馬曉穎，呂立濤，楊 濤，姚 瀾，李長田，肖 軍**

（1.遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所遼寧省食用菌優(yōu)質(zhì)栽培重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 沈陽 110161；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食藥用菌教育部工程研究中心，吉林 長春 130118）

先天免疫是指機(jī)體先天具有的正常的生理防御功能，對各種不同的病原微生物和異物的入侵都能作出相應(yīng)的免疫應(yīng)答，在引發(fā)炎癥反應(yīng)和宿主防御反應(yīng)中至關(guān)重要。研究表明，巨噬細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要成員，其不僅是局部炎癥最典型的啟動者，也是組織微環(huán)境的主要成分產(chǎn)生者，在抵御病原微生物入侵方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用[1-3]。巨噬細(xì)胞已成為治療炎癥性和感染性疾病的重要靶點(diǎn)，目前一些化學(xué)合成的化合物已經(jīng)被用作免疫調(diào)節(jié)劑來調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的巨噬細(xì)胞功能，然而，一些不良反應(yīng)，如肝毒性、腎毒性和超敏反應(yīng)，限制了其臨床應(yīng)用[4]。因此迫切需要開發(fā)無毒、免疫活性強(qiáng)的天然免疫調(diào)節(jié)劑。

大型真菌在自然界分布廣泛，有些可食用，有些還具有重要的藥用價值[5-6]。桑黃（Sanghuangporus Sheng H.Wu，L.W.Zhou&Y.C.Dai）子實(shí)體在東亞地區(qū)被用作傳統(tǒng)藥材，其具有多種生物學(xué)功能，如抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移[7-8]，多年來一直受到人們的極大關(guān)注[9-10]，桑黃水提取物能夠增強(qiáng)小鼠免疫力的免疫調(diào)節(jié)活性[11]，還可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[12]以及分泌細(xì)胞因子來參與巨噬細(xì)胞的反應(yīng)[13]。鮑姆纖孔菌（Sanghuangporus baumii）是廣義桑黃的一個品種，其子實(shí)體黃褐色，無柄、木栓質(zhì)，菌蓋呈馬蹄形[14]。目前人工栽培鮑姆纖孔菌獲得子實(shí)體的難度較大，而菌絲發(fā)酵是一種可產(chǎn)生大量菌絲體的人工培養(yǎng)方法，其發(fā)酵產(chǎn)物與子實(shí)體功效接近。研究其液體發(fā)酵菌絲中三萜的相關(guān)藥理活性，為其產(chǎn)業(yè)化和應(yīng)用方向提供理論依據(jù)。

通過利用不同濃度的鮑姆纖孔菌菌絲三萜對小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7進(jìn)行建模，在脂多糖（lipopolysaccharide） 與三萜共培養(yǎng)的模型下，體外處理小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7，測定其對巨噬細(xì)胞細(xì)胞活力以及分泌一氧化氮和免疫因子的影響。為鮑姆纖孔菌的進(jìn)一步開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)，也為免疫調(diào)節(jié)劑的研發(fā)提供一個新的方向。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

鮑姆纖孔菌菌種，遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所育種研究室；小鼠腹腔巨噬細(xì)胞（RAW264.7），吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食藥用菌教育部工程研究中心實(shí)驗(yàn)室；DMEM高糖培養(yǎng)基、PBS磷酸鹽緩沖液、胎牛血清，美國Gibco公司；脂多糖（LPS）、地塞米松（DXMS），美國Sigma公司；cck-8(Cell Counting Kit-8細(xì)胞計數(shù)試劑)，美國MP Biomedicals生物醫(yī)藥公司；一氧化氮檢測試劑盒，酶聯(lián)免疫試劑有限公司；細(xì)胞因子ELISA試劑盒，酶聯(lián)免疫試劑有限公司。

主要儀器設(shè)備有超凈工作臺，蘇州智凈凈化設(shè)備有限公司；Cytoperm2型二氧化碳培養(yǎng)箱，美國Thermo公司；數(shù)顯恒溫水浴鍋，常州市江南實(shí)驗(yàn)儀器廠；低速離心機(jī)，美國BECMAN公司；多功能酶標(biāo)儀，美國Biotek公司；倒置顯微鏡，日本Nikon公司；微型旋渦混合儀，上海滬西分析儀器廠。

