沈婷婷 頓珠次仁 蔡瑛 裴歡歡 楊春艷** 嚴(yán)志宏

（1.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330000；2.西藏藏醫(yī)藥大學(xué)，西藏 拉薩 850000）

藏菖蒲(Acorus calamus L.)是天南星科的一種多年生水生草本植物，又名水菖蒲、白菖蒲、大菖蒲、泥菖蒲、臭菖蒲［1］。藏菖蒲葉形似劍，故稱“蒲劍”，生長(zhǎng)在水邊，因此又稱“水劍”。藏菖蒲呈扁圓柱形，略彎曲，長(zhǎng)4cm～20cm，直徑0.8cm～2cm，表面灰棕色至棕褐色，節(jié)明顯，節(jié)間長(zhǎng)0.5cm～1.5cm，具縱皺紋，一面具密集圓點(diǎn)狀根痕；葉痕呈斜三角形，左右交互排列，側(cè)面莖基痕周圍常殘留有鱗片狀葉基和毛發(fā)狀須根。質(zhì)硬，斷面淡棕色，內(nèi)皮層環(huán)明顯，可見眾多棕色油細(xì)胞小點(diǎn)。原產(chǎn)于中國(guó)和日本，現(xiàn)在分布于世界各地。

藏菖蒲味苦、辛，性溫、燥、銳，歸心、肝、胃經(jīng)，具有溫胃、消炎止痛的作用，可用于補(bǔ)胃陽，治療消化不良，食物積滯，白喉，炭疽等［2］。藏菖蒲中含有萜類、苯丙素類、黃酮類、生物堿類、有機(jī)酸類、甾體類、醌類、糖類、氨基酸類、微量元素等成分，具有良好的抗炎促愈、抗氧化、保肝、驅(qū)蟲、降血糖血脂、抑菌、抗癌、祛痰、平喘鎮(zhèn)咳、解痙、抗心律失常、防輻射、抗驚厥、催眠作用，且具有一定的毒性［3～11］。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)藏菖蒲的化學(xué)成分研究主要是通過水蒸氣蒸餾法提取精油，并對(duì)精油進(jìn)行氣質(zhì)鑒定，該方法耗材大，且耗時(shí)長(zhǎng)，操作復(fù)雜。文章采用超高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UHLC-QTOF-MS)對(duì)藏菖蒲甲醇提取物化學(xué)成分進(jìn)行鑒定，快速，便捷，靈敏度高，節(jié)約能源，能夠較全面地提供各峰的組成，為今后藏菖蒲相關(guān)藥品開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與藥材

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

超高效液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(ABSCIEX Triple TOF 5600+)，配有電噴霧離子源(ESI)、Analyst 1.6 色譜工作站和PeakView等質(zhì)譜分析軟件(AB SCIEX 公司) ；Nexera UPLC LC-30A 超高效液相色譜儀(日本島津公司)；TE612-L 型電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)。甲醇、乙腈(色譜純，F(xiàn)isher 公司)；其余試劑均為分析純。

1.2 藥材

藏菖蒲藥材采于西藏。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

取0.2g 剪碎后的藏菖蒲于10mlEP 管內(nèi)，加入5ml 50%甲醇水溶液，在40℃，90Hz 條件下超聲提取40min，靜置5min 后，取上清液于1ml 離心管中，放入高速離心機(jī)中以13000r/min 離心10min，過0.22um 微孔濾膜，備用。

2.2 色譜條件

色譜柱為C18(1.8μm，2.1*100mm)；柱溫為40℃；流速為0.25ml/min；進(jìn)樣量為2μl；流動(dòng)相采用乙腈-0.1%甲酸水溶液的梯度洗脫程序，具體見表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序

2.3 質(zhì)譜條件

離子化模式為電噴霧正離子模式，離子源電壓分別為5500V，離子源溫度為600℃，去簇電壓（DP）分別為100 V，碰撞能量（CE）分別為35eV，碰撞能量擴(kuò)展（CES）分別為15eV。霧化氣體為氮?dú)?，輔助氣1 為60 PS I，輔助氣2 為50 PSI，氣簾氣為40 PSI。一級(jí)質(zhì)譜母離子掃描范圍為50～1000，IDA 設(shè)置響應(yīng)值超過100 cps 的6 個(gè)最高峰進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜掃描，子離子掃描范圍為50～1000，開啟動(dòng)態(tài)背景扣除（DBS）。

離子化模式為電噴霧負(fù)離子模式，離子源電壓分別為-4500V，離子源溫度為500℃，去簇電壓（DP）分別為100 V，碰撞能量（CE）分別為-35 eV，碰撞能量擴(kuò)展（CES）分別為15eV。霧化氣體為氮?dú)?，輔助氣1為60 PS I，輔助氣2 為50 PSI，氣簾氣為40 PSI。一級(jí)質(zhì)譜母離子掃描范圍為50～1000，IDA 設(shè)置響應(yīng)值超過100 cps的6個(gè)最高峰進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜掃描，子離子掃描范圍為50～1000，開啟動(dòng)態(tài)背景扣除（DBS）。

2.4 數(shù)據(jù)分析

通過查找有關(guān)天南星科植物藏菖蒲化學(xué)成分文獻(xiàn)建立藏菖蒲化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫，制作藏菖蒲化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(包括名稱、分子量、分子式等)，使用PeakView 軟件中的XIC Manager 功能建立藏菖蒲已知化學(xué)成分的XIC 數(shù)據(jù)庫，在使用Show 功能后對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。數(shù)據(jù)按照以下方法處理：首先，根據(jù)實(shí)際與理論相對(duì)分子質(zhì)量的偏差小于5×10-6的原則，并除去強(qiáng)度低于5000 的物質(zhì)，最終確定各色譜峰對(duì)應(yīng)化合物的分子式，在已建立的藏菖蒲化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫中檢索匹配的化合物，結(jié)合PeakView 軟件中XIC Manager 功能對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行分析，從而鑒定藏菖蒲的化學(xué)成分［12］。

2.5 化合物質(zhì)譜分析

藏菖蒲樣品在正離子模式下的UPLC-Q-TOFMS 總離子流圖見圖1。藏菖蒲樣品在負(fù)離子模式下的UPLC-Q-TOF-MS 總離子流圖見圖2。

圖1 藏菖蒲甲醇提取物正離子模式下總離子流圖

圖2 藏菖蒲甲醇提取物負(fù)離子模式下總離子流圖

藏菖蒲具體成分詳情見下表。

表2 藏菖蒲化學(xué)成分

（表2）續(xù)

（表2）續(xù)

3 小結(jié)

文章采用超高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UHPLC-Q-TOF-MS)對(duì)藏菖蒲的化學(xué)成分進(jìn)行快速分析，該方法靈敏度高，準(zhǔn)確性好，操作簡(jiǎn)單。檢測(cè)出的83種物質(zhì)主要為萜類物質(zhì)，萜類物質(zhì)具有良好的抑菌效果，該抗菌活性可以指導(dǎo)一系列藏菖蒲相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)，如抗菌藏菖蒲香皂。