逯文倩，王 娟

（山東理工大學(xué)農(nóng)業(yè)工程與食品科學(xué)學(xué)院，山東淄博 255000）

雙孢蘑菇（Agaricus bisporus）營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、口感好、種植簡(jiǎn)單、價(jià)格低，是世界上最暢銷(xiāo)的食用菌之一[1]。但雙孢蘑菇含水率高且沒(méi)有明顯的保護(hù)組織，易受微生物侵染而腐爛，影響商品價(jià)值，有研究發(fā)現(xiàn)，雙孢蘑菇在室溫下的貯藏期只有3 d[2]。目前關(guān)于雙孢蘑菇的保鮮方法有很多，如氣調(diào)保鮮、低溫保藏、化學(xué)保鮮等[3-4]。但由于環(huán)境和成本問(wèn)題，人們愈發(fā)關(guān)注天然和可再生材料制成的抗菌生物高分子保鮮膜。與合成塑料相比，以多糖、蛋白質(zhì)和脂類(lèi)為原料制備的生物可降解聚合物膜具有更好的生物相容性、生物降解性和環(huán)境友好性等優(yōu)點(diǎn)[5-7]。

海藻酸鈉是一種從海藻或細(xì)菌中提取的天然多糖，由D-甘露糖醛酸（M）和L-古洛糖醛酸（G）組成[8]，具有優(yōu)良的成膜性和可再生性，是最受歡迎的膜材料之一[9]，然而高水敏性、較差的抗氧化性和抗菌性限制了海藻酸鈉生物膜的應(yīng)用[10-12]。為改善海藻酸鈉膜的性能，可以在膜中加入納米粒子。MSNPs 的粒徑可控、化學(xué)穩(wěn)定性好、生物相容性好、表面具有大量的孔道，能夠負(fù)載大量的活性物質(zhì)[13-14]。OEO 具有良好的抗菌和抗氧化活性，是一種安全、高效、無(wú)毒的天然食品防腐劑，然而精油具有較強(qiáng)的揮發(fā)性和特殊氣味，使其作為食品添加劑的應(yīng)用受到限制[15-17]。將OEO 負(fù)載于MSNPs 的孔隙中能防止精油降解或揮發(fā)，延長(zhǎng)抗菌時(shí)間。

本文主要研究了純海藻酸鈉膜與0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜對(duì)雙孢蘑菇貯藏期間生理品質(zhì)的影響，為其在延長(zhǎng)采后雙孢蘑菇保鮮期方面的研究和應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮雙孢蘑菇采自山東省淄博市臨淄區(qū)，采后立即將其運(yùn)至冷庫(kù)，在（4±1）℃條件下預(yù)冷12 h 備用。

海藻酸鈉，天津光復(fù)化學(xué)試劑有限公司；OEO，江西環(huán)球天然香料有限公司；原硅酸四乙酯（TEOS）、十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）和NH4OH，美國(guó)Sigma Aldrich公司；SOD 試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

C-MAGHS4 型磁力攪拌器，德國(guó)漢堡有限公司；BSC-150 型恒溫恒濕箱，上海博訊醫(yī)療生物儀器股份有限公司；UV-2550 型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本島津公司；SHJ-6 型水浴磁力攪拌器，常州國(guó)宇儀器制造有限公司；TGL-16K 型高速低溫離心機(jī)，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司；Multiskan GO 型酶標(biāo)儀，美國(guó)Thermo Scientific 公司。

1.3 方法

1.3.1 MSNPs 和OEO-MSNPs 的制備

取6.0 g CTAB，125 mL 無(wú)水乙醇，30 mL NH4OH 和125 mL 蒸餾水混合于500 mL 燒杯中，用磁力攪拌器1 500 r/min 攪拌10 min 后逐滴加入8.5 g TEOS 到混合液中攪拌2 h。攪拌后的溶液放入凈化釜中，105℃烘干48 h，超濾得到固體顆粒，蒸餾水洗滌3 次，105 ℃烘干后用馬弗爐在550 ℃下煅燒4 h 得到MSNPs。

