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        2020年廣東省動(dòng)物飼料中4種主要霉菌毒素污染調(diào)查

        2021-05-06 08:56:22李孟聰丁燕玲譚磊鐘名琴陳彤宋素泉羅燕
        畜牧與獸醫(yī) 2021年5期
        關(guān)鍵詞:雞飼料豬飼料霉菌

        李孟聰,丁燕玲,譚磊,鐘名琴,陳彤,宋素泉,羅燕*

        (1. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,江蘇 南京 210095;2. 深圳市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心,廣東 深圳 518000;3. 廣東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局食用農(nóng)產(chǎn)品監(jiān)管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東 深圳 518000)

        霉菌毒素是由絲狀真菌產(chǎn)生的小分子代謝產(chǎn)物,污染廣、毒性大,嚴(yán)重危害人類(lèi)和動(dòng)物健康[1]。氣候、干燥程度、處理、包裝和運(yùn)輸條件不當(dāng)都會(huì)導(dǎo)致谷物飼料易生霉菌并產(chǎn)生霉菌毒素污染[2]。研究表明,飼料霉菌毒素的污染非常普遍,而且廣泛存在著多種霉菌毒素混合污染的現(xiàn)象[3-4]。不同的霉菌毒素會(huì)攻擊不同的靶器官,從而表現(xiàn)出復(fù)雜的、全身性嚴(yán)重中毒[5]。

        歐盟是目前對(duì)全球食品、飼料安全要求最高的組織,其發(fā)布的相關(guān)規(guī)定中嚴(yán)格明確了主要霉菌毒素的限量,如:黃曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)限制范圍為2~12 ng/g,脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)為200~750 ng/g[6]。我國(guó)也制定了嚴(yán)格的法律法規(guī),尤其是對(duì)于飼料中普遍污染且毒性危害嚴(yán)重的AFB1、伏馬毒素B1(fumonisin B1,F(xiàn)B1)、玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)及DON[7],均從豬、反芻動(dòng)物、禽、水產(chǎn)等不同動(dòng)物種類(lèi)以及仔畜期、泌乳期等不同時(shí)期的適用飼料進(jìn)行了詳細(xì)的限量規(guī)定。然而由于部分小型企業(yè)認(rèn)知水平和技術(shù)的局限,霉菌毒素污染飼料的現(xiàn)象仍是層出不窮。王金勇等[8]在2016年采集的豬飼料樣品中發(fā)現(xiàn)DON存在100%的陽(yáng)性率,最高濃度可達(dá)4 878 μg/t。同時(shí)王金勇的調(diào)查報(bào)告還表示家禽飼料中的ZEN、FB1的檢出情況也值得關(guān)注(最高檢出值分別達(dá)1 588、6 587 μg/t)。朱風(fēng)華等[9]2019年研究表明,山東省禽飼料中AFB1污染嚴(yán)重,豬飼料中ZEN的陽(yáng)性樣本超過(guò)20.83%。但是值得注意的是,即使飼料中的霉菌毒素沒(méi)有超過(guò)最大允許水平,污染的飼料仍可導(dǎo)致動(dòng)物慢性中毒[10],對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能產(chǎn)生不利影響,對(duì)畜牧養(yǎng)殖造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

        因此,使用可行的技術(shù)方法定期監(jiān)測(cè)飼料中霉菌毒素污染水平對(duì)于我國(guó)畜禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展是極其重要的。目前較為成熟的檢測(cè)方法包括:固液萃取(SLE)、液液萃取(LLE)、超臨界流體萃取(SFE)、免疫親和柱(IAC)等制備飼料樣品和色譜分離分析[11],其中液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)的開(kāi)發(fā)和使用在近些年取得了重大進(jìn)展,不僅能夠檢測(cè)出極低霉菌毒素的含量,而且還具有更好的重復(fù)性和準(zhǔn)確性,是目前我國(guó)霉菌毒素檢測(cè)的最常用技術(shù)[12]。為了解2020年廣東省動(dòng)物飼料中AFB1、FB1、ZEN和DON 4種主要霉菌毒素的污染情況,本調(diào)查采用LC-MS/MS方法、檢測(cè)了共196份來(lái)自豬、雞、水產(chǎn)動(dòng)物和寵物的飼料樣品,并對(duì)不同動(dòng)物飼料霉菌毒素污染情況進(jìn)行分析。

