吳興興，唐力，朱怡君，伍成祥

（常州制藥廠有限公司，江蘇常州 213000）

藥用輔料一般情況下被認(rèn)為是惰性物料，但藥用輔料中所含的活性雜質(zhì)會間接催化或直接參與藥物的降解反應(yīng)。例如，微晶纖維素等諸多輔料中存在的硝酸鹽及亞硝酸鹽等雜質(zhì)。一些含胺基團(tuán)的藥物在一定條件下可以與亞硝基發(fā)生反應(yīng)，生成一種基因毒性雜質(zhì)[1]。雖然輔料中亞硝酸鹽雜質(zhì)的含量較低，但微量的亞硝酸鹽即可與某些胺基類藥物反應(yīng)生成基因毒性遠(yuǎn)超亞硝酸鹽本身毒性的雜質(zhì)。因此，對于胺基類藥物制劑，選取亞硝酸鹽含量低的輔料是有效控制藥品中基因毒性雜質(zhì)且代價較低的一條途徑。

目前，現(xiàn)行版《中國藥典》[2]四部收載的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，未涉及藥用輔料中亞硝酸鹽的檢查方法。在純化水的“檢查”項下也僅以顏色對比的方法對純化水中亞硝酸鹽的含量限度作了定性規(guī)定。本文擬利用食品中亞硝酸鹽的鹽酸萘乙二胺分光光度法對藥用輔料中的亞硝酸鹽進(jìn)行檢測，探究該方法的精密度、回收率等，并對市場上常見的藥用輔料進(jìn)行檢測，以驗證該方法的適用性。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

（1）檢測試劑：對氨基苯磺酰胺，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司；鹽酸萘乙二胺、亞硝酸鈉、鹽酸，南京化學(xué)試劑有限公司。

（2）藥用輔料：無水磷酸氫鈣，湖州展望藥業(yè)有限公司；磷酸氫鈣，連云港德邦化工有限公司；乳糖，KERRY；預(yù)膠化淀粉，卡樂康；硬脂酸鎂，安徽山河藥用輔料股份有限公司；7個生產(chǎn)廠家的微晶纖維素，分別為明臺化工股份有限公司、JRS、曲阜天利藥業(yè)有限公司、FMC、湖州展望藥業(yè)有限公司、安徽山河藥用輔料股份有限公司、江蘇西典藥用輔料有限公司。

UV2600型紫外分光光度計，日本島津；ME4002型電子天平，梅特勒-托利多。

1.2 試驗方法

1.2.1 溶液的制備

（1）檢測試劑：配制濃度為4 g/L的對氨基苯磺酰胺的20%（V/V）稀鹽酸溶液；配制濃度為2 g/L的鹽酸萘乙二胺溶液。

（2）線性標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別稱取適量的亞硝酸鈉，以純化水制備濃度分別為0.649 μg/mL、1.326 μg/mL、2.652 μg/mL、5.304 μg/mL、7.960 μg/mL的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液；分別吸取1 mL上述亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，加對氨基苯磺酰胺的稀鹽酸溶液1 mL及鹽酸萘乙二胺溶液1 mL，制得濃度分別為0.216 μg/mL、0.442 μg/mL、0.884 μg/mL、1.768 μg/mL、2.653 μg/mL的線性標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（3）供試品溶液：分別稱取適量的藥用輔料，以純化水制得濃度為0.1 g/mL的儲備液。分別吸取1 mL上述儲備液，加對氨基苯磺酰胺的稀鹽酸溶液1 mL及鹽酸萘乙二胺溶液1 mL，制得濃度分別為0.033 g/mL的供試品溶液。

1.2.2 方法學(xué)驗證

1.2.2.1 確定最大吸收波長

將濃度為0.442 μg/mL的線性標(biāo)準(zhǔn)溶液于紫外分光廣度計上進(jìn)行全波長掃描，得到最大吸收波長。

1.2.2.2 線性考察

于最大吸收波長處檢測線性標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2.3 精密度

將濃度為0.442 μg/mL的線性標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，計算6次吸光值的RSD值。

1.2.2.4 回收率

分別取濃度為2.653 μg/mL、0.884 μg/mL、0.216 μg/mL的線性標(biāo)準(zhǔn)溶液，檢測吸光度值，平行測定3次，與根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程計算而得的吸光值進(jìn)行對比，計算高、中、低3個濃度的回收率。

1.2.3 藥用輔料中硝酸鹽含量分析

于最大吸收波長處檢測供試品溶液的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計算供試品中亞硝酸鈉的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)檢驗

2.1.1 最大吸收波長

全波長掃描得到最大吸收波長為553 nm。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在濃度為0～2.653 μg/mL的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為y=0.257 0x-0.000 2，相關(guān)系數(shù)R2=0.999。

2.1.3 精密度

同一份溶液連續(xù)進(jìn)樣6次所得吸光值的RSD%=0.68%（n=6）。

2.1.4 回收率

回收率結(jié)果見表1。由回收率試驗結(jié)果可見，高、中、低3個濃度的溶液，回收率均較佳。

表1 回收率結(jié)果

2.2 輔料中亞硝酸鹽檢測結(jié)果

分別對7種不同種類輔料中亞硝酸鈉的含量進(jìn)行了檢測，結(jié)果見表2。

表2 不同種類輔料中亞硝酸鈉含量對比

以微晶纖維素為例，就不同廠家的同種輔料進(jìn)行了亞硝酸鈉含量的對比考察，結(jié)果見表3。

表3 不同廠家的微晶纖維素亞硝酸鈉含量對比

對同一微晶纖維素生產(chǎn)廠家4個批次的樣品中亞硝酸鈉的含量進(jìn)行了對比考察，具體見表4。

表4 同廠家不同批次微晶纖維素中亞硝酸鈉含量的定性和定量對比

在考察的7種不同種類輔料中，亞硝酸鈉的含量差異較大，最大差異達(dá)60倍；不同廠家的微晶纖維素中亞硝酸鈉的含量存在不同程度的差異，最大值及最小值差異近20倍；同生產(chǎn)廠家不同生產(chǎn)批次的微晶纖維素中亞硝酸鈉含量的定性顏色對比及定量檢測結(jié)果均顯示無明顯差異。

3 結(jié)論

本文初步建立了藥用輔料中亞硝酸鹽殘留量的檢查方法。這種方法檢測成本低，簡便可行，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高。實現(xiàn)了藥用輔料中亞硝酸鹽含量的定量檢測。這對輔料企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)、輔料企業(yè)和用戶協(xié)議標(biāo)準(zhǔn)的提升，甚至對國家標(biāo)準(zhǔn)的制定都具有非常重要的現(xiàn)實意義。