將600 μL OEO 加入到200 mg MSNPs 中，再加入2 mL 氯仿，于10 mL 離心管中制成混合溶液。用超聲波清洗機(jī)在100 W、20 kHz 下對(duì)混合物超聲處理40 min。有機(jī)溶劑蒸發(fā)后得到OEO-MSNPs。

1.3.2 OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜的制備

采用溶劑澆鑄法制備海藻酸鈉膜[8]。準(zhǔn)確稱(chēng)取0.8 g OEO-MSNPs 緩慢加入100 mL 蒸餾水中，用磁力攪拌器以1 500 r/min 攪拌20 min，得到均勻的OEO-MSNPs懸浮液。隨后在懸浮液中加入2.5 g 海藻酸鈉粉末，用水浴磁力攪拌器在1 000 r/min、60 ℃條件下攪拌40 min。待混合物冷卻至室溫后加入7 mL 甘油攪拌至溶液清晰透明，最后將膜液倒在水平的玻璃模具（25 cm×25 cm）內(nèi)，40 ℃干燥12h。然后將薄膜用5%氯化鈣溶液交聯(lián)70s，在25 ℃、50%的相對(duì)濕度下干燥4 h，揭膜，得到0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉膜。

1.3.3 不同復(fù)合膜對(duì)雙孢蘑菇的包裝保鮮試驗(yàn)

選擇大小均勻、無(wú)病蟲(chóng)害和機(jī)械損傷的雙孢蘑菇，在（4±1）℃冷庫(kù)中預(yù)冷24 h。樣品隨機(jī)分為3 組，每組約20 個(gè)蘑菇子實(shí)體。分別用純海藻酸鈉膜（處理組F1），0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜（處理組F2）、空白對(duì)照組（CK）在（4±1）℃下貯藏雙孢蘑菇12 d，空白對(duì)照組未進(jìn)行任何包裝處理。每3 d 取樣1 次，用于測(cè)定各項(xiàng)生理指標(biāo)，每項(xiàng)指標(biāo)重復(fù)測(cè)定3 次。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1 呼吸速率

雙孢蘑菇的呼吸速率采用Hu 等[18]的方法測(cè)定。取每個(gè)處理組中大小相同的5 個(gè)雙孢蘑菇放置在密閉容器中，然后用手持O2/CO2測(cè)定儀測(cè)定容器中2 h 內(nèi)的氣體成分變化，單位為mg CO2/(kg·s)，計(jì)算公式如式（1）所示。

式中，ΔC-密閉容器中CO2體積分?jǐn)?shù)變化量，%；V-密閉容器中氣體體積，mL；m-子實(shí)體質(zhì)量，g；Δt-密閉時(shí)間，s；44-CO2相對(duì)分子質(zhì)量，g/mol；22.4-氣體摩爾體積，L/mol。

1.4.2 失重率

采用稱(chēng)量法[19]測(cè)定，計(jì)算公式如式（2）所示。

式中，m0-第0 天時(shí)雙孢蘑菇鮮質(zhì)量，g；mt-取樣時(shí)雙孢蘑菇鮮質(zhì)量，g。

1.4.3 色度

用手持色差儀分別對(duì)蘑菇的表皮和果肉的L、a、b進(jìn)行記錄。白度（WI）根據(jù)公式（3）計(jì)算。

1.4.4 硬度

用TPA 質(zhì)構(gòu)儀和直圓柱形探頭，選擇壓縮模式對(duì)雙孢蘑菇的硬度進(jìn)行測(cè)試。參數(shù)：測(cè)前速度5 mm/s，測(cè)試速度5 mm/s，測(cè)后速度5 mm/s；下壓接觸力5 N，形變量80%；兩次擠壓間隔時(shí)間0.2 s。

1.4.5 總酚、類(lèi)黃酮含量

稱(chēng)取0.5 g 雙孢蘑菇，加入15 mL、80%乙醇溶液，冰浴下研磨并在4 ℃、5 000 r/min 條件下離心10 min，取上清液進(jìn)行總酚、類(lèi)黃酮含量的測(cè)定。