        1 材料與方法

        1.1 樣品采集

        樣品收集按照文獻(xiàn)[13]的要求執(zhí)行,分別于深圳市多家飼料生產(chǎn)企業(yè)收集動(dòng)物飼料及原材料樣品至少500 g,其中豬飼料88份,雞飼料30份、水產(chǎn)動(dòng)物飼料24份、寵物用飼料54份。將飼料及原料樣品盡量粉碎并充分混勻,制備成能通過(guò) 0.45 mm實(shí)驗(yàn)篩的待測(cè)樣。分裝部分樣品直接用于檢測(cè),其余樣品密封后置于-20~-16 ℃長(zhǎng)期保存。

        1.2 霉菌毒素檢測(cè)

        1 g飼料(精確至0.05 g)和10 mL提取液于多管渦旋混合器上2 000 r/min,15 min,超聲后以9 000 r/min離心,得到待檢測(cè)的上清液。取上清液2.5 mL保持1滴/s的速度通過(guò)微孔濾膜,收集全部濾液。取2.5 mL濾液用氮吹儀干燥后,蒸餾水定容至1.0 mL,直接用于Waters液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定分析。色譜柱為ACQUITYUPLC BEH C18(規(guī)格:3.0 mm×100 mm×1.7 μm),恒溫40 ℃,速度0.35 mL/min,進(jìn)樣量5.0 μL。A流動(dòng)相為乙腈,B流動(dòng)相為0.1%甲酸。 洗脫:0~1.50 min,5%A;1.50~4.00 min,30%A;4.00~8.00 min,50%A;10.00~10.01 min,95%A;10.01~12.00 min,重新改回5%A。質(zhì)譜選擇ESI,采用正離子掃描AFB1、FB1、ZEN、DON 4種霉菌毒素;毛細(xì)管電壓為0.5 kV;離子源溫度定為600 ℃;脫溶劑氣溫度500 ℃和氣流速900 L/h;錐孔氣流速:50 L/h。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 動(dòng)物飼料及原料樣品中霉菌毒素污染總體情況

        對(duì)隨機(jī)抽取到的196份樣品中AFB1、FB1、ZEN和DON的污染情況逐一進(jìn)行檢測(cè)。在196份樣品檢測(cè)中,僅有25%(49份)不存在4種霉菌毒素的污染;存在1種霉菌毒素的樣品有24份,占12.24%;受到2種霉菌毒素污染的樣品共有14份,占7.14%;而存在3種及以上霉菌毒素的樣品有110份,占56.12%。說(shuō)明飼料中多種霉菌毒素的混合污染現(xiàn)象較為普遍。

        2.2 豬飼料中霉菌毒素污染情況

        表1總結(jié)了抽檢到的豬飼料樣品中霉菌毒素的污染情況。抽檢的88份豬飼料樣本中AFB1、FB1、ZEN、DON限量標(biāo)準(zhǔn)參照最新版飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB 13078—2017)[14]。豬飼料中檢出率最高的為DON、FB1,其陽(yáng)性檢出率分別達(dá)85.23%、82.95%,而且DON還保持了較高的超標(biāo)率,在4種霉菌毒素中超標(biāo)率排第2。ZEN的陽(yáng)性檢出率和超標(biāo)率也可高達(dá)76.14%、14.93%。抽檢發(fā)現(xiàn),雖然AFB1的陽(yáng)性檢出率不高(38.67%),但是其陽(yáng)性最高檢出值是限量標(biāo)準(zhǔn)4倍,超標(biāo)率在4種霉菌毒素中最高,達(dá)20.59%。檢測(cè)結(jié)果說(shuō)明,目前廣東省豬飼料中霉菌毒素污染仍較嚴(yán)重,對(duì)DON、AFB1的污染需要重點(diǎn)關(guān)注。