1.2 樣品的制備

1.2.1 鮑姆纖孔菌培養(yǎng)

將實(shí)驗(yàn)室保藏的鮑姆纖孔菌菌株活化接種于馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，25℃、180 r·min-1搖床培養(yǎng)7 d。

1.2.2 鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜的獲得

將發(fā)酵后的菌絲體用無菌水沖洗3次，放入烘箱60℃烘干，稱取1 g放入50 mL離心管中，加入30 mL無水乙醇，用勻漿機(jī)打勻，超聲提取30 min，用濾紙過濾2次。加入同體積的乙酸乙酯，萃取3次。取乙酸乙酯層濃縮干燥成粉末，獲得總?cè)疲芄?℃低溫保存。

1.3 試驗(yàn)分組

巨噬細(xì)胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期后按以下處理分組：空白組（CK）、LPS模型組為添加0.1 μg·mL-1的脂多糖；藥物對照組（DXMS） 為添加50 μg·mL-1的地塞米松；試驗(yàn)組為使用脂多糖與不同濃度的三萜（25 μg·mL-1、50 μg·mL-1、100 μg·mL-1、200 μg·mL-1、400 μg·mL-1和800 μg·mL-1）處理，分別編號為SGC25、SGC50、SGC100、SGC200、SGC400、SGC800。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)

將小鼠巨噬細(xì)胞（RAW264.7） 接種于50 mL培養(yǎng)瓶中，加入含10% PBS、1%青霉素和鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中，在37°C、CO2濃度5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞呈單層貼壁生長，待細(xì)胞貼壁生長達(dá)80%時傳代一次。

1.4.2 巨噬細(xì)胞的傳代

待小鼠巨噬細(xì)胞（RAW264.7）長到培養(yǎng)瓶底部80%左右時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液倒棄，瓶底細(xì)胞用胰酶消化后，用PBS進(jìn)行沖洗，離心管中低速離心5 min，棄上清液，加入新鮮的培養(yǎng)液，在37°C、CO2濃度5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.4.3 CCK-8法檢測鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬細(xì)胞生長的影響

全部試驗(yàn)用細(xì)胞均使用進(jìn)入指數(shù)生長期的細(xì)胞。取對數(shù)生長期的巨噬細(xì)胞 RAW264.7，按1×104個/孔的濃度接種于96孔板，每孔加100 μL細(xì)胞懸液，置于37℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，空白組加入100 μL的完全培養(yǎng)液，LPS模型組加入培養(yǎng)液和脂多糖 (0.1 μg·mL-1) 各 100 μL，試驗(yàn)組分別加入培養(yǎng)液和濃度為 20 μg·mL-1、50 μg·mL-1、100 μg·mL-1、200 μg·mL-1、400 μg·mL-1和 800 μg·mL-1的三萜溶液各100 μL，每組設(shè)3個重復(fù)。培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 24 h后，每孔加入細(xì)胞培養(yǎng)液體積 1/10的CCK-8，2 h后在450 nm處測定OD值。細(xì)胞存活率（H，%） 的計算公式為：

式中：SOD為試驗(yàn)組OD值；COD為空白組OD值。

1.4.4 不同濃度鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對LPS誘導(dǎo)下巨噬細(xì)胞釋放一氧化氮的影響

取對數(shù)生長期的巨噬細(xì)胞RAW264.7，按1×105個/孔的濃度接種于12孔板中，按照1.3步驟分組，每孔加1 mL處于對數(shù)生長期的巨噬細(xì)胞，藥物干預(yù)之后，在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后無菌收集上清液，按照ELISA檢測試劑盒說明書的方法，檢測培養(yǎng)上清中的一氧化氮的含量。

1.4.5 鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對脂多糖誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞IL-1α、TNF-α、IL-6分泌量的影響

