎兒出生缺陷以及孕產(chǎn)婦妊娠期并發(fā)癥的發(fā)生。

通過(guò)調(diào)查各地區(qū)漢族及少數(shù)民族葉酸代謝關(guān)鍵酶的基因多態(tài)性分布，可以為基于群體遺傳特征的出生缺陷病因?qū)W研究和臨床干預(yù)研究提供依據(jù)，指導(dǎo)科學(xué)增補(bǔ)葉酸營(yíng)養(yǎng)，實(shí)施個(gè)性化保健。優(yōu)化少數(shù)民族地區(qū)婦幼保健服務(wù)模式，提高民族地區(qū)的百姓健康水平，不僅是全面實(shí)現(xiàn)千年發(fā)展目標(biāo)，也是維護(hù)民族統(tǒng)一、建設(shè)和諧社會(huì)的要求[15]。