總酚含量采用福林酚法測(cè)定[19]。0.4 mL 上清液加入2 mL、10%福林酚溶液中，振蕩搖勻后靜置于黑暗環(huán)境中5 min，加入1.8 mL、7.5%Na2CO3溶液，振蕩搖勻后靜置于黑暗環(huán)境中1 h，于765 nm 下測(cè)定其吸光度值。采用標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)食子酸溶液為標(biāo)準(zhǔn)曲線?？偡雍堪垂剑?）計(jì)算。

式中，C-根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的沒(méi)食子酸質(zhì)量，mg；V-提取液總體積，mL；V1-測(cè)定所取的提取液體積，mL；M-雙孢蘑菇質(zhì)量，g。

測(cè)定類(lèi)黃酮采用分光光度法[20]。取1 mL 上清液加入0.3 mL、5%NaNO2溶液中，振蕩搖勻后靜置于黑暗環(huán)境中5 min，加入0.3 mL、10%AlCl3溶液，振蕩搖勻后靜置于黑暗環(huán)境中5 min，再加入2 mL、1 mol/L NaOH 溶液和3.4 mL 蒸餾水，振蕩搖勻后靜置于黑暗環(huán)境中1 h，于510 nm 下測(cè)定吸光度值。采用蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液做標(biāo)準(zhǔn)曲線。類(lèi)黃酮含量按公式（5）計(jì)算。

式中，C-根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的蘆丁質(zhì)量，mg；V-提取液總體積，mL；V1-測(cè)定所取的提取液體積，mL；M-雙孢蘑菇質(zhì)量，g。

1.4.6 細(xì)胞膜透性

用1 cm 的打孔器將雙孢蘑菇菌蓋切成厚度為0.3 cm的小圓片。稱(chēng)取1.0 g 蘑菇圓片放入25 mL 蒸餾水的離心管中，用電導(dǎo)率儀測(cè)得電導(dǎo)率EC0。然后于25 ℃緩慢振蕩1 h，測(cè)定電導(dǎo)率EC1。再于沸水浴中加熱30 min，冷卻至室溫后將蒸餾水補(bǔ)至25 mL，測(cè)定電導(dǎo)率EC2。相對(duì)電導(dǎo)率按照公式（6）計(jì)算。

1.4.7 丙二醛（MDA）

取1.5 g 雙孢蘑菇，加入6 mL、10%三氯乙酸溶液，冰浴研磨。在4 ℃、10 000 r/min 條件下離心15 min，取上清液用于MDA 含量的測(cè)定。

取2 mL 上清液，加入2 mL、0.6%2-硫代巴比妥酸溶液，沸水浴10 min，隨后冷卻至室溫，在4 ℃、10 000 r/min條件下離心5 min，取上清液分別在450、532、600 nm 下測(cè)定OD 值。MDA 濃度（c）根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式（7）計(jì)算，MDA含量根據(jù)公式（8）計(jì)算。

式中，c-公式（7）得到的MDA 濃度，μmol/L；V-樣品提取液總體積，mL；m-雙孢蘑菇質(zhì)量，g。

1.4.8 抗氧化性

取1.0 g 雙孢蘑菇，加入6 mL、0.05 mol/L 磷酸鉀緩沖液（pH 7.8，含5%聚乙烯吡咯烷酮（PVP）），冰浴研磨，在4 ℃、10 000 r/min 條件下離心20 min，取上清液進(jìn)行多酚氧化酶（PPO）、過(guò)氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）活性的測(cè)定。

取0.5 mL 上清液，加入3 mL、0.12 mol/L 鄰苯二酚溶液（pH 4.5），立刻搖勻，在410 nm 下測(cè)定OD 值，每30 s讀數(shù)，記錄3 min 內(nèi)的變化。PPO 活性以每分鐘OD 值變化0.01 為一個(gè)活性單位U，用U/g 表示。PPO 活性按照公式（9）計(jì)算。