IL-1α是活化巨噬細(xì)胞分泌的重要細(xì)胞因子，低濃度時可以對機(jī)體產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用，高濃度持續(xù)時對引發(fā)炎癥反應(yīng)[19]。IL-6是一種多功能細(xì)胞因子，能夠刺激活化B細(xì)胞增殖，分泌抗體，參與炎癥反應(yīng)，還能有效地促進(jìn)TNF和IL-1誘導(dǎo)的惡性病變[20]。TNF-α是一種腫瘤壞死因子，可以直接殺傷腫瘤細(xì)胞，并且能夠刺激一系列免疫調(diào)節(jié)介質(zhì)和炎癥介質(zhì)的表達(dá)[21]。

INF-r干擾素是一種糖蛋白，具有抗病毒、抑制細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)免疫及抗腫瘤作用[22]。但有研究表明干擾素是免疫系統(tǒng)中的雙刃劍，既可以抑制病毒復(fù)制，又可以參與病毒的復(fù)制[23]。

取對數(shù)生長期的巨噬細(xì)胞RAW264.7，按1×105個/孔的濃度接種于12孔板中，按照1.3步驟分組；每孔加1 mL巨噬細(xì)胞，按照炎癥模型藥物干預(yù)后，在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后無菌條件收集上清液；按照ELISA檢測試劑盒說明書的方法，檢測培養(yǎng)上清中各細(xì)胞因子的含量。

2 結(jié)果分析

2.1 不同濃度菌絲三萜對巨噬細(xì)胞生長的影響

不同處理下的巨噬細(xì)胞RAW264.7的細(xì)胞形態(tài)變化見圖1，不同濃度的鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞生長的影響見圖2。

圖1 不同處理下的巨噬細(xì)胞RAW264.7的細(xì)胞形態(tài)變化Fig.1 The morphological changes of macrophages RAW264.7 with different treatments

圖2 不同濃度的鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞生長的影響Fig.2 The effect of mycelium triterpenes extraction from fevmentation of Sanghuangporus baumii on the growth of mice macrophages RAW264.7 cells

由如圖1可知，CK組的巨噬細(xì)胞呈圓形，細(xì)胞與細(xì)胞間會連接在一起；LPS模型組的細(xì)胞呈現(xiàn)較為明顯的梭型狀態(tài)，細(xì)胞發(fā)生極化；而SGC200組的細(xì)胞，梭型數(shù)量明顯少于LPS模型組，表明菌絲三萜可以減少LPS處理后的巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài)。由圖 2 可知，25 μg·mL-1～800 μg·mL-1鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬細(xì)胞無明顯的毒副作用。在藥物濃度達(dá)到100 μg·mL-1時，巨噬細(xì)胞的數(shù)量增加了18.22%。當(dāng)藥物濃度大于100 μg·mL-1時，細(xì)胞存活率呈下降趨勢，說明鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬細(xì)胞生長作用存在最適濃度。

2.2 不同濃度三萜對巨噬細(xì)胞產(chǎn)一氧化氮的影響

一氧化氮是一種重要的生理活性分子，能夠調(diào)控細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞因子分泌和淋巴細(xì)胞分化等，可以發(fā)揮細(xì)胞自我保護(hù)作用抵抗微生物感染和抑制腫瘤生長[18]。將試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至48 μmol·L-1、24 μmol·L-1、12 μmol·L-1、6 μmol·L-1、3 μmol·L-1，按照說明書配制，試驗(yàn)操作方法與樣品組一樣參見說明書。一氧化氮含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3，鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬細(xì)胞中一氧化氮含量的影響見圖4。

圖3 一氧化氮含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3 The standard curve of nitric oxide content

圖4 鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬細(xì)胞中一氧化氮含量的影響Fig.4 The effect of mycelium triterpenes extraction from fevmentation of Sanghuangporus baumii on nitric oxide content in macrophages

由圖3、圖4可知，當(dāng)菌絲三萜的濃度為200 μg·mL-1時，巨噬細(xì)胞分泌一氧化氮含量最低；當(dāng)菌絲三萜濃度達(dá)到800 μg·mL-1時一氧化氮活性最高。但是所有鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲試驗(yàn)組分泌一氧化氮含量均低于藥物對照組。菌絲三萜的質(zhì)量濃度為400 μg·mL-1和 800 μg·mL-1時，一氧化氮含量高于LPS模型組4.8%和8.6%。試驗(yàn)表明，高濃度的鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬細(xì)胞分泌一氧化氮的含量具有促進(jìn)作用。