        表1 豬飼料樣品霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

        2.3 雞飼料中霉菌毒素污染情況

        表2總結(jié)了生產(chǎn)企業(yè)中抽檢到的雞飼料樣品中霉菌毒素的污染情況。抽檢的30份雞飼料樣本中檢出率最高的為DON(83.33%),其次為FB1和ZEN,二者陽(yáng)性檢出率均為66.67%。同時(shí)雞飼料中的ZEN還存在極高的超標(biāo)率。雞飼料中AFB1的污染情況類(lèi)似于豬飼料,陽(yáng)性檢出率不高(46.67%),但是超標(biāo)率較高,達(dá)14.29%。因此飼料生產(chǎn)企業(yè)對(duì)于雞飼料中ZEN和AFB1污染還需要進(jìn)行更嚴(yán)格細(xì)致的管控。

        表2 雞飼料霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

        2.4 水產(chǎn)飼料中霉菌毒素污染情況

        有研究指出,廣東省每年生產(chǎn)水產(chǎn)飼料約531萬(wàn)t,是我國(guó)最主要的水產(chǎn)飼料生產(chǎn)大省[15]。表3總結(jié)了抽檢到的水產(chǎn)飼料樣品中霉菌毒素的污染情況。研究發(fā)現(xiàn)24份水產(chǎn)飼料的檢測(cè)結(jié)果要明顯優(yōu)于動(dòng)物用飼料。24份飼料中,有6份未檢測(cè)到AFB1、FB1、ZEN、DON。其余18份飼料中FB1和DON檢出率均較低(<30%),ZEN的陽(yáng)性檢出率為50%,且3種霉菌毒素超標(biāo)樣本數(shù)均為0。樣本中檢出率最高的為AFB1(62.50%),其超標(biāo)率為12.5%。以上結(jié)果提示廣東省對(duì)水產(chǎn)飼料質(zhì)量管控工作較到位,水產(chǎn)飼料的霉菌毒素污染整體水平較低。

        表3 水產(chǎn)動(dòng)物飼料樣品霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

        2.5 寵物飼料中霉菌毒素污染情況

        表4總結(jié)了抽檢到的寵物用飼料樣品中霉菌毒素的污染情況。54份寵物用飼料樣本中犬糧有32份。寵物飼料中4種霉菌毒素檢出水平較相似,基本都在50%左右。ZEN、DON的污染含量均未超標(biāo)。但AFB1的污染超標(biāo)現(xiàn)象極為嚴(yán)重,陽(yáng)性樣品中僅有4份未超標(biāo)、陽(yáng)性樣品最高值甚至是國(guó)家允許限量的12倍。此外,值得注意的是,新版GB 13078—2017沒(méi)有明確界定FB1在寵物飼料中的限量標(biāo)準(zhǔn)??傊畬?duì)于寵物飼料中霉菌毒素污染的管控工作,還需要采取更嚴(yán)格的管理措施、減輕霉菌毒素污染。

        表4 寵物飼料樣品霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

        3 討論

        出于經(jīng)濟(jì)成本的考慮,為保證養(yǎng)殖效率的最大化,越來(lái)越多的養(yǎng)殖企業(yè)傾向于使用商品化飼料[16]。但是作為飼料原料的谷物很容易受到霉菌毒素污染,當(dāng)污染谷物用于動(dòng)物飼料生產(chǎn)后,會(huì)導(dǎo)致飼料中霉菌毒素的污染。據(jù)2015—2019年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,我國(guó)飼料中廣泛存在著霉菌毒素的混合污染,其中以AFB1、FB1、ZEN、DON 4種霉菌毒素污染最為嚴(yán)重,檢出率可達(dá)90%以上[17-19]。因此,本研究在抽檢的廣東省飼料樣品中重點(diǎn)檢測(cè)了這4種霉菌毒素的污染情況。結(jié)果與近些年其他的調(diào)查報(bào)告一致,飼料中霉菌毒素共污染現(xiàn)象極為普遍,抽檢的196份飼料中,高達(dá)63%樣品存在2種及以上霉菌毒素的污染。