式中，ΔA410-每分鐘OD 值的變化值；V-樣品提取液總體積，mL；V1-測(cè)定時(shí)所取提取液體積，mL；m-雙孢蘑菇質(zhì)量，g。

取0.4 mL 上清液，加入2.8 mL、0.25%愈創(chuàng)木酚溶液（pH 5.4）和0.1 mL、0.75%H2O2溶液，立即搖勻，在470 nm下測(cè)定OD 值，每30 s 讀數(shù)，記錄3 min 內(nèi)的變化。POD酶活以每分鐘OD 值變化0.001 為一個(gè)活性單位U，用U/g 表示。結(jié)果按公式（10）計(jì)算。

式中，ΔA470-每分鐘OD 值的變化值；V-樣品提取液總體積，mL；V1-測(cè)定時(shí)所取提取液體積，mL；m-雙孢蘑菇質(zhì)量，g。

取0.2 mL 上清液，加入1.5 mL、0.05 mol/L 磷酸鉀緩沖液（pH 7.0）和0.3 mL、0.01 mol/L H2O2溶液，立即搖勻，在240 nm 下測(cè)定OD 值，每30 s 讀數(shù)，記錄OD 值在3 min內(nèi)的變化。CAT 酶活以每分鐘OD 值變化0.01 為一個(gè)活性單位U，用U/g 表示。CAT 活性按公式（11）計(jì)算。

式中，ΔA240-每分鐘OD 值的變化值；V-樣品提取液總體積，mL；V1-測(cè)定時(shí)所取提取液體積，mL；m-雙孢蘑菇質(zhì)量，g。

SOD 測(cè)定方法依照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

1.4.9 菌落總數(shù)

從每個(gè)包裝中取1.0 g 雙孢蘑菇，搗碎并與10 mL、0.1%蛋白胨水混合。8 000 r/min 均質(zhì)2 min，取9 mL 蛋白胨水將樣品從10-1濃度連續(xù)稀釋到10-9。選取2～3 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，各吸取1 mL 于無(wú)菌PDA 培養(yǎng)基中，均勻涂布。在28 ℃下培養(yǎng)5 d，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS（Version 11.5，SPSS Inc.，Chicago，USA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有試驗(yàn)重復(fù)3 次。利用Duncan 法進(jìn)行方差分析，P＜0.05 被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜對(duì)雙孢蘑菇呼吸速率和失重率的影響

圖1a 所示，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理雙孢蘑菇的呼吸速率均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，CK、F1 和F2處理的呼吸高峰分別出現(xiàn)在第6、6、9 天，其大小分別為0.010 8、0.008 4、0.006 8 mg CO2/(kg·s)。可見(jiàn)，0.8%OEOMSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜能顯著抑制雙孢蘑菇呼吸強(qiáng)度的變化（P＜0.05），并延緩了呼吸高峰的出現(xiàn)。這可能是因?yàn)?.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜能維持高CO2、低O2的氣體環(huán)境，抑制了雙孢蘑菇呼吸相關(guān)的酶活性及代謝[21]。

如圖1b 所示，在整個(gè)貯藏期間，各處理雙孢蘑菇的失重率均呈上升趨勢(shì)，相比于CK 處理，所有的海藻酸鈉膜處理顯著抑制了失重率的增加（P＜0.05）。第12 天時(shí)，CK、F1 和F2 的失重率分別為19.78%、14.31%和6.95%，這可能與海藻酸鈉膜處理影響了雙孢蘑菇呼吸速率有關(guān)，低呼吸強(qiáng)度減少了營(yíng)養(yǎng)底物的損耗。司金金等[22]研究發(fā)現(xiàn)微孔包裝袋較PE 保鮮膜中紅薯葉失重率高，主要因?yàn)槲⒖装b袋透氣性好，更有利于紅薯葉的呼吸作用和蒸騰作用，造成了較大的水分損耗。Wang 等[23]使用1.5%殼聚糖單獨(dú)或聯(lián)合10 mmol/L 抗壞血酸涂膜處理鴨梨，結(jié)果表明不同涂膜處理均延緩了果實(shí)的質(zhì)量損失。另外這也與膜的水蒸氣透過(guò)率有關(guān)，低水蒸氣透過(guò)率可以維持一定的水分濕度，從而抑制雙孢蘑菇的水分散失[24]，0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉膜水蒸氣透過(guò)率較低也證實(shí)了這一點(diǎn)。