2.3 不同濃度菌絲三萜對巨噬細(xì)胞分泌IL-1α、IL-6、TNF-α和INF-r的影響

鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對小鼠巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響見表1。

由表1可知，當(dāng)巨噬細(xì)胞被脂多糖誘導(dǎo)后，其產(chǎn)生細(xì)胞因子的含量較空白組上升，但是加入DXMS后，各促炎因子的分泌有所下降，這表明激素類物質(zhì)可以降低促炎因子的分泌量。且不同濃度的菌絲三萜處理組也會降低巨噬細(xì)胞中細(xì)胞因子的產(chǎn)生，從而減緩炎癥的發(fā)展，且不同細(xì)胞因子存在不同最佳處理濃度，25 μg·mL-1和 200 μg·mL-1的菌絲三萜處理濃度表現(xiàn)最好。

表1 鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對小鼠巨噬細(xì)胞分泌各細(xì)胞因子的影響Tab.1 The effect of mycelium triterpenes extraction from fevmentation of Sanghuangporus baumii on the secretion of cytokines by mouse macrophages

2.3.1 菌絲三萜對巨噬細(xì)胞分泌IL-1α的影響

白介素IL-1α含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖5，鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬細(xì)中白介素IL-1α含量的影響見圖6。

圖5 白介素IL-1α含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5 The Standard curve of IL-α content

圖6 鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬細(xì)中白介素IL-1α含量的影響Fig.6 The effect of mycelium triterpenes extraction from fevmentation of Sanghuangporus baumii on interleukin IL-1α in macrophages

由圖5、圖6可知，以不同的對照組來看，經(jīng)過脂多糖誘導(dǎo)的LPS模型組，其IL-1α的分泌量比空白組有所上升，與藥物對照組相比也有所上升。當(dāng)菌絲三萜刺激巨噬細(xì)胞后，25 μg·mL-1～800 μg·mL-1濃度范圍的試驗(yàn)組與LPS模型組相比，除了菌絲三萜濃度為800 μg·mL-1的處理組外，其他試驗(yàn)組均能夠顯著抑制脂多糖誘導(dǎo)下的巨噬細(xì)胞釋放IL-1α （P＜0.05）；濃度為 25 μg·mL-1和 200 μg·mL-1的菌絲三萜試驗(yàn)組對巨噬細(xì)胞釋放IL-1α抑制性最強(qiáng)，抑制率達(dá)到19.3%。與藥物對照組持平。由上述數(shù)據(jù)可知，菌絲三萜能夠抑制脂多糖誘導(dǎo)下的巨噬細(xì)胞分泌 IL-1α，濃度為 25 μg·mL-1和 200 μg·mL-1的菌絲三萜抑制效果最好。

2.3.2 菌絲三萜對巨噬細(xì)胞分泌IL-6的影響

白介素IL-6含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖7，鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬細(xì)胞中白介素IL-6含量的影響見圖8。

圖7 白介素IL-6含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.7 The standard curve of IL-6 content

圖8 鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬細(xì)胞中白介素IL-6含量的影響Fig.8 The effect of mycelium triterpenes extraction from fevmentation of Sanghuangporus baumii on interleukin IL-6 content in macrophages

由圖7、圖8可知 ，以不同的對照組來看，經(jīng)過脂多糖誘導(dǎo)的模型組，其分泌IL-6的量比空白組有所上升，與藥物對照組相比也有所上升。當(dāng)菌絲三萜刺激巨噬細(xì)胞后，25 μg·mL-1～800 μg·mL-1濃度范圍的試驗(yàn)組與LPS模型組相比，除了菌絲三萜濃度為800 μg·mL-1處理組外，其他試驗(yàn)組均能夠顯著的抑制脂多糖誘導(dǎo)下的巨噬細(xì)胞釋放IL-6(P＜0.05)；濃度200 μg·mL-1的試驗(yàn)組對巨噬細(xì)胞釋放IL-6抑制性最強(qiáng)，抑制率達(dá)到35%。與藥物對照組持平。由上述數(shù)據(jù)可知，菌絲三萜能夠抑制脂多糖誘導(dǎo)下的巨噬細(xì)胞分泌IL-6，濃度200 μg·mL-1的菌絲三萜抑制效果最好。