        雖然AFB1在豬飼料、雞飼料陽(yáng)性檢出率不高,但存在極高的超標(biāo)率。水產(chǎn)飼料、寵物飼料也存在著較高程度AFB1的污染。這種情況可能是因?yàn)閺V州地理位置的原因。我國(guó)北方的谷物以鐮孢菌污染為主, 西北地區(qū)谷物飼料一般不存在發(fā)霉變質(zhì),而長(zhǎng)江沿岸及以南地區(qū)則主要存在AFB1污染[20]。因此,廣東省及其他長(zhǎng)江以南地區(qū)應(yīng)更加關(guān)注飼料中AFB1的污染現(xiàn)象,加快技術(shù)改革,對(duì)飼料中AFB1的污染施行更嚴(yán)格的管控。另外,抽檢結(jié)果與2017年、2018年飼料霉菌毒素調(diào)查報(bào)告一致,DON在豬飼料、雞飼料、寵物飼料等都存在較高的陽(yáng)性檢出率,尤其是在豬飼料中還存在較高的超標(biāo)率[21-22]。因此對(duì)于DON在不同動(dòng)物飼料中的嚴(yán)重污染,飼料生產(chǎn)企業(yè)也應(yīng)該重點(diǎn)關(guān)注。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)ZEN和FB1在飼料中的污染水平(陽(yáng)性檢出率和超標(biāo)率)整體要低于AFB1和DON,但在不同動(dòng)物飼料中均可檢出。所以飼料生產(chǎn)企業(yè)也不能放松對(duì)其污染的管控。雞飼料中ZEN的污染仍需引起重視,其超標(biāo)率高達(dá)20%。寵物飼料中FB1的污染和造成的毒害作用大也需進(jìn)一步詳細(xì)研究,以保證能夠更科學(xué)地規(guī)范寵物飼料中FB1的限量。

        與農(nóng)藥、防腐劑和其他飼料添加劑等人為毒素相比,大多數(shù)霉菌毒素在化學(xué)上非常穩(wěn)定,作為一種天然毒素,對(duì)飼料的污染難以控制[23]。從檢測(cè)結(jié)果可以看出,75%的飼料中都可以檢測(cè)到霉菌毒素的存在,并且大多數(shù)飼料均表現(xiàn)為霉菌毒素共污染。雖然相比較2019年間高達(dá)100%的檢出率,飼料中霉菌毒素的污染情況已有明顯好轉(zhuǎn)[24]。但是對(duì)于畜牧養(yǎng)殖仍存在較大風(fēng)險(xiǎn),這提醒我們?nèi)砸攸c(diǎn)關(guān)注霉菌毒素污染造成的不良后果,加快技術(shù)改革,加強(qiáng)法規(guī)監(jiān)管,精準(zhǔn)預(yù)防并控制谷物原材料及飼料生產(chǎn)鏈中霉菌毒素的污染,保障動(dòng)物養(yǎng)殖和食品安全。

        4 結(jié)論

        抽檢廣東省飼料生產(chǎn)企業(yè)的196份飼料,結(jié)果表明豬飼料和雞飼料中AFB1和 DON污染較為嚴(yán)重,ZEN、FB1的陽(yáng)性檢出率也處于較高水平;寵物飼料中廣泛存在霉菌毒素混合污染;水產(chǎn)飼料的霉菌毒素污染管控工作最到位,平均霉菌毒素污染水平較低。飼料生產(chǎn)及養(yǎng)殖業(yè)在未來(lái)工作中應(yīng)繼續(xù)加強(qiáng)對(duì)各類(lèi)霉菌毒素的控制、更有力地保障畜禽健康養(yǎng)殖和人類(lèi)的食品安全。

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