圖1 不同處理對(duì)雙孢蘑菇呼吸速率（a）和失重率（b）的影響Fig.1 Effect of different treatments on respiration rate (a)and weight loss rate (b) of Agaricus bisporus

2.2 OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜對(duì)雙孢蘑菇白度的影響

雙孢蘑菇采收后極易褐變，造成菇體白色的喪失，影響雙孢蘑菇的市場(chǎng)價(jià)值。雙孢蘑菇貯藏期間菇皮和菇肉部位的白度變化如圖2 所示，所有處理雙孢蘑菇的白度值均逐漸減小，海藻酸鈉膜處理在一定程度上延緩了雙孢蘑菇白度的降低。而OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜處理則更好地維持了菇皮和菇肉的白度，較對(duì)照組具有顯著性差異（P＜0.05）。在整個(gè)貯藏期間僅降低9.26 和9.42，分別為CK 和F1 處理的48.0%、66.6%和47.3%、85.6%。這可能是因?yàn)?.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜形成了低O2的環(huán)境，從而抑制了雙孢蘑菇酶促褐變的發(fā)生[25]。Nasiri 等[26]在黃芪膠溶液中添加不同濃度薄荷精油對(duì)雙孢蘑菇進(jìn)行涂膜處理，結(jié)果也表明涂膜能夠延緩雙孢蘑菇褐變現(xiàn)象的出現(xiàn)。

圖2 不同處理對(duì)雙孢蘑菇菇皮（a）和菇肉（b）的白度指數(shù)影響Fig.2 Effect of different treatments on whiteness of Agaricus bisporus surface (a) and flesh (b)

2.3 OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜對(duì)雙孢蘑菇硬度的影響

硬度是反映雙孢蘑菇品質(zhì)的重要參數(shù)，雙孢蘑菇采后軟化嚴(yán)重，極大地影響了其商品價(jià)值。各處理雙孢蘑菇的硬度隨貯藏時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低，與對(duì)照組相比，0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜包裝雙孢蘑菇的硬度下降速度顯著減緩（P＜0.05）。如圖3（見(jiàn)下頁(yè)）所示，第12 天時(shí)，0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉膜處理雙孢蘑菇的硬度值為25 471 g，高于CK 組雙孢蘑菇在第6 天的硬度值（24 547 g），將雙孢蘑菇的軟化進(jìn)程延緩了6 天。另外，貯藏環(huán)境中的高CO2對(duì)軟化相關(guān)酶活性的抑制也可能是一個(gè)重要原因。

圖3 不同處理對(duì)雙孢蘑菇硬度的影響Fig.3 Effect of different treatments on hardness of Agaricus bisporus

2.4 OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜對(duì)雙孢蘑菇總酚和類(lèi)黃酮含量的影響

圖4 不同處理對(duì)雙孢蘑菇總酚（a）和類(lèi)黃酮（b）含量的影響Fig.4 Effect of different treatments on total phenolic content(a) and flavonoid content (b) of Agaricus bisporus