2.3.3 菌絲三萜對巨噬細(xì)胞分泌TNF-α的影響

腫瘤壞死因子TNF-α含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖9，鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬胞中腫瘤壞死因子TNF-α含量的影響見圖10。

圖9 腫瘤壞死因子TNF-α含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.9 The standard curve of TNF-α content

圖10 鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬胞中腫瘤壞死因子TNF-α含量的影響Fig.10 The effect of mycelium triterpenes extraction from fevmentation of Sanghuangporus baumii on the content of tumor necrosis factor TNF-α in macrophages

由圖9、圖10可知，以不同的對照組來看，經(jīng)過脂多糖誘導(dǎo)的LPS模型組，其分泌TNF-α的值比空白組有所上升，與藥物對照組相比也有所上升。菌絲三萜刺激巨噬細(xì)胞后，25 μg·mL-1～800 μg·mL-1濃度范圍的試驗(yàn)組與LPS模型組相比，菌絲三萜濃度為 200 μg·mL-1和 400 μg·mL-1的處理組能夠顯著的抑制脂多糖誘導(dǎo)下的巨噬細(xì)胞釋放TNF-α(P＜0.05)；濃度200 μg·mL-1的試驗(yàn)組對巨噬細(xì)胞釋放TNF-α抑制性最強(qiáng)，抑制率達(dá)到22%。由上述數(shù)據(jù)可知，菌絲三萜能夠抑制脂多糖誘導(dǎo)下的巨噬細(xì)胞分泌TNF-α，濃度為200 μg·mL-1的菌絲三萜抑制效果最好。

2.3.4 菌絲三萜對巨噬細(xì)胞分泌INF-r的影響

干擾素INF-r含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖11，鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬細(xì)胞中干素INF-r含量的影響見圖12。

由圖11、圖12可知，以不同的對照組來看，經(jīng)過脂多糖誘導(dǎo)的LPS模型組，其分泌INF-r的量比空白組有所上升，比藥物對照組也有所上升。當(dāng)脂多糖刺激巨噬細(xì)胞后，25 μg·mL-1～800 μg·mL-1濃度范圍的試驗(yàn)組與LPS模型組相比，除了濃度為50 μg·mL-1和 800 μg·mL-1外，其他處理組能夠顯著的抑制LPS誘導(dǎo)下的巨噬細(xì)胞釋放INF-r(P＜0.05)；濃度25 μg·mL-1的試驗(yàn)組對巨噬細(xì)胞釋放INF-r抑制性最強(qiáng)，抑制率達(dá)到33.25%。由上述數(shù)據(jù)可知，菌絲三萜能夠抑制LPS誘導(dǎo)下的巨噬細(xì)胞分泌INF-r，濃度25 μg·mL-1的菌絲三萜抑制效果最好。

圖11 干擾素INF-r含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.11 The standard curve of INF-r content

圖12 鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬細(xì)胞中干素INF-r含量的影響Fig.12 The effect of mycelium triterpenes extraction from fevmentation of Sanghuangporus baumii on the content of interferon INF-r in macrophages

3 討論

巨噬細(xì)胞是慢性炎癥和自身免疫性疾病的關(guān)鍵細(xì)胞，在這些疾病中，活化的巨噬細(xì)胞可能發(fā)揮重要作用，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，并介導(dǎo)損傷的解決[24]。脂多糖可以激活巨噬細(xì)胞，并產(chǎn)生一氧化氮和釋放細(xì)胞免疫因子等生物活性物質(zhì)，適量的免疫因子可提高機(jī)體免疫力，而過量持續(xù)的刺激產(chǎn)生的免疫活性物質(zhì)則會導(dǎo)致細(xì)胞的損傷和凋亡，引起細(xì)胞的炎癥反應(yīng)[25]。這表明巨噬細(xì)胞的有益或有害作用取決于其激活狀態(tài)，而激活狀態(tài)又由被占領(lǐng)的組織微環(huán)境所決定[26]。脂多糖所引起的過度炎癥反應(yīng)，極容易將細(xì)胞因子的保護(hù)性作用轉(zhuǎn)化為損傷性作用，造成炎癥過程失控，使得機(jī)體的免疫功能嚴(yán)重受抑，對器官造成不可逆的損害，因此需要研發(fā)更為安全有效的免疫調(diào)節(jié)劑。

一些真菌可以積累多種次生代謝物，包括有機(jī)酸、生物堿，萜類化合物、甾體化合物、酚類化合物和黃酮類化合物，這些次生代謝物具有廣泛的用途，包括化妝品、醫(yī)藥和食品[27-28]。食用菌菌絲體、子實(shí)體和濾液中的多糖、糖蛋白、多肽、萜類和麥角甾醇等活性成分具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性。早在20世紀(jì)60年代Chihara[29]就首次對食用菌活性成分多糖的抗腫瘤活性進(jìn)行了評價，Kim等[30-31]從桑黃子實(shí)體中分離到一種糖蛋白，其不僅在體外選擇性地刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的增殖，而且顯著地提高了抗腫瘤的信息化學(xué)物質(zhì)（NO和H2O2）的產(chǎn)生。Kim等[32]還證明了桑黃子實(shí)體中的提取物顯著增加了B細(xì)胞增殖，刺激巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子和一氧化氮。此外，從桑黃深層發(fā)酵菌絲體中的提取物通過促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖和增加細(xì)胞因子TNF-α和信息化學(xué)物質(zhì)一氧化氮的產(chǎn)生在體內(nèi)表現(xiàn)出抗腫瘤活性[33-35]。但是對發(fā)酵菌絲三萜還缺乏比較系統(tǒng)的藥理研究。

以鮑姆纖孔菌（Sanghuangporus baumii）發(fā)酵的菌絲體作為研究對象，考慮到栽培需要更多的時間來產(chǎn)生子實(shí)體，利用固態(tài)菌絲體獲得生物活性成分是目前比較適用的方法，也被用作膳食補(bǔ)充劑或保健品的來源[36]。結(jié)果表明鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜對巨噬細(xì)胞RAW264.7的細(xì)胞沒有毒性，并且不同的濃度可以提高細(xì)胞中溶菌酶、谷胱甘肽、糖原的含量，但是并不是隨著濃度升高呈依懶性的增長，與一些多糖的作用結(jié)果不同[37]。有些化合物通過多種途徑起作用，有些化合物的作用機(jī)理尚未明確[38]，有可能是由于發(fā)酵菌絲三萜為混合物，里面含有的不同單體對細(xì)胞的作用有所抑制。對ATP酶試驗(yàn)中，隨著化合物濃度增加，其ATP酶含量有所減小，有可能是在激活小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的過程中，同時存在較高水平的糖酵解[39]，需要較高的能量分解，隨著化合物濃度的增加糖分解速度加大，導(dǎo)致ATP酶含量有所減少。

在分泌一氧化氮試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)高濃度的發(fā)酵菌絲三萜可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞產(chǎn)一氧化氮的能力；鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜可以抑制小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)細(xì)胞因子，在設(shè)計的空白組、LPS模型組和藥物對照組中，發(fā)現(xiàn)在脂多糖誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)細(xì)胞因子的過程中，模型組與空白組相比細(xì)胞因子的分泌會增加，而加入地塞米松的藥物對照組與LPS模型組相比，會抑制其分泌過多的細(xì)胞因子。這說明鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲三萜可以緩解巨噬細(xì)胞進(jìn)入過度激活的狀態(tài)，在一定程度上可以保護(hù)巨噬細(xì)胞。

目前對鮑姆纖孔菌研究仍不夠深入，有必要對其進(jìn)行活性成分系統(tǒng)研究，探索其有效成分與菌齡、菌種、培養(yǎng)條件和藥效的關(guān)系[40]。分離純化鮑姆纖孔菌發(fā)酵菌絲其他組分，明確鮑姆纖孔菌不同的有效成分在提高人體免疫機(jī)能，預(yù)防和治療疾病方面的作用機(jī)制。這些深入細(xì)致的基礎(chǔ)研究對合理地開發(fā)利用其在提高機(jī)體免疫力及其他藥理活性方面的價值有著非常重要的意義。