酚類(lèi)物質(zhì)和類(lèi)黃酮物質(zhì)是雙孢蘑菇中極為重要的抗氧化物質(zhì)，在抵御外界不利環(huán)境脅迫、內(nèi)部氧化脅迫以及病原菌侵染等方面均發(fā)揮著重要作用[27-28]。圖4 反映了各處理雙孢蘑菇在貯藏期間總酚和類(lèi)黃酮含量的變化。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理雙孢蘑菇的總酚和類(lèi)黃酮含量均呈下降趨勢(shì)。相較于CK 組和海藻酸鈉膜處理組，0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉膜處理組雙孢蘑菇在整個(gè)貯藏期間均維持了最高的總酚和類(lèi)黃酮含量（P＜0.05）。這可能是因?yàn)楹Ｔ逅徕c膜中加入的OEO 具備了優(yōu)良的抗氧化性能，在緩釋過(guò)程中與雙孢蘑菇外源接觸，刺激了雙孢蘑菇苯丙烷類(lèi)代謝的途徑，進(jìn)而合成了更多的抗氧化次級(jí)代謝產(chǎn)物。同時(shí)，這可能也與0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉膜抑制了雙孢蘑菇的呼吸速率有關(guān)，雙孢蘑菇低代謝強(qiáng)度減緩了活性氧對(duì)抗氧化物質(zhì)的氧化能力降低酚類(lèi)物質(zhì)和類(lèi)黃酮物質(zhì)的損耗。

2.5 OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜對(duì)雙孢蘑菇細(xì)胞膜透性和MDA 含量的影響

圖5 不同處理對(duì)雙孢蘑菇相對(duì)電導(dǎo)率（a）和MDA 含量（b）的影響Fig.5 Effect of different treatments on relative conductivity(a) and MDA content (b) of Agaricus bisporus

細(xì)胞膜透性是反映膜系統(tǒng)完整性的指標(biāo)，可以反映果實(shí)的損傷程度[18]。MDA 是膜脂過(guò)氧化的最終產(chǎn)物，可以間接反映組織的過(guò)氧化損傷程度[29]。圖5 顯示在整個(gè)貯藏期間，各處理雙孢蘑菇的相對(duì)電導(dǎo)率和MDA 含量均呈升高趨勢(shì)，其中，0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜處理顯著延緩了相對(duì)電導(dǎo)率和MDA 含量的增加（P＜0.05）。如圖5 所示，第12 天時(shí)，0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜處理組的雙孢蘑菇相對(duì)電導(dǎo)率和MDA 含量比0 天增加13.5%和47.9%；而海藻酸鈉膜處理組和CK組比0 天分別增加了19.1%、91.7%和21.9%、135.4%。這是因?yàn)?.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜處理的雙孢蘑菇維持了更高的總酚和類(lèi)黃酮含量，具備更強(qiáng)的抗氧化和清除自由基的能力，進(jìn)而緩解了雙孢蘑菇受到的氧化脅迫。另外，0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜具備一定的抑菌活性，也在一定程度上避免了由于病原菌侵染而產(chǎn)生的傷害。

2.6 OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜對(duì)雙孢蘑菇PPO、POD、SOD 和CAT 活性的影響

PPO 是雙孢蘑菇采后褐變的主要原因，酚類(lèi)物質(zhì)在PPO 的催化氧化下，最終生成對(duì)應(yīng)的醌類(lèi)物質(zhì)，導(dǎo)致雙孢蘑菇商品價(jià)值降低[30]。雙孢蘑菇PPO 活性的變化如圖6a所示，由圖知，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理PPO 的活性均逐漸升高，CK 組的PPO 活性增加最快，而0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜處理更好地延緩了PPO活性的增加，具有顯著性差異（P＜0.05）。這說(shuō)明0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜能夠顯著抑制PPO 活性升高，從而抑制雙孢蘑菇的褐變。王韻儀等[31]研究發(fā)現(xiàn)茶多酚/川陳皮素/羧甲基纖維素復(fù)合膜可以有效減緩PPO活性的升高，抑制刺嫩芽的褐變。

POD、SOD 和CAT 是雙孢蘑菇中幾種重要的抗氧化酶，可以將雙孢蘑菇內(nèi)產(chǎn)生的高毒性自由基和過(guò)氧化物轉(zhuǎn)化成低毒性或無(wú)毒的物質(zhì)，在延緩食用菌采后衰老中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。SOD 負(fù)責(zé)將超氧陰離子轉(zhuǎn)化成H2O2，而CAT 和POD 負(fù)責(zé)將H2O2轉(zhuǎn)化成H2O。各處理組雙孢蘑菇POD、SOD 和CAT 活性的變化如圖6b、c 和d所示，由圖可知，在整個(gè)貯藏期間，POD、SOD 和CAT 活性均呈先升高后降低的趨勢(shì)，SOD 和CAT 活性分別在第3 天和第6 天達(dá)到峰值然后降低，POD 活性在9 d 內(nèi)逐漸升高最后略有下降。其中，0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜處理均維持了較高的抗氧化酶活性，CK 組的各種酶活性最低。這可能是因?yàn)閺?fù)合膜中外源添加的OEO-MSNPs 激活了雙孢蘑菇的抗氧化系統(tǒng)，在整個(gè)貯藏期間維持了較高的抗氧化酶活性，進(jìn)而延緩了雙孢蘑菇貯藏期間的成熟和衰老[32]。另一方面，0.8%OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜處理維持了高抗氧化酶活性，也可能正是雙孢蘑菇總酚和類(lèi)黃酮含量高的一個(gè)原因。

圖6 不同處理對(duì)雙孢蘑菇多酚氧化酶（a）、過(guò)氧化物酶（b）、超氧化物歧化酶（c）和過(guò)氧化氫酶（d）的影響Fig.6 Effect of different treatments on PPO (a),POD (b),SOD (c) and CAT (d) of Agaricus bisporus

2.7 OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜對(duì)雙孢蘑菇菌落總數(shù)的影響

雙孢蘑菇感染病原菌易造成子實(shí)體腐爛、品質(zhì)下降，影響商品價(jià)值，即使在低溫環(huán)境下也可能會(huì)存在耐低溫病菌的侵染。圖7 為不同處理對(duì)雙孢蘑菇低溫貯藏期菌落總數(shù)的影響。

圖7 不同處理對(duì)雙孢蘑菇菌落總數(shù)的影響Fig.7 Effect of different treatments on microbial count of Agaricus bisporus

由圖知，隨著貯藏期的延長(zhǎng)，3 組不同處理的子實(shí)體菌落總數(shù)均不斷上升。但是OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜包裝的蘑菇菌落總數(shù)上升較緩慢，且顯著低于其他2個(gè)處理（P＜0.05）。在第12 天時(shí)，CK 組菌落總數(shù)達(dá)12.04 lg（CFU/g），純海藻酸鈉膜處理后的菌落總數(shù)為11.36 lg（CFU/g），復(fù)合膜包裝的菌落總數(shù)僅為7.36 lg（CFU/g），表明OEO-MSNPs/海藻酸鈉復(fù)合膜可以顯著抑制雙孢蘑菇病原菌數(shù)量的增長(zhǎng)，能夠降低雙孢蘑菇因感染微生物導(dǎo)致的腐爛。

3 結(jié)論

在本實(shí)驗(yàn)中，OEO-MSNPs/海藻酸鈉抑菌復(fù)合膜對(duì)采后雙孢蘑菇的保鮮效果均優(yōu)于其他處理組。與對(duì)照相比，復(fù)合膜處理能夠保持子實(shí)體的硬度，這可能與抑制相對(duì)電導(dǎo)率、降低MDA 積累有關(guān)，同時(shí)延緩了總酚、類(lèi)黃酮含量的降低。復(fù)合膜包裝后的雙孢蘑菇可以有效抑制由PPO 引起的酶促褐變，還可以通過(guò)促進(jìn)POD、SOD 和CAT 活性來(lái)提高蘑菇的抗氧化能力。綜合各項(xiàng)指標(biāo)可以看出，海藻酸鈉復(fù)合膜能夠延緩采后雙孢蘑菇的衰老，延長(zhǎng)其貨架期。目前生物活性膜的研究基本停留在實(shí)驗(yàn)室階段，應(yīng)用于市場(chǎng)包裝仍需大量的試驗(yàn)和分析。因此，牛至精油-介孔納米二氧化硅/海藻酸鈉復(fù)合膜作為可生物降解的環(huán)保包裝材料在食品保鮮應(yīng)用方面具有潛在價(jià)值，且符合我國(guó)可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略和環(huán)保政策。